上皮型钙黏蛋白1及MutL同源基因1在甲状腺癌中的表达及意义

2016-12-12陈玉涛王五俊

中国中西医结合外科杂志 2016年4期

陈玉涛，王五俊，张鹏

陈玉涛1，王五俊1，张鹏2

目的：探讨上皮型钙黏蛋白1(CDH1)及MutL同源基因1(MLH1)在甲状腺癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法：分析手术治疗且资料完整的61例甲状腺癌患者的临床资料，采用免疫组化法检测甲状腺癌组织及癌旁组织中CDH1及MLH1蛋白的表达情况，并与其临床病理学资料进行比较。结果：CDH1和MLH1在甲状腺癌组织、癌旁组织中的阳性率分别为40.98%(25/61)，81.97(50/61)和54.10(33/61)，86.89%(53/61)，CDH1及MLH1在癌组织中的表达率均显著低于癌旁组织(P＜0.05)；甲状腺癌组织中CDH1的阳性表达与淋巴结转移及肿瘤分期有关(P＜0.05)，而MLH1的表达与淋巴结转移有关(P＜0.05)。结论：CDH1和MLH1蛋白可能与甲状腺癌的发生发展有关，并可作为甲状腺癌淋巴结转移的标志物。

甲状腺癌；上皮型钙黏着蛋白1；MutL同源基因1；表达水平；临床病理特征

临床研究显示，上皮型钙黏着蛋白1(cadherin-1，CDH1)及MutL同源基因1(mutL homolog 1，MLH1)在多种人体实体肿瘤组织与正常组织中存在差异性表达，并与临床病理特征和预后相关[1-2]。但关于CDH1及MLH1在人甲状腺癌中的表达及其与临床病理特征关系的研究报道较少。本研究采用免疫组织化学方法，对我院2010年1月—2015年9月手术切除的61例甲状腺癌组织及癌旁组织中的CDH1及MLH1表达水平进行检测，探讨其与临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 病例来源本组共61例，男21例，女40例；平均年龄（40±15）岁。组织病理明确诊断为甲状腺癌，术前均未接受放化疗及生物治疗。临床病理资料完整。

1.2 试剂与仪器鼠抗人CDH1和MLH1单克隆抗体(购自美国Santcruz公司)。抗兔/鼠通用型免疫组化检测试剂盒(ChemMate EnVisionrM+/HRP/DAB Rb&Mo)购自基因科技(上海)有限公司，丹麦Dako公司分装产品。石蜡切片机（德国徕卡公司），显微镜（日本奥利巴斯公司），电热恒温箱（上海荣珂检测仪器有限公司），微波炉WHIRL POOL VIP202S (850W)。

1.3 免疫组化检测免疫组化染色步骤：（1）65℃温度下烤片。（2）石蜡切片脱蜡。（3）抗原修复。（4）去除过氧化物酶。（5）滴加一定比例经稀释过的一抗，37℃条件下孵育1 h。（6）再使用蒸馏水冲洗2 min。（7）滴入试剂（Poly peroxidase anti-mouse/rabbit IgG），于37℃条件下孵育0.5 h。(8)DAB显色。（9）脱水、封片镜检。

1.4 结果判断根据文献[3]方法，分别计数10个高倍镜视野下的阳性细胞(无0分；弱1分：中2分；强3分)和表达阳性率评分(＜5%0分；5%～l0%1分；10%～20%2分；20%～50%3分；＞50%4分)之和为该病例表达评分。将评分0～2分定为阴性病例，＞3分定为阳性病例。

1.5 统计学方法采用SPSS 18.0软件对数据进行统计，计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验或者Fisher精确检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 CDH1及MLH1在甲状腺癌中的表达 CDH1主要定位于细胞膜，呈棕黄色颗粒(图1A)。MLH1蛋白主要表达于细胞核，少量表达与细胞质(图1C)。CDH1和MLH1在甲状腺癌组织、癌旁组织中的阳性率分别为40.98%(25/61)，81.97(50/61)和54.10(33/61)，86.89%(53/61)，CDH1及MLH1在癌组织中的阳性表达率均显著低于癌旁组织(P＜0.05)，见表1。

图1 CDH1及MLH1在甲状腺癌中的表达

表1 CDH1及MLH1在甲状腺癌中的表达（n，%）

2.2 CDH1及MLH1表达与临床病理特征之间的关系甲状腺癌组织中CDH1的阳性表达与淋巴结转移及肿瘤分期有关(P＜0.05)，而MLH1的表达与患者的淋巴结转移有关(P＜0.05)。见表2。

3 讨论

甲状腺癌是临床上常见的头颈部恶性肿瘤之一，发病虽只占甲状腺结节的5%、全身肿瘤的1%，却是内分泌系统最常见的恶性肿瘤[4]。近年来,其发病率有逐年上升趋势。目前关于甲状腺癌的发生机制并不十分清楚，大多数研究认为与患者的遗传背景和后天环境因素有关。遗传背景包括恶性肿瘤家族史、某些代谢酶基因多态性等[5]，后天因素主要与电离辐射[6]、碘的异常摄取等因素有关。甲状腺癌早期患者可行手术治疗，预后较好，术后5年生存率可达到90%以上，但晚期已发生淋巴结转移患者预后较差。因此，探讨甲状腺癌的预后因素显得尤为重要。

CDH1及MLH1在多种人实体肿瘤组织与正常组织中存在差异性表达，并与患者的临床病理特征和预后相关。但关CDH1及MLH1在人甲状腺癌中的表达及其与患者临床病理特征关系的研究报道较少。上皮型钙黏蛋白1(CDH1)在人类定位于16号染色体22带1区，其编码产物为一个分子量为124 000的跨膜糖蛋白，该蛋白是一种同亲型结合、Ca依赖的细胞粘着糖蛋白，对胚胎发育的细胞识别、迁移和组织分化以及成体组织器官构成具有重要作用[7]。不同细胞及其发育不同的阶段其表面的钙黏蛋白的种类与数量均有所不同。同时上皮型钙黏蛋白1还具有细胞黏附功能，能够使细胞黏附并抑制肿瘤细胞脱落和转移。临床研究显示[2,8]，在多种实体肿瘤组织中，上皮型钙黏蛋白1的表达水平下调，并与患者的肿瘤恶性行为增强有关。Dass等[9]采用免疫组织化学方法检测了肠癌组织中CDH1表达产物的水平，并与患者临床病理特征进行比较，结果显示，其低表达与肠癌的高转移和预后较差有关。哈力木拉提·木尔扎提等[1]比较分析，CDH1阳性表达与阴性表达甲状腺癌患者的临床特征，发现阳性表达患者肿瘤分期较早。我们研究发现，CDH1的阳性表达与患者淋巴结转移及肿瘤分期有关(P＜0.05)。CHD1早期(Ⅰ/Ⅱ)患者中，CDH1阳性比例为44.6%，而晚期(Ⅲ/Ⅳ)患者中CDH1阳性比例0。说明甲状腺癌组织中CDH1的表达与患者肿瘤分期存在明显的相关性。肿瘤分期越晚，其阳性表达率越低，因而提示CDH1可能在甲状腺癌的进展中发挥重要作用，但其确切的调控甲状腺癌细胞发生、发展等分子机制并不清楚。同时本研究还发现，CDH1阳性表达与患者的淋巴结转移存在相关性，阳性患者淋巴结转移率低，而阴性患者淋巴结转移率明显升高。因此，提示CDH1可作为甲状腺癌淋巴结转移的生物学标志物，同时也提示CDH1可能参与了甲状腺癌侵袭转移的生物学过程，并有可能成为抑制甲状腺癌转移的分子靶点。

表2 CDH1及MLH1表达与临床病理特征之间的关系比较

MLH1基因是错配修复系统中的重要成员，位于3号染色体短臂21-23区，全长为58 kb[10-11]。目前大多数研究认为，MLH1基因与染色体错配修复有关，当细胞分裂并开始进行DNA复制过程时，由于其碱基的错配，可造成子代细胞基因的突变，从而可能导致抑癌基因的失活和癌基因的激活，从而引发肿瘤[12-13]。MLH1能够对错配的碱基进行切除并修复，及时校对错误复制的DNA，子代基因组的稳定。因而，其表达确实可能与细胞的恶性转化有关[14]。Rosty等[15]研究认为，MLH1在肠癌中的缺失表达与患者肿瘤的恶性行为增强有关。同时，Bianchi等[16]报道，采用小干扰RNA下调乳腺癌细胞中MLH1基因表达后，肿瘤细胞的增殖能力明显增强，而凋亡明显降低。但关于MLH1与甲状腺癌相关性的研究报道较少。我们研究发现，MLH1的表达与患者的淋巴结转移有关(P＜0.05)，阳性表达者淋巴结转移率明显低于阴性表达者。提示MLH1可能参与了甲状腺癌细胞的侵袭与转移过程，但具体分子机制目前并不十分清楚，同时也缺乏客观的细胞实验进行正式。因此，MLH1与甲状腺癌淋巴结转移的相关性有待进一步证实。

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（收稿：2016-03-26 修回：2016-07-20）

（责任编辑张静喆）

The Clinical Significance of CDH1 and MLH1 Expression in Thyroid Carcinomas

CHEN Yu-tao，WANG Wu-jun，ZHANG Peng Department of General Surgery,Tianjin Beichen Hospital,Tianjin(300400),Chi⁃na

Objective To investigate the CDH1 and MLH1 expression in thyroid carcinoma and their asso⁃ciation with the clincial pathological characteristics. Methods Sixty-one thyroid carcinomas that received sur⁃ger with complete clinical data were included in this study.The cancer tissue(n=61)and para-cancer tissue were examined for CDH1 and MLH1 expression by immunohistochemical method.The correlation between CDH1 and MLH1 expression in thyroid carcinomas and clincial pathology characteristics were evaluated. Results The positive rate of CDH1 in cancer tissue and para-cancer tissue were 40.98%(25/61)and 81.97% (50/61).But for MLH1,54.10%(33/61)in cancer tissues and 86.89%(53/61)in para-cancer tissues.CDH1 posi⁃tive expression in cancer tissue was correlated with lymph node metastasis(P＜0.05),clinical stage(P＜0.05), but MLH1 was not correlated with lymph node metastasis(P＞0.05). Conclusion CDH1 and MLH1 protein may be related to the occurrence and development of thyroid carcinoma,which can be used as a marker of lymph node metastasis of thyroid carcinoma.

Thyroid carcinoma;E-cadherin 1;mutL homolog 1;expression;clinical pathological character⁃istics

R736.1

1007-6948(2016)04-0328-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2016.04.005

1.天津市北辰医院外科（天津 300400）

2.天津医科大学总医院普外科（天津 300070）

陈玉涛，E-mail:qwzui8051sie6@126.com