类风湿关节炎合并牙周疾病患者的IL⁃17A表达

2016-12-16赵琳徐京京王晓非张晓莉

中国医科大学学报 2016年12期

关键词：类风湿牙周牙龈

赵琳，徐京京，王晓非，张晓莉

（中国医科大学附属盛京医院风湿免疫科，沈阳 110004）

类风湿关节炎合并牙周疾病患者的IL⁃17A表达

赵琳，徐京京，王晓非，张晓莉

（中国医科大学附属盛京医院风湿免疫科，沈阳 110004）

目的通过测定血清及牙龈液中白细胞介素（IL）17A的水平并分析其临床意义，了解类风湿关节炎（RA）与牙周病变的关系。方法采用ELIAS检测方法分别检测初诊的RA合并慢性牙周炎（CP）患者20例（RA+CP组），RA患者20例（RA组），CP患者20例（CP组），健康者20例（H组）血清及牙龈液的IL⁃17A水平。结果RA+CP组、RA组、CP组、H组的血清IL⁃17A水平分别为（66.6±24.98）、（46.58±8.50）、（31.35±5.10）和（29.25±5.50）pg/mL；RA+CP组、RA组、CP组、H组的牙龈液IL⁃17A水平分别为（25.71±5.1）、（19.97±4.95）、（18.85±5.36）和（15.38±4.36）pg/mL。RA+CP组患者血清IL⁃17A水平与抗环瓜氨酸肽抗体（抗⁃CCP）呈正相关性（r=0.446，P＜0.05），RA+CP组患者牙龈液IL⁃17A水平与抗⁃CCP呈正相关性（r=0.517，P＜0.05）；RA+CP组患者在红细胞沉降率（ESR）、C⁃反应蛋白（CRP）、类风湿因子（RF）、抗⁃CCP、疾病活动性评分（DAS28）、健康评估问卷（HAQ）方面高于RA组。结论RA可能加重患者的牙周病变；牙周疾病可能对RA有促进作用。

类风湿关节炎；白细胞介素17A；慢性牙周疾病

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类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种病因未明的慢性破坏性炎症疾病。它影响着0.5%～1%的世界人口，女性患RA概率是男性的3倍左右［1］。牙周疾病是由微生物感染引起宿主反应的慢性炎性疾病。它的发病、进展和严重程度与牙周微生物同宿主的免疫反应相关［2⁃3］。RA和慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）都是慢性炎性疾病，且患有CP的患者同时合并有RA的情况大量增加［4⁃5］。在这种背景下，CP与RA的关系可以从炎性因子水平及病情活动度等方面研究［6］。本研究的目的是通过评估临床牙周参数和血清、牙龈液的细胞因子白细胞介素（interleukin，IL）17A水平，了解RA与CP之间的关系。

1　材料与方法

1.1一般资料

选取2014年12月至2015年12月就诊于我院风湿免疫科并确诊RA的患者40例，均符合2009年美国风湿病学会（ACR）提出的RA诊断标准；就诊于口腔科并确诊CP患者20例，均符合美国牙周病学的分类标准：包括牙齿缺如情况、探测深度（prob⁃ing depth，PD）＞3 mm、附着丧失（clinical attachment level，CAL）、探诊出血（bleeding on probing，BOP）这几方面；健康组20例来自我院体检科。CP的标准为至少有4个牙囊袋深度≥5 mm，与临床CAL水平同时≥2 mm［7］。排除标准：实验前6个月期间有牙周治疗的历史；＜15齿；糖尿病或妊娠、感染、肝炎、结核等系统疾病；干燥综合征（包括SSA/SSB阳性）及其他口腔疾病。RA合并CP患者20例（RA+CP组），RA无CP患者20例（RA组），CP患者20例（CP组），健康者20例（H组）；4组性别、年龄、病程差异无统计学意义。

使用威廉姆斯牙周探针进行临床牙周参数评估［8］：（1）牙齿数目存在；（2）PD；（3）CAL；（4）牙龈菌斑块指数；（5）BOP。PD是威廉姆斯探针在6个牙周位点（智齿除外）的探测值，该6个牙周位点包括：（1）近中颊侧；（2）中颊侧；（3）远中颊侧；（4）近中舌侧；（5）中舌侧；（6）远中舌侧。

红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR），C⁃反应蛋白（C⁃reactive protein，CRP）、类风湿因子（rheumatoid factor，RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（an⁃ti⁃cyclic cirullinated peptide antibodies，抗⁃CCP）等均来至我院实验室检查结果；疾病活动性评分（dis⁃ease activity score in 28，DAS28）；健康评估问卷（health assessmeat questionnaire，HAQ）；吸烟情况根据提供的信息记录。4组患者临床的牙周特征和人口统计学变量和控制对象见表1。该研究适合伦理委员会批准使用的人体研究。

表1　人口统计学、临床和实验室特征（x±s，n=20）Tab.1　Demographic，clinical and laboratory characteristics（x±s，n=20）

1.2方法

血清、牙龈液中IL⁃17A的测定：清晨抽取空腹实验者的静脉血2 mL，4℃放置自然凝固，3 000 r/ min离心10 min，分离血清置于-20℃冰箱冻存。所有牙龈液标本均从最深的牙周袋采集，且每一个样本采集为同一采集牙龈液位点。在采集牙龈液样本之前，先拭干采集点唾液，并用无菌棉花球隔绝唾液，再用无菌棉花球祛除牙龈菌斑；在采集牙龈液的位点插入粗细型号为30号吸潮纸带1 min。然后将5个位点一共5支含有牙龈液的吸潮试纸放于含有磷酸缓冲盐200 μL的无菌微型离心管，统一冻存在-80℃的冰箱里，等待下一步处理。应用ELISA法同批检测血清及牙龈液中IL⁃17A水平，试剂盒购自美国R&D公司，具体操作步骤严格按实际盒说明书进行，在450 nm波长下测定OD值。以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制出标准曲线图并计算样本浓度。

1.3统计学分析

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据均采用x±s，2组之间比较采用t检验；计数资料用百分比表示，组间比较采用χ2检验或Fish⁃er精确概率法。各组间比较采取单因素方差分析，检验方差齐性，方差齐采用LSD和SNK检验比较2组差异。血清及牙龈液IL⁃17A与ESR、CRP、RF、抗⁃CCP、DAS28评分、HAQ评分进行直线相关性分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.14组血清及牙龈液IL⁃17A表达水平比较

如表2所示，对4组的血清及牙龈液IL⁃17A水平进行检查发现，RA+CP组、RA组、CP组、H组的血清IL⁃17A水平分别为（66.6±24.98）、（46.58±8.50）、（31.35±5.10）、（29.25±5.50）pg/mL，RA+CP组与RA组、CP组、H组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。RA+CP组、RA组、CP组、H组的牙龈液IL⁃17A水平分别为（25.71±5.1）、（19.97±4.95）、（18.85±5.36）、（15.38±4.36）pg/mL，RA+CP组与RA组、CP组、H组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2RA+CP组、RA组、CP组、H组血清及牙龈液IL⁃17A表达水平比较Tab.2　Comparison of serum and gingival fluid IL⁃17A expres⁃sion levels of rheumatoid arthritis with periodontitis group，rheumatoid arthritis group，periodontitis group，and healthy group（x±s，n=20）

Group　Peripheral serum　Gingival fluid IL⁃17A（pg/mL）　IL⁃17A（pg/mL）RA+CP　66.6±24.98　25.71±5.10 RA　46.58±8.501），2）　19.97±4.951），2）CP　31.35±5.102）　18.85±5.362）H 29.25±5.502）　15.38±4.362）

2.2RA+CP组和RA组的IL⁃17A水平与临床指标的相关性分析

通过对RA+CP组和RA组2组ESR、CRP、RF、抗⁃CCP、DAS28评分、HAQ评分等指标进行分析，发现RA+CP组血清IL⁃17A水平与抗⁃CCP呈正相关性（r=0.446，P＜0.05），RA+CP组牙龈液IL⁃17A水平与抗⁃CCP呈正相关性（r=0.517，P＜0.05）。RA+CP组的ESR、CRP、RF、抗⁃CCP、DAS28评分、HAQ评分均都高于RA组，但是2组比较均无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

3　讨论

RA与CP有很多相似之处，这2种疾病都是慢性破坏性的炎性疾病。对于牙周致病菌与RA之间的密切联系，尤其是牙龈卟啉单胞菌的研究最有价值，因为它是唯一分泌肽酰基精氨酸脱亚氨酶（pep⁃tidylarginine deiminase，PAD）的原核生物。它通过分泌毒力因子牙龈素，与PAD相互作用进入人体成为抗原，人体免疫系统与之反应，产生抗⁃CCP，有可能引起自身免疫反应［9］。CP和RA可能有潜在的共同之处［10⁃11］，有研究［12］发现RA患者患有CP的概率是只有CP患者的8.05倍，同时另一个研究［13］也发现全部是RA患者的人群中RA患者患有CP是只患有RA的1.82倍。由此可见RA患者可能更加容易患有CP。有研究［14］发现CP的炎症程度可能是独立于细菌感染之外的，是免疫功能的紊乱导致了CP的进一步发展，进而加重病情活动［15］。也有部分研究［16⁃17］结果显示RA患者牙周状况较健康对照组差很多。同时越来越多的证据［11⁃14，18］表明RA与CP可能共享致病因素，包括促炎和抗炎细胞因子的不平衡。进一步研究［19］报道称RA和CP都存在一部分具体的血清促炎性因子和抗炎细胞因子的失衡。其中典型促炎因子IL⁃17A，它是主要由TH17细胞产生的促炎效应因子，功能主要是促进炎性反应［20］。有研究［21⁃22］表明在RA中IL⁃17A的表达是明显上调的。LESTER等［23］通过酶联免疫吸附实验法发现重度CAL牙龈位点的IL⁃17A水平明显升高。JAVED等［24］研究发现在RA合并CP的患者牙龈液中有大量的炎性因子包括TNF⁃a、IL⁃1等。还有部分研究［17，25］同样发现CP患者、RA合并CP患者的牙龈液中细胞因子种类和含量是不同的。本研究发现RA合并CP的患者的牙周参数PD、CAL高于CP组。同时发现RA合并CP的患者血清、牙龈液中IL⁃17A的水平较高，高于RA组、CP组、H组。研究还显示出RA合并CP患者血清及牙龈液的IL⁃17A水平与抗⁃CCP呈正相关。同时发现RA合并CP的血清及牙龈液的IL⁃17A表达水平、ESR、CRP、RF及抗⁃CCP、DAS28、HAQ高于RA组。这些发现说明RA对CP病情可能有一定影响；同时CP对RA的病情也可能有一定促进作用。

表3　RA+CP组，RA组的IL⁃17A水平与临床指标比较（Tab.3　Comparison of IL⁃17A level and clinical parameters in patients of rheumatoid arthritis with periodontitis group and rheumatoid ar⁃thritis group（x±s，n=20）

Group　CRP（mg/L）　ESR（mm/h）　RF（U/mL）　Anti⁃CCP（AU/mL）　DAS28　HAQ RA+CP　16.15±15.88　33.80±18.13　75.29±70.39　469.88±424.80　5.20±0.56　3.15±0.81 RA　13.53±12.60　30.75±16.69　58.26±54.84　260.60±252.33　5.03±0.44　2.65±0.99 P＞0.05　　＞0.05　　＞0.05　　＞0.05　　＞0.05　　＞0.05

综上所述，RA对CP病情可能有一定影响，CP对RA的病情也可能存在一定促进作用。本研究的不足之处是不能完全排除2种疾病的炎症相互叠加导致的相关改变，对此需要进一步研究以明确其关系。同时，纳入本研究的样本筛选及样本量可能不足，从而导致结论的局限性和偏倚。在今后的临床实践过程中，将继续纳入、整理和分析相关的资料，并对其研究归纳总结。

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（编辑于溪）

Expression of IL⁃17A in Rheumatoid Arthritis Patients with Periodontal Disease

ZHAO Lin，XU Jingjing，WANG Xiaofei，ZHANG Xiaoli
（Department of Rheumatology，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

ObjectiveThe level of IL⁃17A in serum and gingival fluid was measured and the clinical significance was analyzed，so as to under⁃stand the relationship between rheumatoid arthritis（RA）and periodontal lesions.MethodsThe study participants included 20 patients with RA and CP，20 patients with RA，20 patients with RA，20 patients with CP，and 20 healthy controls.All groups were balanced for age，sex，and smok⁃ing status.The expression levels of IL⁃17A in serum and gingival fluid of the four groups were determined by ELISA method.ResultsThe level of serum IL⁃17A in RA+CP group，RA group，CP group and H group respectively 66.6±24.98，46.58±8.50，31.35±5.10，and 29.25±5.50 pg/mL；RA+CP group，RA group，CP group，H group of gingival fluid IL⁃17A levels were 25.71±5.1，19.97±4.95，18.85±5.36，and 15.38±4.36 pg/mL. The level of serum IL⁃17A and anti⁃CCP of patients in the RA+CP group had positive correlation（r=0.446，P＜0.05），and the level of gingival fluid IL⁃17A and anti⁃CCP of patients in the RA+CP group had positive correlation（r=0.517，P＜0.05）.Compared with RA group，the visible clinical laboratory ESR，CRP，RF，anti⁃CCP，DAS28 and HAQ scores of RA+CP group were increased.ConclusionRheumatoid arthritis may exacerbate the periodontal disease in patients with periodontal disease.On the other hand，periodontal disease may also promote rheumatoid arthri⁃tis.

rheumatoid arthritis；interleukin⁃17A；chronic periodontal disease

R593.2

0258-4646（2016）12-1115-04

10.12007/j.issn.0258⁃4646.2016.12.013

辽宁省科学技术计划（2014225017）

赵琳（1989-），女，硕士研究生.

张晓莉，E-mail：zhangxl3@sj⁃hospital.org

2016-05-06

网络出版时间：