H PLC特征图谱用于传统砂锅与电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤的比较

李佳凤

（福建省妇幼保健院，福建 福州 350001）

H PLC特征图谱用于传统砂锅与电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤的比较

李佳凤

（福建省妇幼保健院，福建 福州 350001）

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定传统砂锅与电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤的指纹图谱，并对其进行对比研究，考察电陶瓷煎药壶与传统砂锅煎煮汤剂的差别。方法：应用传统砂锅与电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤，汤药浓缩后比较形态，干燥后考察得膏率；应用红外光谱测定仪测定红外光谱，分析电煎药壶煎煮所得浸膏是否引起基团的变化；HPLC建立指纹图谱，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）”分析两种汤剂的相似度。结果：电陶瓷煎药壶煎出的汤剂浓缩后稠膏呈胶冻状，浓缩干燥成浸膏粉末后，平均质量为92.11 g，传统砂锅煎煮出的汤剂浓缩后呈稠厚糖浆状，浓缩干燥成浸膏粉末后，平均质量94.20 g，略多于电陶瓷煎药壶。两种方法煎煮的汤药红外光谱一致，没有发现异常基团；HPLC指纹图谱的相似度大于0.90，两者色谱峰的数量、峰形和保留时间没有明显差别，共有峰11个。结论：建立的HPLC指纹图谱从整体上反映出汤药的化学成分信息，两种不同方法煎煮出的汤药HPLC图谱相似度大于 0.90，没有显著差别，红外光谱未见异常基团，电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤的汤药与传统砂锅一致，可用于上下相资汤的煎煮。

上下相资汤；砂锅；电煎药壶；高效液相指纹图谱；比较

中药方剂成分复杂，普遍含有生物碱、皂苷、挥发油等多种物质，传统以砂锅煎煮汤剂为主，各药按处方调配后，一起煎煮，取协同之效，历代医书对煎煮的时间和火候进行了严格的规定，以保证处方达到预计的效果，砂锅煎煮是沿袭千年的习惯。但随着时代的进步，群众生活节奏的加快，现代化技术呈现日新月异的发展，孕育而生的中药煎药机因为其便利的优势，正逐步取代传统砂锅应用于中药的煎煮。现代化煎药机是否适用于传统中药汤剂的煎煮，或者优于传统的砂锅煎煮，目前这方面的研究较少。

上下相资汤出自《石室秘录·燥证门》，方由人参10 g、沙参20 g、玄参15 g、麦冬15 g、玉竹20 g、五味子 15 g、熟地黄 12 g、山萸肉 20 g、车前子15 g、牛膝 12 g等组成，全方上润肺阴，下滋肾水，子母相滋，养阴清热，固冲止血，用于经乱无期，量少淋漓不尽或量多势急，色鲜红，质稍稠的虚热型崩漏证的治疗[1]。上下相资汤源于清代名医，因其治疗妇女更年期疾病效果显著，而流传沿用至今，现代医学常经过辨证加减后衍生应用于多种妇科经期疾病，亦可收获极佳的疗效。胡茜莹[2]采用上下相资汤加减治疗“崩漏”（现代医学称为功能失调性子宫出血），发现止血效果确切，效果明显优于葆宫止血颗粒，可在临床推广应用。郑利茶等[3]报道谢萍教授运用上下相资汤辨证加减，治疗上热下寒证，效果颇佳。

中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴别手段，通过指纹特征相似程度的比较，判断真伪、评价优劣、考察稳定性和一致性，是符合中药特色的质量控制模式之一[2]。本研究通过考察传统砂锅与电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤的得膏率，红外光谱考察浸膏内各化学成分的基团稳定性，建立高效液相色谱法（HPLC）考察浸膏，应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）”比较分析指纹图谱，分析比较电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤的汤药与传统砂锅的区别。

1　材料与仪器

1.1材料

人参、沙参、玄参、麦冬、玉竹、五味子、熟地黄、当归、山茱萸、车前子、牛膝等药材为饮片，购自福州市药材公司，均符合《中国药典》标准，甲醇（色谱纯，批号：1746607431，德国Merck公司）；超纯水（自制）。

1.2仪器

陶瓷煎药壶（型号：GX-500A，潮安县东凤镇广兴五金燃具厂），DL-I-15台式封闭电炉（天津市泰斯特仪器有限公司），减压干燥器（型号：20A型岛津制备高效液相色谱仪，岛津公司）。

2　方法与结果

2.1色谱条件

2.2Diamonsil C18分析柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；水为流动相A，甲醇为流动相B，梯度洗脱（0～10 min，5% ～ 10%B；10～ 20 min，10% ～30%B；20～30 min，30%～40%B；30～45 min，40%～ 50%B；45～ 50 min，50%～ 5%B）；体积流量1.0 mL/min；测定波长220 nm；柱温：室温；进样量20 μL。

2.3供试品溶液的制备

2.3.1传统砂锅煎煮称取1剂处方量饮片于砂锅中，加入650 mL饮用水 （按中医基础理论要求，浸没药材 2 cm）浸泡 30 min，武火煎煮至沸腾，转文火煎煮60 min，关火，趁热滤出，收集滤液。滤渣继续加入325 mL饮用水武火煎煮至沸腾，转小火煎煮 20 min，关火，趁热过滤，收集滤液，合并滤液。滤液浓缩成稠膏，减压干燥至恒重，制得浸膏，平行操作3剂处方，制备浸膏，编号Ⅰ1，Ⅰ2，Ⅰ3，密封备用。

2.3.2电陶瓷煎药壶煎煮称取1剂处方量饮片于煎药机中，加入 650 mL饮用水，浸泡 30 min，余下操作同传统煎煮法，平行操作3剂处方，制备浸膏，编号Ⅱ1，Ⅱ2，Ⅱ3，密封备用。

2.3.3供试品溶液的配制精密称取干燥至恒重的各份浸膏约0.5克，分别置于25 mL容量瓶中，加入超纯水，超声完全溶解后，定容，分别制得供试品溶液各25 mL，密封备用。

2.4方法学考察

2.4.1精密度试验取Ⅰ1浸膏制得的供试品溶液适量，按“2.1”项的色谱条件连续进样5次，每次20 μL，测定指纹图谱，以生成的对照图谱为参照，计算主要色谱峰的相对保留时间和峰面积的RSD，比较相似度，结果各色谱图色谱峰RSD小于1.9%，相似度均大于0.98，表明仪器的精密度良好。

2.4.2稳定性试验精密吸取Ⅰ1供试品溶液20 μL，按“2.1”项的色谱条件，分别于 0，2，4，8，10 h测定指纹图谱，以生成的对照图谱为参照，计算主要色谱峰的相对保留时间和峰面积的RSD，比较相似度，结果各色谱图色谱峰 RSD小于1.5%，相似度均大于0.96，表明样品溶液在10 h内稳定性良好。

2.4.3重复性试验精密称取Ⅰ浸膏5份，按“2.3”项下“供试品溶液的配制”制备供试品溶液，精密吸取20 μL进样，记录指纹图谱，以生成的对照图谱为参照，计算主要色谱峰的相对保留时间和峰面积的RSD，比较相似度，结果各色谱图色谱峰RSD小于2.0%，相似度均大于0.95，表明方法重复性良好。

2.5指纹图谱的建立及分析

2.5.1供试品指纹图谱数据采集分别精密称取各种浸膏粉末各约0.1 g于10 mL容量瓶中，加入30%甲醇溶液，超声，完全溶解后，定容。按照“2.1”项下色谱条件进样20 μL，测定，记录色谱图，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）”，以对照品色谱图为参照，考察共有色谱峰的保留时间和相对峰面积，结果见表1。建立指纹图谱共有模式，评价各色谱图的相似度。

表1　传统砂锅与电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤共有峰峰面积均值及相应比值

2.5.2共有峰的标定分析比较6份上下相资汤供试品图谱，计算不同供试品色谱图中共有峰占总面积的百分比，结果显示，6份上下相资汤指纹图谱共有峰占总面积大于90%，符合要求，可进行相似度比较。

2.5.3指纹图谱共有模式及相似度评价结果应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004 A版）”分析比较砂锅煎煮和电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤指纹图谱，以砂锅煎煮的供试品Ⅰ1为参照图谱，标示两种煎煮方法所得浸膏的指纹图谱中11个共有峰，如图1，时间窗宽度为0.10，多点校正，自动匹配，采用中位数法生成对照图谱，见图2～4。分别对砂锅煎煮和电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤指纹图谱进行相似度分析，砂锅煎煮的3剂处方与对照图谱的相似度分别为0.940，0.922，0.948，色谱图见图2；电陶瓷煎药壶煎煮的3剂处方与对照图谱的相似度分别为0.986，0.938，0.955，色谱图见图3；砂锅煎煮和电陶瓷煎药壶煎煮6剂上下相资汤指纹图谱与对照图谱的相似度分别为0.907，0.916，0.906，0.995，0.965，0.904，见图 4。相似度均大于0.90，符合指纹图谱要求，可进行样品的比较。两种煎煮方法所得色谱图相似度较高，有11个共有峰。

图1　上下相资汤HPLC指纹图谱（标记11个共有峰）

图2　砂锅煎煮上下相资汤指纹图谱相似度比较

图3　电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤指纹图谱相似度比较

图4　6份上下相资汤指纹图谱相似度比较

3　红外光谱测定

分别取“2.3”项下制备的供试品干燥浸膏Ⅰ1，Ⅰ2，Ⅰ3，Ⅱ1，Ⅱ2，Ⅱ3适量于石英皿中，KBr压片，在 3 000～ 600/cm波长范围扫描，并比较 6个样品的红外光谱图，见图5。

图5　6份样品红外光谱比较

结果6份样品的红外光谱一致性很好，在3800/cm处均有最大吸收峰，推测为-OH吸收峰；在1 000/cm有强吸收峰，推测为饱和C-H键振动引起的吸收峰。在3 000～ 600/cm处指纹区的吸收峰也相同，电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤所得的浸膏没有产生异常基团，浸膏的红外光谱与砂锅煎煮的浸膏红外光谱一致，物质基础稳定。

4　结论

电陶瓷煎药壶煎出的汤剂浓缩后呈稠胶冻状，浓缩干燥成浸膏粉末后平均质量46.055 g，传统砂锅煎煮出的汤剂浓缩后呈稠厚糖浆状，浓缩干燥成浸膏粉末后，平均质量47.10 g，略多于电陶瓷煎药壶。两种不同方法煎煮的汤药HPLC指纹图谱的相似度大于0.90，两者色谱峰的数量、峰形和保留时间没有明显差别，可标示的共有峰有11个。浸膏经红外光谱仪检测发现两种煎煮方法所得浸膏的红外光谱一样，电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤不会引起物质基础的改变，适用于上下相资汤的煎煮。

5　讨论

中药汤剂是最为传统的一种制剂形式，汤剂质量的优劣直接关系到临床的治疗效果，因此处方的煎煮十分重要。自动煎药机省去了传统砂锅明火煎煮的繁琐，可方便快捷地获得汤药，但煎出的汤药是否与传统砂锅的一样，需要进行深入研究。

本文采用传统砂锅与电陶瓷煎药壶煎煮上下相资汤，发现电陶瓷煎药壶煎出的汤剂浓缩后成胶冻状，而传统砂锅煎煮出的汤剂浓缩后呈稠厚糖浆状，干燥后质量略多于电陶瓷煎药壶。从HPLC指纹图谱分析，6份样品的色谱图相似度较高，红外光谱检测也未发现差异基团，谱图一致。但两种煎煮方法所得汤药浓缩成稠浸膏后，外观状态不同，得膏率方面存在约1 g的差距，推测是因为浸膏中成分虽然相同，但所含的量具有一定的差别，为验证这一结果，应在调配处方时，精密称定各味药材，使所含饮片的质量接近，减少因投药量不同引起的误差。另外，由于对比研究的实验次数较少，所得的样品有限，为了研究结果更具有代表性，应继续研究观察该处方及其他方剂应用电煎药壶煎煮后的各类指标，积累相关数据，验证实验结论。

上下相资汤养阴清热，固冲止血，用于虚热型崩漏的治疗，属于补虚类药物，参考文献补益类药物一煎应为武火煮沸60分钟，二煎为煮沸后文火继续煎煮30分钟。按照电陶瓷煎药壶的煎煮要求，其煎煮的用水量要比传统砂锅大，为了实验的可比性，传统砂锅煎煮也使用相同的水量，因此，最终汤剂较稀，需浓缩成干燥浸膏后进行对比。

[1]张玉珍.中医妇科学[M].北京：中国中医药出版社，2007：106-115.

[2]胡茜莹.中医治疗阴虚血热型围绝经期无排卵性功能失调性子宫出血的疗效观察[J].医学理论与实践，2015，28（10）：1355-1356.

[3]郑利茶，赵美珠，陈姚宇，等.谢萍教授运用上下相资汤加减治疗上热下寒证经验[J].中医研究，2013，26（1）：39-40.

[4]白瑞，王真真.指纹图谱在中药质量控制中的应用进展[J].安徽医药，2009，13（12）：1458-1462.

[5]高学敏.中药学[M].北京：中国中医药出版社，2007.

Application of HPLC Fingerprint to Evaluation of Casserole Decoction and Electric Tisanes Pot in Boiling of Shangxia Xiangzi Tang

Li Jiafeng（Fujian Maternal and Child Health Care Hospital，Fujian Fuzhou 350001，China）

Objective：To develop the HPLC fingerprints of shangxia xiangzi tang boiled by casserole decoction and electric tisanes pot and evaluate their difference.Methods：Shangxia xiangzi tang was boiled by casserole and electric tisanes pot respectively，then concentrated and dried to calculate the yield of extract.The infrared spectrum of obtained shangxia xiangzi tang solution was determined to analyze whether decoction by electric tisanes pot caused the change of groups.The HPLC fingerprints were developed，based on which the similarities of shangxia xiangzi tang solutions bolied by casserole and electric tisanes pot were analyzed according to the Traditional Chinese Medicine（TCM）chromatographic fingerprint similarity evaluation system（2004 A）.Results：The shangxia xiangzi tang solution boiled by electric tisanes pot was in a form of thick paste，of which the weight of dry power obtained by concentration and drying was 92.11 g.However，the shangxia xiangzi tang solution bolied by casserole was in a form of thick syrup，of which the weight of dry power was 94.20 g.The infrared spectra of the two solutions were in agreement，and no abnormal groups were observed.The similarities of HPLC fingerprints of two solutions was more than 0.90，while the numbers，shapes and retention times of chromatographic peaks showed no significant difference.A total of eleven common peaks were observed.Conclusion：The developed HPLC fingerprints reflected thechemical composition of liquid forms of shangxia xiangzi tang solutions，and the similarities of the solutions boiled by two methods was more than 0.90，which showed no significant difference.No abnormal groups were observed in infrared spectra of the two solutions.Electric tisanes pot is suitable for boiling shangxia xiangzi tang.

Shangxia Xiangzi Tang；Casserole Decoction；Electric Tisanes Pot of Boiling；HPLC fingerprint；Comparison

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.12.007

李佳凤，男，副主任药师。研究方向：医药医学。通讯作者E-mail：260598487@qq.com

（2016-09-22）