新鲜冰冻血浆轻度溶血对Ⅷ因子测定的影响

丁喜玉

【摘要】 目的 研究分析新鲜冰冻血浆（FFP）轻度溶血对Ⅷ因子测定的影响， 为今后临床血液检测及新鲜冰冻血浆质量控制提供参考。方法 制备新鲜血浆， 依次将0.01 g/L、0.10 g/L、0.50 g/L、1.00 g/L、2.00 g/L五种不同含量血红蛋白（Hb）标本进行冰冻， 每种取样备制15份， 将新鲜冰冻血浆放置于25℃常温状态解冻静置， 分别在0、1、2、3、4 h不同时间节点内进行Ⅷ因子检测， 对比Ⅷ因子浓度的变化情况。结果 在相同血红蛋白含量血浆在冰冻不同时间内Ⅷ因子含量无明显改变（P>0.05）；相同冰冻时间段内不同血红蛋白含量血浆Ⅷ因子含量无明显改变（P>0.05）。结论 当新鲜冰冻血浆中血红蛋白指标<2 g/L， 且25℃室温冰冻溶解环境中放置时间<4 h， 则溶血不会对冰冻血浆Ⅷ因子产生明显影响。

【关键词】 新鲜冰冻血浆；轻度溶血；Ⅷ因子；检测影响

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.27.190

《全血及成分血质量要求GB 18469-2012》对于临床血液检测质控中严格规定， 无论是全血或去白细胞悬浮红细胞的检测中均要求在运输存储待检前溶血率需控制在红细胞总数0.8%以下；不过该质量标准对于新鲜冰冻血浆的质量控制要求中却未记录溶血率水平标准[1-3]。为进一步探讨溶血是否会影响Ⅷ因子在新鲜冰冻血浆内的浓度， 本文通过0.01 g/L、0.10 g/L、0.50 g/L、1.00 g/L、2.00 g/L五种不同含量Hb的新鲜血浆标本15份进行不同时间段内研究， 检测Ⅷ因子浓度的变化情况， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 依据《全血及成分血质量要求GB 18469-2012》制备新鲜冰冻血浆， 将明确检测符合该要求冰冻血浆内Ⅷ因子浓度质量控制标准， 且血红蛋白指标<10 mg/L的血液样本15份， 并在每份冰冻血浆留存5 ml作为备用样本， 取5 ml血样行枸橼酸钠抗凝血。

1. 2 仪器与试剂 选择希森美康医用电子有限公司生产的sysmex-CA510全自动血凝分析仪以及sysmex-XS-1000i全自动血液分析仪。凝血因子凝固法检测试剂盒（MDC HEMOSTA-SIS， TECO MEDICAL Instruments Production+Trading GM-BH，批号11237812）；凝血因子标准品（MDC HEMOSTA-SIS， TECO MEDICAL Instruments Production+Trading GM-BH，批号047B-C08019）；APTT测定试剂盒（上海太阳生物技术有限公司， 批号112170）；血浆游离血红蛋白试剂盒（北京瑞尔达生物科技有限公司， 批号140421）。

1. 3 方法 取5 ml冰冻血浆样本置于试管内， 先行3000 r/min离心15 min， 弃血浆后将余下血细胞添加5 ml无菌蒸馏水， 一起置入-30℃冰箱中反复冻融3次， 确保红细胞破裂。采取希森美康医用电子有限公司sysmex-XS-1000i全自动血液分析仪检测Hb指标含量， 可选择添加无菌蒸馏水配伍调整血红蛋白浓度， 控制在60 g/L即可， 随后再分别稀释成Hb的含量为30 g/L、15 g/L、3 g/L的标本。

从每个血袋导管留取的FFP各吸580 μl于5支试管中， 再分别加入无菌蒸馏水和Hb， 含量（g/L）为3、15、30、60。标本各20 μl， 则每支待测试管中FFP的Hb含量（g/L）分别为0.01、0.10、0.50、1.00、2.00， 将Hb含量不同的5支待测试管置于25℃常温状态解冻静置， 并在0、1、2、3、4 h测其Ⅷ因子的含量。

1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 在相同血红蛋白含量血浆在冰冻不同时间内Ⅷ因子含量变化比较 在新鲜冰冻血浆血红蛋白同一指标浓度情况下， 在0、1 h、2 h、3 h、4 h不同时间节点内进行Ⅷ因子检测， 相同血红蛋白含量血浆在冰冻不同时间内Ⅷ因子含量无明显改变， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2. 2 相同冰冻时间段内不同血红蛋白含量血浆Ⅷ因子含量变化比较 通过对相同冰冻时间段内不同血红蛋白含量血浆进行Ⅷ因子检测分析， 相同冰冻时间段内不同血红蛋白含量血浆Ⅷ因子含量无明显改变， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3 讨论

在《全血及成分血质量要求GB 18469-2012》中严格制定了新鲜冰冻血浆内Ⅷ因子浓度必须达到>0.7 IU/ml的质量控制标准， 并对新鲜冰冻血浆的性质有相应要求， 无明显色泽， 无异常蛋白析出或伴有气泡， 液体呈黄色；在《全血及成分血质量要求GB 18469-2012》中虽对血浆Ⅷ因子浓度及性状有着一定要求[4]， 但对于不同血红蛋白Hb含量有无影响Ⅷ因子却缺乏相关标准。而在实际血液检测中， 普遍采取的质控方式多选择将含有红细胞或伴有一定程度溶血现象的冰冻血浆进行剔除[5]， 这对部分血浆量较少或难以持续采血者来讲有着较大影响。对此本文通过对冰冻血浆各类血红蛋白指标水平及25℃解冻放置时间同时间节点进行Ⅷ因子含量检测分析。

综上所述， 当新鲜冰冻血浆中血红蛋白指标<2 g/L， 且25℃室温冰冻溶解环境中放置时间<4 h， 则溶血不会对冰冻血浆Ⅷ因子产生明显影响。

参考文献

[1] 梁雪开. 新鲜血浆溶血程度对凝血因子Ⅷ活性的影响. 广州医药， 2010， 41（1）：50-51.

[2] 连晓征， 陈惠民， 刘玲英. 新鲜冰冻血浆轻度溶血对Ⅷ因子测定的影响. 临床输血与检验， 2015， 17（5）：463.

[3] 邓明扬， 张广森， 李斌， 等. 血栓性血小板减少性紫癜患者血管内皮细胞标志物和溶血参数的动态分析及其临床意义. 中华血液学杂志， 2005， 26（3）：163-166.

[4] 张敬宇， 刘芳， 马珍妮， 等. 抗血管性血友病因子抗体在特发性血栓性血小板减少性紫癜发病机制中的作用. 中华检验医学杂志， 2012， 35（12）：1118-1124.

[5] 高宝山， 白新学， 金点石， 等. 脑梗死患者血浆血管性血友病因子等三种因子的测定及其临床意义. 中国脑血管病杂志， 2006， 3（8）：365-368.

[收稿日期：2016-05-16]