应用卵黄和血清进行新城疫抗体监测的比较

曹丹

（辽宁省沈阳市畜牧兽医科学研究所，辽宁　沈阳　110034）

应用卵黄和血清进行新城疫抗体监测的比较

曹丹

（辽宁省沈阳市畜牧兽医科学研究所，辽宁沈阳110034）

为检测卵黄抗体代替血清抗体对蛋鸡新城疫免疫评估的可行性，本试验选取180日龄健康产蛋母鸡30羽，按照常规免疫程序，分别于180、182、186、194、210、242和306日龄共7次采集卵黄样品和对应的血清样品，以HI方法检测血清和卵黄免疫新城疫免疫抗体水平。结果表明，卵黄抗体的效价略低于血清抗体效价，但升降趋势相同。利用spss 12.0软件对7个不同日龄蛋鸡抗体数据进行检验，差异不显著（P＞0.05）。由此可得，在产蛋鸡180～300日龄内，卵黄抗体与血清抗体差异不显著，有一定的相关性，可以采用卵黄替代血清进行免疫抗体检测。

蛋鸡；新城疫；卵黄；血清；免疫抗体；相关性

新城疫（ND）也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是由NDV病毒引起的鸡和火鸡急性高度接触性传染病，常呈败血症症状。主要特征是呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血，是严重危害养鸡业得主要疾病之一，为A类传染病[1]。因此，控制新城疫的发生和流行具有重要意义。当前主要通过检测禽类血清中新城疫抗体水平来进行免疫效果的评估，控制新城疫疫病的发生。在临床上需要对免疫鸡群的血清抗体水平进行多次监测，采血不但会给鸡群造成较大的应激反应，引起生产性能的下降，而且费时费力，采样效率不高。

蛋鸡进行鸡新城疫疫苗免疫接种后，体内B细胞通过对抗原的识别、活化、增殖，最后分化成浆细胞并分泌抗体，产生的抗体进入血液后，血液中的抗体能从输卵管上皮层分泌滤泡分泌到卵黄内[2]。因此，若能用卵黄抗体代替血清抗体检测，不仅可以省去采血给鸡群造成的应激反应，而且操作更为方便。本试验以产蛋鸡为研究对象，对新城疫血清抗体与卵黄抗体产生水平的相关性进行对比，以确定用检测卵黄抗体代替血清抗体对产蛋鸡进行新城疫免疫评估的可行性，从而为ND的抗体检测提供新的方法。

1　材料与方法

1.1试验动物从沈北道义蛋种鸡场选取个体差异不显著的产蛋鸡30羽（180日龄），按照表1新城疫免疫程序常规免疫，单笼饲养。

表1　蛋种鸡场采用新城疫免疫程序Tab le1　The imm unization procedure o f NDV vaccine

1.2疫苗按照常规免疫，鸡新城疫Lasota疫苗、鸡新城疫油乳剂灭活疫苗：哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

1.3血凝抑制试验用抗原和血清鸡新城疫标准阳性血清：哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号（20140312）。

鸡新城疫4单位抗原：自制。

0.75%新鲜鸡红细胞悬液，现用现做；氯仿（三氯甲烷）；阿氏液；PBS溶液。

1.4试验材料主要仪器及耗材：96孔V型微量板；单道及多道微量移液器（配有吸头）；微型振荡器；离心机；离心管、试管、一次性注射器。

2　样品制备

2.1血清样品采集试验蛋鸡于180日龄（产蛋稳定）当天开始采样，分别在182、186、194、210、242和306日龄采集血清，采血每天收集鸡蛋，采血当天产蛋作为检测用蛋（30枚），对应编号，用作待检血清和待检鸡蛋，共采样7次。

2.2卵黄样品的制备卵黄采用生理盐水稀释法：将卵黄与蛋清分离，用无菌采血器刺破卵膜，直接从卵黄囊抽取卵黄。将采集的卵黄与等量生理盐水作1∶1稀释，混合制成卵黄检样备用。

2.3H H I I抗体效价测定血清样品按《GB/T 16550-2008新城疫诊断技术》规定方法检测。卵黄样品参照血清样品进行HI效价测定。

3　结果与分析

3.1卵黄与血清H H I I抗体效价差异性比较见表2。

表2　产蛋期新城疫血清抗体和卵黄抗体监测结果Table2　HI(log2)antibody titer of the serum and egg yolk antibody for NDV

由表2可知，新城疫病毒卵黄抗体的平均效价为8.39，血清抗体平均效价为8.70。从本次试验结果来看，进行新城疫常规免疫后，卵黄抗体的效价略低于血清抗体效价。但升降趋势相同，具有一定的相关性。

利用spss12.0软件对7个不同日龄蛋鸡抗体数据进行t检验，差异不显著（t＜0.05，P＞0.05）。由此可得，在产蛋鸡180～300日龄内，卵黄抗体与血清抗体差异不显著，有一定的相关性，可以采用卵黄替代血清进行免疫抗体检测。

3.2卵黄—血清抗体效价消长规律及相关性分析见图1。

图1　血清抗体和卵黄抗体效价监测结果Fig.1　HI antibody titer of the serum and egg yolk antibody for NDV

由图1可得，新城疫病毒卵黄抗体的效价与血清抗体较为相近，升降趋势相同，曲线变化基本一致。试验期间，血清抗体效价的曲线，位于上线，始终高于卵黄抗体水平。由此可得出，与血清相比，卵黄抗体有一定的滞后性。

4　结果与讨论

鸡体内的免疫球蛋白分布于淋巴液、血清和组织液中，还能通过卵泡膜进入卵黄，为雏鸡提供母源抗体。本次试验测定了常规免疫新城疫疫苗后，血清抗体效价和卵黄抗体效价基本一致，升降趋势相同，成正平行关系，卵黄抗体可以代替鸡血清对蛋鸡进行ND的免疫监测，这与孟艳等（2007）[3]、席文平等（2007）[4]研究均认为蛋鸡卵黄抗体效价与血清效价的差异不显著，具有相关性的报道相一致。但由于卵黄形成需要一定的时间，因此卵黄抗体与血清抗体检测结果相比，存在一定的滞后性。

在具体试验操作中，需要对卵黄样品处理后，才能进行HI方法检测。常用的卵黄提纯制备有氯仿萃取法、PBS直接稀释法、生理盐水直接稀释法和PEG沉淀法。本文经过筛选后，采用生理盐水直接稀释卵黄样品，简便实用，且与血清效价差异不大，可以运用到生产实践中。用卵黄抗体代替血清对蛋鸡进行ND的免疫监测，不仅减少抓鸡产生的应激，避免采血惊吓造成的产蛋量下降，而且检测卵黄抗体方法简便实用，节省人力和时间，养鸡户更易于接受。

[1]范文颖，周寅，顾祥国.鸡新城疫的诊断和防控[J].畜牧与饲料科学，2009，30（9）：154-156.

[2]刘瑞生，张洪波，薛掌林，等.鸡新城疫血清抗体和卵黄抗体效价比较研究[J].畜牧兽医杂志，2013，2：100；

[3]孟艳，杨秀女，武秋双，等.蛋禽卵黄和血清禽流感抗体的差异及相关性[J].今日畜牧兽医，2007，6：3-5.

[4]席文平，李吉轩，岳建新，等.禽流感血清抗体与卵黄抗体消长规律比较研究[J].中国畜牧兽医，2007，34（1）：103-105.

The feasibility of immune evaluation Newcastle disease of judging yolk antibody instead of serum antibody

Cao Dan
(Shenyang Instituent of Animal Husbandry and Veterinary,LiaoningShengyang110034)

To study the feasibi l ity of immune evaluation Newcast le disease of judging yolk antibody instead of serum antibody,eggs and samples were col lected f rom 30 180-day-age heal thy laying hens and the layers immunized with NDV vaccine according to the routine vaccination program.

The serum and eggs were col lected on 180、182、186、194、210、242 and 306 days,which number of samples were cor responding.The antibody level in the serum and egg yolks was detected with the haemagglutination inhibition(HI)test.The resul t showed that the egg yolk antibody titers sl ight ly lower than serum antibody titers,but the t rends of decreasing and increasing of theirs were the same.The antibody titers were analyzed by using spss 12.0,theirs were not remarkably di f ferent（P＞0.05）.The mentioned-above resul t indicated that the antibody level in the egg yolks and serum of 180 to 300 day old laying hens were not dif ferent,but theirs have some cor relation. It suggested that eggs yolk could be detected with theHItest instead of serum.

Laying hen;Newcast le disease;Egg yolk;Serum;Immune antibody;Correlation

S858.31

B

1672-9692(2016)01-0015-03

2015-11-11

曹丹（1979-），女，硕士研究生，高级畜牧师，研究方向为动物营养与饲料科学。