黔西南州引种金银花中药质量检测研究

2016-12-04，，，

种子 2016年12期

关键词：草苷黔西南州木犀

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(1.黔西南州食品药品检验检测中心，贵州兴义 562400； 2.黔西南州天地药业贸易有限公司，贵州兴义 562400)

黔西南州引种金银花中药质量检测研究

范红梅1，刘志海1，金昭1，赵列香2

(1.黔西南州食品药品检验检测中心，贵州兴义 562400； 2.黔西南州天地药业贸易有限公司，贵州兴义 562400)

以3年不同批次的加工药材为试验材料，采用HPLC法，对其绿原酸和木犀草苷的含量进行了测定，旨在评估黔西南州引种金银花的中药材质量，为其质量检测及引种栽培提供科学依据。结果表明，检测色谱系统的适用性优良，检测条件的精密度和稳定性好；3年不同批次的引种金银花中绿原酸的含量为2.4%～4.2%，木犀草苷含量为0.067%～0.137%，均明显高于药典规定含量，质量优良。

HPLC法；绿原酸；木犀草苷；金银花

金银花又名忍冬、双花等，为忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾或带初开的花，传统以花蕾入药，是常用大宗中药材，主产于山东、河南、湖北等地。金银花药用价值高，耐旱、耐寒、抗盐碱、抗风沙，是防风固沙、保持水土、绿化荒山的良好生态植物[1]。金银花味甘，性寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、疏散风热之功效，用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症[2]。现代药理及临床研究表明，金银花对于多种病菌有较强的抗菌作用和较好的治疗效果。有关金银花及同属植物的化学成分研究有很多报道，从金银花中分离鉴定的化学成分类型较多，主要有挥发油类[3-5]、有机酸类[6-9]、黄酮类[10]和环烯醚萜类[11-12]等。贵州省黔西南州在“石漠化”攻坚扶贫过程中，成功总结出了中海拔地区的金银花种植模式，据不完全统计，截止2014年全州种植面积7 330 hm2左右。近年来，随着产业发展及药用习惯的规范，黔西南州金银花引种试种栽培也时有发生。2012年黔西南州天地药业贸易有限公司从山东省平邑引种金银花(忍冬)到黔西南州进行种植试验。本研究旨在跟踪和检测引种金银花质量，以期对金银花的引种和技术检测提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料为黔西南州引种忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的加工药材，由黔西南州天地药业贸易有限公司提供。

1.2 试药与仪器

绿原酸(含量96.6%)，木犀草苷(含量94.0%)，均购自中国食品药品检定研究院。乙腈(色谱纯)、水(超纯水)、磷酸、乙醇、冰醋酸、甲醇均为为分析纯。Waters e 2695型高效液相色谱仪，Empower色谱数据工作站，电子天平，电热恒温干燥箱。

1.3 方法

1.3.1 绿原酸含量测定

1) 色谱条件：Gemini-NX 5 u C18110 A(250×4.6 mm)色谱柱，以乙腈∶0.4%磷酸溶液(13∶87)为流动相，柱温30 ℃；流速1 mL/min；进样量10μL；检测波长327 nm。

2) 对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含45.2μg的溶液，上机测定。

3) 供试品溶液的制备：取金银花粉末(过4号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇50 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率35 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀、滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，上机测定。

4) 线性关系的考察：分别吸取绿原酸对照品溶液2，5，10，20，25μL注入液相色谱仪，按1.3.1 1)项下进行色谱分析，以对照品进样量为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，计算回归方程。

5) 精密度试验：精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，按1.3.1 1)项下进行色谱分析，记录绿原酸峰面积。

6) 重复性试验：精密称取同一批金银花粉末6份，按1.3.1 3)项下方法操作，制备供试品溶液，按1.3.1 1)项下进行色谱分析，计算其含量。

7) 稳定性考察：取同一批金银花供试品溶液，在0，2，4，8，12，24 h，按1.3.1 1)项下进行色谱分析，记录绿原酸峰面积。

8) 加样回收试验：精密称取已知含量的样品金银花药材6份，每份约0.25 g，加入同等量的绿原酸对照品，按1.3.1 3)项方法操作，制备供试品溶液，按1.3.1 1)项下进行色谱分析，记录峰面积，计算回收率。

1.3.2 木犀草苷含量测定

1) 色谱条件：采用Agilent ZORBAX SB-phenyl(4.6×250 mm)色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.5%冰醋酸溶液为流动相B，0～15 min流动相A(10%→20%)，流动相B(90%→80% )；15～30 min流动相A(20%)，流动相B(20%)，30～40 min流动相A(20%→30%)，流动相B(80%→70%)进行梯度洗脱，柱温30 ℃；流速1 mL/min；进样量10μL，检测波长350 nm。

2) 对照品溶液的制备：精密称取木犀草苷对照品适量，加70%乙醇制成每1 mL含35.5μg的溶液，上机测定。

3) 供试品溶液的制备：取金银花粉末(过4号筛)约 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率35 kHz)1 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤10 mL，回收溶剂至干，残渣用70%乙醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，上机测定。

4) 线性关系的考察：分别吸取木犀草苷对照品溶液2，5，10，20，25μL注入液相色谱仪，按1.3.2 1)项下进行色谱分析，以对照品进样量为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，计算回归方程。

5) 精密度试验：精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，按1.3.2 1)项下进行色谱分析，记录木犀草苷峰面积。

6) 重复性试验：精密称取同一批金银花粉末6份，按1.3.2 3)项方法操作，制备供试品溶液，按1.3.2 1)项下进行色谱分析，计算其含量。

7) 稳定性考察：取同一批金银花供试品溶液，在0，2，4，8，12，24 h，按1.3.2 1)项下进行色谱分析，记录木犀草苷峰面积。

8) 加样回收试验：精密称取已知含量的样品金银花药材6份，每份约1 g，加入同等量的木犀草苷对照品，按1.3.2 3)项方法操作，制备供试品溶液，按1.3.2 1)项下进行色谱分析，记录峰面积，计算回收率。

2 结果与分析

2.1 系统适用性、精密度与稳定性

按照1.3.1和1.3.2的操作，绿原酸和木犀草苷的色谱分离较好，峰形对称(图1～图4)，不受试剂或样品中其他物质干扰，表明这2种中物质的检测色谱条件可行。绿原酸标准曲线为y=33 464x-5 742，R2=0.999 9；精密度检测RSD值为0.7%；重复性检测RSD值为1.1%；稳定性检测的RSD值为1.5%，添加回收率为95.1%。木犀草苷标准曲线为y=30 506x+2 107，R2=0.999 8；精密度检测RSD值为0.4%；重复性检测RSD值为1.7%；稳定性检测的RSD值为1.1%，添加回收率为92.1%。说明检测系统精密度和稳定性良好。

2.2 供试样品的药用质量

3年内不同批次样品绿原酸的含量在2.4%～4.2%之间，是药典规定含量的1.6～2.8倍；木樨草苷含量变化为0.067%～0.137%，是药典规定含量的1.34～2.74倍，说明贵州黔西南州引种金银花的中药材质量均已达到要求且质量优良。

图1 绿原酸对照品色谱图

图3 木犀草苷对照品色谱图

图4 供试品木犀草苷色谱图

3 讨论

3年的跟踪检测结果(表1)表明，黔西南州引种试验所产金银花主要成分绿原酸和木犀草苷的含量均符合《中国药典》的要求(2015年版规定(绿原酸含量不得少于1.5%；木犀草苷含量不得少于0.050%)[13]，黔西南州引种金银花试验基本成功，从样品含量结果可以看出，绿原酸含量虽有所降低，但远高于《中国药典》之规定，木犀草苷含量从引种第1年的0.137%(最高)到第3年的0.067%，逐年下降，是否由于黔西南州气候、土壤等环境因素不利于有效成分木犀草苷的富集，还有待进一步考察研究。

表1 不同批次供试样品的绿原酸和木犀草苷含量

年份批号药典规定含量① 供试样品量绿原酸(%)木犀草苷(%)绿原酸(%)木犀草苷(%)20132013064．20．1312013073．90．1372014201404≥1．5≥0．052．40．0952014052．70．10320152015053．00．067201505013．10．0832015062．70．072

注：“①”引自2015版《中华人民共和国药典》。

[1]王二欢,刘双利,宋治,等.药用植物抗寒生理研究进展[J].中国农学通报,2014,30(16):79-84.

[2]黄喜茹,刘伟娜,曹冬.金银花的化学成分药理作用研究评析[J].中医药学刊,2005,23(3):418-419.

[3]王国亮,朱信强,王金凤,等.豫北平原栽培金银花精油化学成分分析[J].中国中药杂志,1992,17(5):268-271.

[4]侯冬岩,回瑞华,杨梅,等.抗病毒草药金银花的化学成分分析[J].鞍山师范学院学报,2003,5(4):46-48.

[5]王艳萍,薛兴亚,章飞芳,等.正相液相-气相-质谱联用技术分离分析金银花挥发油化学成分[J].世界科学技术—中医药现代化,2008,10(6):45-55.

[6]毕跃峰,田野,裴姗姗,等.金银花化学成分分析[J].郑州大学学报(理学版),2007,39(2):184-186.

[7]马双成,毕培曦,黄荣春,等.金银花药材中抗呼吸道病毒感染的咖啡酰奎宁酸类成分的定量研究[J].药物分析杂志,2005,25(7):751-755.

[8]Peng L Y,Mei S X,Jiang B,et al.Constituents from Lonicera japonica[J].Fitoterapia,2000,71(6):713-715.

[9]郑荣,郏征伟,王柯,等.金银花提取物中6种有机酸类成分的测定[J].中成药,2013,35(3):560-564.

[10]Kun H S,Jung O P,Kyu C C,et al.Flavonoids from the aerial parts ofLonicerajaponica[J].Arch Pharm Res,1992,15(4):365-370.

[11]毕跃峰,田野,裴姗姗,等.金银花中裂环环烯醚萜苷类化学成分研究[J].中草药,2008,39(1):18-20.