胃癌组织核受体辅激活蛋白5的表达变化及其临床意义

刘松杰，闫东红，徐兵

(新乡市中心医院，河南新乡453000)



胃癌组织核受体辅激活蛋白5的表达变化及其临床意义

刘松杰，闫东红，徐兵

(新乡市中心医院，河南新乡453000)

目的 探讨核受体辅激活蛋白5(NCOA5)在胃癌发生、发展中的作用。方法 选择胃癌患者72例，取其手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织，采用FQ-PCR、Western blotting法检测NCOA5 mRNA和蛋白表达，分析NCOA5表达与患者临床病理参数的关系。结果 胃癌组织及癌旁正常组织NCOA5 mRNA表达下调率分别为80.6%(58/72)、16.7%(12/72)；NCOA5蛋白表达缺失率分别为75.0%(54/72)、13.9%(10/72)，二者比较P均<0.05。胃癌组织NCOA5 mRNA表达下调及NCOA5蛋白表达缺失与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、远处转移均无关(P均>0.05)，与肿瘤组织分化程度、TNM分期均有关(P均<0.05)；胃癌组织NCOA5 mRNA表达下调与淋巴结转移有关(P<0.05)，而NCOA5蛋白表达缺失与淋巴结转移无关(P>0.05)。结论 NCOA5低表达可能促进胃癌的发生、发展。

胃癌；核受体辅激活蛋白5；临床病理参数

胃癌的发生、发展是一个多因素、多阶段逐步演化的过程，涉及多种抑癌基因的失活和原癌基因的激活[1，2]。核受体辅激活蛋白5(NCOA5)是新发现的抑癌基因，是由579个氨基酸组成的核受体辅助调节因子。最新研究表明，NCOA5基因缺失与肝癌的发生有关[3，4]；但NCOA5与胃癌的关系鲜见报道。为此，我们进行了如下研究。

1 资料与方法

1.1 临床资料 研究对象为2010年1月～2016年1月我院收治的72例胃癌患者，男46例、女26例，年龄(58.2±4.5)岁(<60岁40例、≥60岁32例)。72例患者均行手术治疗，术前未接受放疗、化疗或其他抗癌治疗。肿瘤位于胃食管连接部(发生于胃食管连接部近端5 cm和远端5 cm之间)28例，胃部[5]44例；肿瘤直径(3.6±0.3)cm(<3 cm 20例、≥3 cm 52例)；组织分化程度：高、中分化30例，低、未分化42例；TNM分期(采用2010年国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会分期标准[6])：Ⅰ、Ⅱ期29例，Ⅲ、Ⅳ期43例；淋巴结转移45例，远处转移12例。

1.2 胃癌组织及癌旁正常组织NCOA5表达检测 取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织(距癌组织≥2 cm)，离体后立即置于灭活RNA酶的冻存管中液氮冷冻，-80 ℃低温冰箱冻存。①NCOA5 mRNA表达检测：采用FQ-PCR技术。取胃癌组织及癌旁正常组织各50～100 mg，采用TRIzol法提取总RNA。取总RNA 2 μg，按RT Easy TM Ⅰ试剂盒说明书逆转录合成cDNA。根据Real Time PCR Easy TM-SYBR Green Ⅰ试剂盒说明书配备反应体系，以β-actin作为内参，进行荧光定量PCR扩增，每个样本设置3个复孔。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。PCR反应条件：95 ℃预变性3 min，95 ℃变性10 s，60 ℃退火/延伸30 s，共40个循环。以2-ΔΔCT法计算NCOA5 mRNA相对表达量。NCOA5 mRNA相对表达量≥1为表达上调，<1为表达下调[7]。②NCOA5蛋白表达检测：采用Western blotting法。取胃癌组织及癌旁正常组织各50 mg，加入RIPA裂解液提取总蛋白，BSA法绘制蛋白浓度标准曲线，测定提取的蛋白浓度，并将提取的蛋白与SDS上样缓冲液混合，100 ℃煮沸5 min。配制10% SDS-聚丙烯酰胺分离胶和5% SDS-聚丙烯酰胺浓缩胶，电泳槽中加入Tris-甘氨酸电泳缓冲液，每个泳道加入20 μg蛋白。电泳2 h，以湿转法将蛋白转印于聚偏氟乙烯膜上，5%脱脂奶粉封闭抗原，加入NCOA5山羊抗人多克隆抗体(1∶1 000稀释)4 ℃过夜。次日洗膜后加入辣根过氧化物酶标记的兔抗山羊IgG二抗(1∶3 000稀释)，室温摇床上孵育1 h，增强型化学发光试剂孵育5 min，曝光成像，采用Adobe Photoshop CS5分析其图像灰度值。NCOA5蛋白的表达用β-actin蛋白的表达量来校正。以NCOA5基因的灰度值与β-actin基因的灰度值之比为相互比较的参数，以癌旁正常组织的平均值为标准，大于及在此范围内为蛋白表达，未出现条带及低于正常范围为蛋白表达缺失[8]。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计数资料以百分率表示，结果比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组织及癌旁正常组织NCOA5 mRNA和蛋白表达比较 胃癌组织NCOA5 mRNA表达下调率为80.6%(58/72)，癌旁正常组织为16.7%(12/72)，二者比较P<0.05。胃癌组织NCOA5蛋白表达缺失率为75.0%(54/72)，癌旁正常组织为13.9%(10/72)，二者比较P<0.05。

2.2 胃癌组织NCOA5表达与患者临床病理参数的关系 胃癌组织及癌旁正常组织NCOA5 mRNA和蛋白表达具有一致性，即胃癌组织NCOA5呈低表达，其与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、淋巴结转移均无关(P均>0.05)，而与肿瘤组织分化程度及TNM分期均有关(P均<0.05)。见表1。

表1 胃癌组织NCOA5表达与患者临床病理参数的关系

3 讨论

肿瘤标志物可反映肿瘤的生物学特征，对肿瘤的诊断、治疗及预后具有重要意义。如胃癌的肿瘤标志物——AFP、CEA、CA19-9等已成为近年来研究的热点[9，10]。

NCOA5是由579个氨基酸组成的核受体辅助调节因子，位于人染色体20q13.12，也是雌激素α、β受体和孤核激素受体BD73的辅激活蛋白[3，11]。有研究发现，NCOA5基因缺陷可诱发雄性小鼠原发性肝癌，又能导致小鼠糖耐量减低。炎症是2型糖尿病和肝细胞癌的共同致病基础，其中IL-6是较为常见的致病因子，尽管IL-6在胰岛素抵抗中的作用已被发现，但一些研究表明，IL-6表达增加对胰岛素作用的影响具有高度组织特异性并依赖其生理状态，如小鼠处于运动状态时骨骼肌释放的IL-6能改善胰岛素的敏感性，而IL-6的表达缺失可增加胰岛素抵抗。此外，肝脏中IL-6的表达增加能引起慢性炎症，导致胰岛素抵抗和肝细胞癌的发生，同时阻止IL-6的过表达可限制部分原发性肝癌的发生、发展，尤其在胰岛素抵抗的早期、肝脏脂肪变性和结构异常时；IL-6-STAT3信号通路的异常激活可能是导致小鼠和人肝细胞癌发生的重要因素[3，12,13]。有研究表明，雌激素信号是2型糖尿病和肝细胞癌发生的另一条重要调节通路，雌激素和雌激素α受体(ERα)能够调节炎症因子表达、葡萄糖和脂质稳态及胰岛β细胞生存，故能对2型糖尿病和肝细胞癌提供保护作用，ERα亦能像其他转录因子一样通过辅激活因子和辅阻遏因子调节基因转录。研究还发现，NCOA5可能与TNF-α、NF-κB有关，如TNF-α在NCOA5基因缺陷的动物组织中表达显著升高，但这种基因缺陷能否被逆转及其在人体中的具体作用机制尚不十分清楚[14～17]。

本研究结果显示，胃癌组织NCOA5 mRNA表达下调率、NCOA5蛋白表达缺失率均高于癌旁正常组织。说明在胃癌组织中NCOA5呈低表达，在癌旁正常组织中呈高表达，故认为NCOA5可能是胃癌的一种抑癌基因。本研究还发现，胃癌组织NCOA5 mRNA表达下调及NCOA5蛋白表达缺失与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、远处转移均无关，与肿瘤组织分化程度、TNM分期均有关；胃癌组织NCOA5 mRNA表达下调与淋巴结转移有关，而NCOA5蛋白表达缺失与淋巴结转移无关。提示NCOA5低表达可促进胃癌细胞的增殖、分化，而上皮间质转化 (EMT) 通常被认为是肿瘤浸润和转移的前提，因此推测NCOA5可能参与了EMT过程，进而促进胃癌细胞的侵袭和转移。

总之，我们认为NCOA5低表达可能促进胃癌的发生及发展。

[1] Li D, Zeng Z, Yu T, et al. Expression and clinical implication of S100A12 in gastric carcinoma[J]. Tumour Biol, 2015,37(5):6551-6559.

[2] Guo J, Fan KX, Xie LI, et al. Effect and prognostic significance of the KAI1 gene in human gastric carcinoma[J]. Oncol Lett, 2015,10(4):2035-2042.

[3] Gao S, Li A, Liu F, et al. NCOA5 haploinsufficiency results in glucose intolerance and subsequent hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Cell, 2013,24(6):725-737.

[4] Liu CY, Feng GS. NCOA5, a molecular link between type 2 diabetes and liver cancer[J]. Hepatobiliary Surg Nutr, 2014,3(3):106-108.

[5] 陈娟,李东石,余英豪，等.Her-2蛋白在胃癌中的表达及其临床意义[J].世界华人消化杂志，2010，18(13)：1375-1379.

[6] 谢兆兰，陈国超，王明林.Musashi-2在胃癌中的表达及临床意义[J].临床荟萃，2015，30(3)：246-249.

[7] 马从乾，王雅，杨轲，等.核受体辅激活蛋白5在结直肠癌中的表达及其临床意义[J].中华实验外科杂志，2015，32(4)：724-726.

[8] 殷德涛，曹胜利，王勇飞，等.甲状腺乳头状癌中Runx3基因mRNA和蛋白表达及其相关性[J].中华医学杂志，2011，91(20)：1393-1396.

[9] 于伟勇，何敬东，陈小飞，等.胃癌组织Klf4表达变化及其临床意义[J].山东医药，2016，56(24)：49-50.

[10] 李智，王硕，侯科佐，等.胃癌组织ATP1 A2的表达及机制探讨[J].山东医药，2016，56(24)：5-8.

[11] Chen GQ, Tian H, Yue WM, et al. NCOA5 low expression correlates with survival in esophageal squamous cell carcinoma[J]. Med Oncol, 2014,31(12):376.

[12] Dhar D, Seki E, Karin M. NCOA5, IL-6, type 2 diabetes, and HCC: the deadly quartet[J]. Cell Metab, 2014,19(1):6-7.

[13] Garbers C, Aparicio-Siegmund S, Rose-John S. The IL-6/gp130/STAT3 signaling axis: recent advances towards specific inhibition[J]. Curr Opin Immunol, 2015(34):75-82.

[14] Boser A, Drexler HC, Reuter H, et al. SILAC proteomics of planarians identifies Ncoa5 as a conserved component of pluripotent stem cells[J]. Cell Rep, 2013,5(4):1142-1155.

[15] Zervou MI, Goulielmos GN, Castro-Giner F, et al. A CD40 and an NCOA5 gene polymorphism confer susceptibility to psoriasis in a Southern European population: a case-control study[J]. Hum Immunol, 2011,72(9):761-765.

[16] He G, Karin M. NF-κB and STAT3-key players in liver inflammation and cancer[J]. Cell Res, 2011,21(1):159-168.

[17] 马从乾，王雅，杨轲，等.核受体辅激活蛋白5在结直肠癌中的表达及其临床意义[J].中华实验外科杂志，2015，32(4)：724-726.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.40.022

R735.2

B

1002-266X(2016)40-0067-03

2016-01-13)