不同液相色谱仪测定辣椒油中维生素E的含量分析※

刘翠红 陈 科 姚雪清 钟智轩 刘楚楚

不同液相色谱仪测定辣椒油中维生素E的含量分析※

刘翠红 陈 科 姚雪清 钟智轩 刘楚楚

目的 建立不同液相色谱仪测定辣椒油中维生素E的含量测定方法。方法 在相同试验条件下，采用不同液相色谱仪测定辣椒油中维生素E的含量。以维生素E为标准物质，C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）为分离柱，甲醇为流动相洗脱，紫外检测，流速1.0 ml/min。结果 维生素E线性范围10～80 μg/ml，3台仪器测得维生素E的相关系数分别为0.9978、0.9990、0.9998，加标回收率和相对标准偏差（RSD）分别为97.8%、1.8%，98.2%、0.92%，99.4%、0.53%。结论 超高效液相色谱法试剂简单，操作简便，结果重现性好，准确快速，回收率高，适用于辣椒油中维生素E含量的测定。

紫外检测器；超高效液相色谱仪；辣椒油；维生素E

辣椒油是一种调料，但其辣度与营养密切相关。辣椒中含有丰富的维生素C、E、β-胡萝卜素、叶酸、镁及钾[1]；辣椒中的辣椒素还具有抗炎及抗氧化作用，有助于降低心脏疾病、某些肿瘤及慢性疾病的发病率[2]。人体试验研究发现，辣椒能增加人体能量消耗，帮助减肥[3]；经常进食辣椒可以有效延缓动脉粥样硬化发展及血液中脂蛋白的氧化[4]。大部分人认为，经常进食辣椒可刺激胃部，甚至引起胃溃疡[5]。但实际上辣椒素可预防和治疗胃溃疡[6]。

维生素E也称为生育酚[7]，由4种生育酚和8种同系物质组成，属于脂溶性维生素[8]。维生素E可以维持人体肌肉和生殖系统正常代谢，保持中枢神经和血管系统的完整，还可有效清除自由基[9]。维生素E有促进生育和抗氧化功能，已广泛应用于化妆品、食品和医药行业中，但其结构较复杂，给分析检测工作带来了一定困难[10]。维生素E在自然环境中极不稳定，影响因素复杂，其含量测定也是难点[11]。维生素E的主要检测方法包括滴定法、紫外可见分光光度法、红外分光光度法、荧光检测法、电化学分析法、薄层色谱法、超临界色谱法、高效液相色谱法[12]。前7种检测方法存在试样前处理复杂、重复性差、结果准确度低等缺点，而高效液相色谱法，特别是超高效液相色谱法，具有灵敏度高、重复性好、检测速度快和准确度高等优点。

超高效液相色谱法是采用细粒径填料（117 μm）和细内径柱子而获得柱效高达（100 000～300 000）的液相色谱技术[13]，利用创新技术进行整体设计，从而大幅度改善色谱分离度、样品通量和灵敏度[14]。

本研究将采用国产和岛津高效液相色谱仪、超高效液相色谱仪，对辣椒油中维生素E的含量进行测定，比较高效液相色谱和超高效液相色谱两种仪器检测维生素E含量结果，建立一种辣椒油中维生素E快速、准确的检测方法。

1 材料与仪器

1.1 药品与试剂 维生素E标准物质，中国药品生物制品检定所，批号：100062-200608；辣椒油，四川翠宏食品有限公司，批号：20151206；色谱纯甲醇。

1.2 仪器 L-3000高效液相色谱仪；LC-20AT岛津高效液相色谱仪；L-6000超高效液相色谱仪；超声波清洗器。

2 方法与结果

2.1 标准储备液的制备 精密称取维生素E标准物质0.1000 g置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，配成浓度为10 mg/ml的标准储备溶液。

2.2 系列标准溶液的制备 精密量取标准储备溶液适量，加甲醇分别稀释为10、20、40、60、80 μg/ml系列标准溶液。

2.3 样品溶液的制备 准确称取样品约0.2 g，置于10 ml离心管中，加适量甲醇，混合均匀，超声提取1 min，加甲醇定容，以3.5×103rpm离心1 min，取上清液过0.45 μm滤膜后作为待测溶液。

2.4 色谱条件 色谱柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇；流速：1.0 ml/min；柱温：30 ℃；检测波长：284 nm；紫外检测器。

2.5 线性关系考察 吸取系列标准溶液10、20、40、60、80 μg/ml各20 μl注入液相色谱仪中，分别测定，以峰面积（y）对系列标准溶液浓度（x）进行回归，得回归方程，维生素E在10～80 μg/ml与峰面积保持良好线性关系，见表1。

2.6 精密度试验 取40 μg/ml的维生素E标准溶液20 μl，连续进样5次，记录保留时间和峰面积，计算其相对标准偏差（RSD），L-3000型高效液相色谱仪测得保留时间和峰面积的RSD为1.3%和1.8%，LC-20AT型高效液相色谱仪测得保留时间和峰面积的RSD为0.50%和1.2%，L-6000型超高效液相色谱仪测得保留时间和峰面积的RSD为0.059%和0.11%，结果见表2。

表1 线性关系考察结果

表2 精密度试验结果

2.7 回收率试验 精密称取已知含量的辣椒油（批号：20151206）样品约0.2 g，共6份，分别精密加入浓度为1.0 mg/ml维生素E标准溶液0.2、0.5、1.0 ml，按2.3项下制备样品溶液，取20 μl注入液相色谱仪，记录峰面积，计算维生素E的回收率及其RSD，L-3000型高效液相色谱仪测得维生素E的平均回收率和RSD为97.8%、1.8%，LC-20AT型高效液相色谱仪测得维生素E的平均回收率和RSD为98.2%、0.92%，L-6000型超高效液相色谱仪测得维生素E的平均回收率和RSD为99.4%、0.53%，结果见表3。

表3 加标回收率试验结果

3 讨论

按中华人民共和国卫生部GB/T 5009.28-2003《食品中维生素A和维生素E的测定》[15]、中华人民共和国卫生部GB 5413.9-2010《婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定》[16]、中华人民共和国农业部NY/T 1598-2008《食用油中维生素E组分和含量的测定高效液相色谱法》[17]测定方法，只适用于一般的样品，而辣椒油中含有辣椒和油，存在特殊性，采用国标处理方法不能有效处理。目前，对辣椒油中维生素E进行测定的方法报道较少，检测没有参考依据。超高效液相色谱法试剂简单，操作简便，结果重现性好，准确快速，回收率高，适用于辣椒油中维生素E含量的测定。

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[15] 中华人民共和国卫生部.GB/T5009.28-2003《食品中维生素A和维生素E的测定》[S].北京,2003.

[16] 中华人民共和国卫生部.GB5413.9-2010《婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定》[S].北京,2010.

[17] 中华人民共和国农业部.NY/T1598-2008《食用油中维生素E组分和含量的测定 高效液相色谱法》[S].北京,2008.

Comparison of the content of vitamin E in pepper oil by different liquid chromatograph

Liu Cuihong Chen Ke Yao Xueqing Zhong Zhixuan Liu Chuchu

Objective Establish different liquid chromatograph the content determination method for determination of vitamin E in chili oil.Methods Under the same experimental conditions,the analytical method of the content of vitamin E in chili oil was determined by different instruments.Vitamin E as a standard substance,C18column (250 mm× 4.6 mm,5 μm)as Separation column,Methanol as mobile phase elution,UV detection,Flow rate of 1.0 ml/min.Results the linear range of vitamin E was between 10-80 μg/ml,The correlation coefficients of vitamin E were measured by three instruments were 0.9978,0.9990,0.9998,the recovery rate and relative standard deviation were 97.8%,1.8%, 98.2%,0.92%,99.4%,0.53%.Conclusion Ultra performance liquid chromatography reagent is simple and easy to operate.The results are reproducible,accurate,rapid and high recovery rate.It is suitable for the determination of vitamin E in chili oil.

UV;UHPLC;Chili oil;Vitamin E

TS255.7

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.11.005

广东省保化检测中心有限公司，广东广州 510663

国家重大科学仪器设备开发与专项--新型高速、高灵敏度、高通量色谱分析仪器的开发与应用项目，应用超高效液相色谱进行化妆品与保健品的快速检测方法开发和验证任务（2012YQ14000807）

刘翠红（1978-），硕士学位。研究方向：化妆品、保健食品、药物标准研究