中药调节细胞色素P450酶活性的方法学研究概述

周盛会 汤浩

摘要：本文通过检索PubMed（美国国家医学图书馆信息检索系统）、中国知识资源总库（CNKI）、中国生物医学文献数据库（CBM）及中国学术期刊数据库（万方数据）等中外文数据库十几年来有关中药调节药物代谢细胞色素P450酶（CYP450）的期刊文献，主要从CYP450体内体外研究方法方面进行归纳、整理和分析，为今后中药调节CYP450酶研究提供参考。

关键词：细胞色素P450；检测方法；中药；综述

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.11.035

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）11-0131-06

Abstract： Through searching literature about cytochrome P450 from PubMed， CNKI， CBM and Wanfang database in the recent 10 years， this article concluded， summarized and analyzed vivo and vitro research methods of cytochrome P450 to provide references for the study on TCM cytochrome P450 enzyme.

Key words： cytochrome P450； methodology； TCM； review

随着临床应用和研究的不断深入，中药有关的不良反应逐渐受到重视。有临床证据显示，中药与西药合用后可能发生药物之间的相互作用，包括不良反应，如银杏与华法令合用后有加重出血的倾向[1]、贯叶连翘与茚地那韦合用降低疗效[2]等。中药与临床药物联合使用时，因药物代谢而产生的相互作用发生率最高，与药物体内代谢关系最大的酶是细胞色素P450（CYP450）。该酶系可被多种药物诱导或抑制，且有显著个体差异。因此，鉴定更多由CYP450催化代谢的药物，研究其基因表达与调控的分子机制，阐明酶个体差异和种族差异的机理，能够为临床合理用药提供实验依据，做到用药剂量个体化，提高疗效，减少不良反应。兹从中药成分的CYP450研究方法方面综述近年来国内外所报道的研究成果，为中药有效成分对CYP450同工酶活性影响研究提供参考。

1 细胞色素P450概述

CYP450又称肝药酶，在哺乳动物中，主要分布于肝脏，在肺、皮肤、肠道也有少量表达。CYP450因其蛋白质种类的多样性及其底物的重叠性，使CYP450酶系可以催化多种类型的反应，不仅对许多外来物质如农药及其他环境有毒物质具有代谢作用，还参与一些具有重要生理功能的内源性物质如激素、脂肪酸等的代谢，在生物体中起十分重要的作用。

与临床药物代谢密切相关，常检测的CYP450酶亚型有CYP1A2、2A6、2C、2D6、2E1和3A4，分别约占总P450酶代谢药物的比例为4%、2%、12%、20%、2%和55%，占肝脏总CYP450含量的比例分别为13%、4%、20%、4%、7%和30%。

2 细胞色素P450的研究方法

2.1 体内研究

近年来，随着现代色谱技术如高效液相色谱法（HPLC）、液相-质谱联用法（LC-MS/MS）及超高效液相色谱法（UPLC）的迅猛发展，“鸡尾酒”（Cocktail）探针药物法已取代了传统探针药物法用于CYP450酶活性的测定。“Cocktail”探针药物法通过同时使用2种及以上特定探针底物而描述药代动力学特征性变化的实验，以研究药物对CYP450酶亚型活性的诱导或抑制作用，该法可同时检测多种药物代谢酶的活性，将个体差异的影响降至最低，还可在单个实验过程获得多个代谢途径的信息，能真实客观反映药物在体内的代谢特征，但不足之处在于CYP450同工酶具有底物交叉性。“Cocktail”探针药物法结合了现代色谱技术，大大提高了多组分复杂样本中物质检出的有效性、准确性及检测速率，已成为研究CYP450最主要、最常用的体内方法。

2.1.1 动物体内研究 目前主要采用Wistar和SD两种品系大鼠进行CYP450酶活性的研究。王氏等[3]建立SD大鼠血浆中非那西丁与其代谢物对乙酰氨基酚含量的HPLC测定而确证甘草水提液对CYP1A2有明显诱导作用；Xiao等[4]分别用双氯芬酸、咪达唑仑、右美沙芬、氯唑沙宗和奥美拉唑作为探针药物，结合LC-MS研究胡黄连苷对CYP2C9、3A4、2D6、2E1和2C19的影响；Hu等[5]用“Cocktail”探针药物法结合HPLC测定黄芩对4种主要CYP450酶活性的影响，显示黄芩对CYP1A2存在抑制作用，降低其活性，可能会导致经此酶代谢的其他药物代谢减慢，血药浓度升高，作用时间延长。由于种属差异的广泛存在，直接将动物体内实验数据外推至人体内药物相互作用有时并不准确，因此，动物体内实验只可用于初步预测药物间相互作用。

2.1.2 人体内研究 由于CYP450酶的多态性，药物作用广泛存在种属和个体差异，所以，在动物体内研究基础上，应在人体内进行药物对CYP450活性的研究。肖氏等[6]采用“Cocktail”探针药物法结合LC-MS/MS，以咪达唑仑作为探针底物，测定金雀异黄酮在人体内对CYP3A活性的影响，结果金雀异黄酮对体内CYP3A酶活性具有显著诱导作用，并建议临床使用时应注意经CYP3A代谢的药物与金雀异黄酮合用时可能发生的潜在相互作用。Stewart等[7]采用UPLC-MS/MS与“Cocktail”法联用测定人血浆和尿中6种CYP450的探针药物和代谢产物浓度，用于评估CYP450表型特征。但该法因受试者的限制而难以广泛开展。

2.2 体外研究