高效液相色谱法测定荆芥饮片煎煮过程中胡薄荷酮含量的变化

赵玉静

高效液相色谱法测定荆芥饮片煎煮过程中胡薄荷酮含量的变化

赵玉静

目的 探讨荆芥饮片煎煮过程中胡薄荷酮含量变化的高效液相色谱（HPLC）测定方法及效果，为促进含荆芥复方汤剂临床煎煮规范化提供理论借鉴。方法 将胡薄荷酮作为参考指标，并在给定色谱条件下，应用HPLC法检测荆芥饮片煎煮5 min、10 min、20 min、30 min、45 min后水煎液内胡薄荷酮含量。结果 加样回收率实验结果显示，荆芥饮片中胡薄荷酮的平均回收率是103.77%，其相对标准偏差（RSD）是1.8%；荆芥饮片在使用传统砂锅并以文火煎煮5 min时，其胡薄荷酮含量是0.548 mg/L；煎煮10 min时，其胡薄荷酮含量是0.082 mg/L；煎煮20 min时，其胡薄荷酮含量是0.022 mg/L；煎煮30 min和45 min时，其胡薄荷酮含量均为0。结论 胡薄荷酮是荆芥饮片内的主要有效成分，其具有挥发性特征，应依据传统中药材煎煮要求中“后下”标准煎煮，其中5 min是荆芥饮片的最佳煎煮时间，可最大限度地确保胡薄荷酮的高浓度，进而保证荆芥“解表”效果。

荆芥饮片；煎煮过程；胡薄荷酮；含量变化；高效液相色谱法

荆芥属于唇形科中一年生的草本植物荆芥干燥地上部位，具有透疹消疮、祛风解表之功效[1]，常用于治疗麻疹不透、外感表证、风疹瘙痒以及出血症等疾病。荆芥的主要有效成分是挥发油类物质，包括胡椒酮、胡薄荷酮以及薄荷酮等[2]，不适宜长时间煎煮，以免其因长时间受热而主要药物成分挥发。《中国药典》（2015年版，1部）内有规定：荆芥中挥发油含量不可低于0.3%（mg/L）[3]，胡薄荷酮为荆芥内挥发油的主要有效成分，相关报道表明，采用高效液相色谱（HPLC）法检测胡薄荷油含量的准确性较高，且操作简便，易于推广[4-5]。本研究为明确荆芥饮片煎煮过程中胡薄荷酮含量变化，促进荆芥煎煮工艺的规范性，使用传统砂锅煎煮荆芥，并以HPLC法检测其煎煮期间胡薄荷酮的含量变化，从而确定荆芥的最佳煎煮时间，现报道如下。

1 仪器与试剂

1.1 药品与试剂 荆芥饮片，辽宁中医药大学附属医院；胡薄荷酮对照品，中国药品生物制品鉴定所，纯度为98.6%，批号：111802-201106；色谱纯甲醇，美国Merck公司；其余试剂为分析纯。

1.2 仪器 LC-20AB型高效液相色谱仪，其中包含CTO-20A柱温箱、SIL-20A自动进样器、DGU-20A3在线脱气机、Class-VP色谱工作站以及SPD-M20A检测器；梅特勒-托利多仪器。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：YMC-Pack ODS-A（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；柱温：35 ℃；检测波长：254 nm；流速：1 ml/min；流动相：甲醇与水的比例是80∶20。

2.2 供试品溶液制备 精密称取30 g荆芥饮片，将其置入300 g清水内浸泡0.5 h，并使用传统砂锅，以武火煮沸后改为文火煎煮5 min，随后将药液滤出，药液体积为175 ml，将其作为1号样品备用；以相同方法制备荆芥饮片2号样品备用，采用文火煎煮10 min，其药液体积与1号样品相同；随后，再以相同方法制备3号样品、4号样品、5号药品备用，其文火煎煮时间分别是20 min、30 min、45 min，每一份药液均加入纯净水，将其体积定为175 ml。

量取1～5号样品，分别置入10～50 ml容量瓶内，并加入无水乙醇，将其定容到刻度，注意应一边加一边轻轻振摇，静置后即可获得供试品溶液。

2.3 对照品储备液制备 精密称取17.46 mg胡薄荷酮对照品置入10 ml容量瓶内，加入无水乙醇予以溶解，并将其定容至刻度，即可获得对照品储备液。

2.4 方法学考察

2.4.1 标准曲线绘制 精密量取胡薄荷酮对照品储备液1 ml置入100 ml容量瓶内，加入无水乙醇将其定容至刻度，获得1.76 mg/L浓度的胡薄荷酮对照溶液，分别稀释成为浓度为3.4920 mg/L、1.7460 mg/L、0.8730 mg/L、0.4365 mg/L、0.2182 mg/L、0.0875 mg/L、0.0106 mg/L的胡薄荷酮对照品溶液。应用YMCPack ODS-A色谱柱分别进样10 μl，并记录峰面积。将峰面积作为纵坐标，并将胡薄荷酮对照品溶液浓度作为横坐标进行标准曲线绘制，并计算其回归方程：Y=27 975X+804.69（r=0.9999），可见胡薄荷酮浓度在0.0106～17.4600 mg/L时线性关系良好。

2.4.2 精密度试验 精密抽取1号样品溶液（煎煮5 min的荆芥饮片）10 μl，予以5次重复进样后，样品内胡薄荷酮面积相对标准偏差（RSD）的计算结果是1.6%，则表示仪器的精密度较高。

2.4.3 稳定性试验 精密抽取1号样品溶液（煎煮5 min的荆芥饮片）10 μl，将其分别在0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h时予以进样检测，样品内胡薄荷酮的峰面积RSD的计算结果是0.8%，则表示样品溶液24 h内的稳定性较高。

2.4.4 重复性试验 在同一批荆芥饮片中重复制备2号样品溶液（煎煮10 min的荆芥饮片）5份，并精密吸取10 μl予以检测，计算其胡薄荷酮含量RSD是2.66%。

2.4.5 回收率试验 取15 g荆芥饮片，并将其置入150 g清水中浸泡0.5 h，使用传统砂锅并以武火煮沸，随后转为文火煎煮，10 min后滤出药液，将其定容在175 ml。将上述样品溶液分别量取6份，10 ml/份，将其分别加入0.8 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.0 ml、1.2 ml、1.2 ml的胡薄荷酮对照品溶液内，而胡薄荷酮对照品溶液浓度是1.746 g/L。取无水乙醇加入其中并定容至50 ml，摇匀后静置。精密抽取各个样品10 μl予以进样检测，计算其胡薄荷酮的平均回收率。

2.4.6 检测样品含量 取制备好的供试品溶液，在YMC-Pack ODS-A色谱柱条件下予以进样、分析，其进样体积是10 μl，分析荆芥饮片的煎煮期间的胡薄荷酮浓度变化。

2.5 胡薄荷酮加样回收率 加样回收率实验结果显示，荆芥饮片中胡薄荷酮的平均回收率是103.77%，其RSD是1.8%，详细数据见表1。

表1 胡薄荷酮加样回收率

2.6 样品含量检测结果 荆芥饮片在使用传统砂锅并以文火煎煮5 min时，其胡薄荷酮含量为0.548 mg/L；煎煮10 min时，其胡薄荷酮含量是0.082 mg/L；煎煮20 min时，其胡薄荷酮含量是0.022 mg/L；煎煮30 min和45 min时，其胡薄荷酮含量均为0。

3 讨论

荆芥最早记载于《神农本草经》中，名字为“假苏”，属于中药材，在《吴普本草》中以“荆芥”之名被记载[6]。荆芥味辛、性温，也有部分中医学者认为其性凉或性平，生品具有宣毒透疹、祛风解表、散瘀止血的药效，主要用于治疗咽喉肿痛、风寒感冒以及皮肤科疾病，属于临床上常用的中药材。荆芥具有解表效果的有效部分是挥发油，而荆芥中挥发油的主要成分是胡薄荷酮[7]。通常来讲，气相色谱法为挥发油类成分的常规检测方法，然而，气相色谱法的色谱条件极为复杂，与其他色谱条件相比出峰较多，易干扰检测结果[8]。与之相比，HPLC的出峰数量较少，对检测结果造成的干扰也较少，色谱条件相对简单，可将其作为紫外吸收的挥发性成分含量检测方法。

荆芥的主要药物成分为单萜类化合物胡薄荷酮，其具备共轭结构，且紫外最大吸收峰为252 nm，在252 nm波长下其他成分对检测结果造成的干扰较小，且能够缩短分析时间[9]。因此，本研究采用HPLC检测荆芥饮片煎煮期间胡薄荷酮含量变化。本研究结果提示，应用传统砂锅煎煮荆芥饮片，并前后使用武火、

文火煎煮，其煎煮时间不同，荆芥饮片中胡薄荷酮含量的变化也存在较大差异。文火煎煮5 min的样品溶液内胡薄荷酮含量较高，而煎煮10 min后样品溶液内胡薄荷酮浓度与之相比减少了7倍左右，煎煮20 min的样品溶液内胡薄荷酮含量则减少了25倍左右。同时，在煎煮30 min和45 min样品溶液中，胡薄荷酮色谱峰完全消失。据此可知，伴随文火煎煮时间延长，荆芥饮片内胡薄荷酮含量也随之减少，直至完全消失，印证了中国古今中医学家对于含挥发性药物成分药材煎煮期间“勿过煮”“香气大出”理论。现代药理学研究发现，含有较多挥发油成分的药物，一般需在汤剂煎煮完毕前的5～10 min煎煮即可，以免长时间煎煮导致挥发油成分挥发，影响药物疗效。中药汤剂的入药疗效与其煎煮方式存在直接关系，著名医者徐灵胎言：“大都发散之药，及芳香之药，不宜多煎，取其生而疏荡……故方药虽中病，而煎法失度，其药必无效。[10]”可见荆芥饮片的煎煮时间与其入药疗效密切相关，医务人员在指导患者用药时应着重强调这一点，以确保用药效果。

综上所述，胡薄荷酮是荆芥饮片内的主要药物成分，其具有挥发性特征，应依据传统中药材煎煮要求中“后下”标准煎煮，其中5 min是荆芥饮片的最佳煎煮时间，可最大限度地确保胡薄荷酮的高浓度，进而保证荆芥“解表”效果。

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R972.2

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.11.004

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