枣庄地区高产奶牛鲜胚移植技术研究

刘兵 （山东省枣庄市畜牧兽医局 277800）

枣庄地区高产奶牛鲜胚移植技术研究

刘兵 （山东省枣庄市畜牧兽医局 277800）

为了解决枣庄地区奶牛存栏量少，引进高产奶牛价格昂贵，改良周期太长的问题，进行了以引进优良高产奶牛种母牛，采用人工授精、采集鲜胚移植入低产奶牛的子宫内让其正常发育、分娩，直接获取高产奶牛的研究。

高产奶牛；胚胎移植；饲养管理

1 材料和方法

首先从上海光明乳业引进良种奶牛，同时购置鲜胚移植所需的设备和药品试剂等；其次按选配标准选择受体牛；三是采集优良胚胎，采用同期发情技术移植进受体牛子宫内；四是加强移植后和产后管理，保证成功率。此项目与山东农业大学、枣庄市畜牧局、台儿庄区畜牧水产局、山东祥和乳业有限责任公司等共同研究。

2 研究内容

2.1 供体、受体奶牛的选择及饲养管理

2.1.1 供体母牛的选择

2014年5～6月在上海光明乳业奶牛场选择高产优质母奶牛5头，作为本次试验用的供体母牛。选择标准：①供体牛品种优良，具有较高的生产性能；②体格健壮，性情温和，无遗传性疾病，繁殖机能正常，年龄在13月龄到8岁为宜；③产犊记录清楚，无流产病史，产后60d以上，有两次以上正常发情记录；④生殖器官正常，无产科性疾病，长期空怀的母牛不做供体；⑤重复超数排卵的供体牛每次处理需间隔60d左右，连续处理4～5次后进行配种，使之妊娠，产犊后再实施超排，凡2次超排反应差的母牛不宜再用。

2.1.2 受体牛的选择

本地区挑选奶牛300头作备用受体牛。选择标准：①选择低产奶牛为受体；②受体牛须有两个以上正常情期，生殖道分泌物清亮，牵缕性强，无灰白或灰黄絮状物存在；③无繁殖机能疾病和传染病；④性情温顺，体高110cm以上，毛色光亮，体格健壮，膘情在7成以上；⑤经产牛年龄为2～6岁、产犊后90d以上，青年牛达到16月龄以上、体重达到成年母牛体重的75%；⑥产犊性能和泌乳性能良好，无流产史，上胎无难产、助产情况；⑦人工授精两次或鲜胚移植两次不孕者不挑选；⑧直肠检查，检查卵巢、子宫无粘连，游离性好，子宫位置、体积、弹性、质地、收缩反应正常，选择卵巢上具有功能性黄体。

2.1.3 供体、受体牛的饲养管理

①保持牛群饲养环境卫生，干燥，棚舍温度适宜，饲养环境稳定，避免应激反应；②制定合理的供体牛日粮配方，保证正常的营养状况和营养平衡，受体牛在移植前6～8周开始补饲，补充微量元素和维生素；③满足牛清洁饮水的需要；④经产牛做供体产后至超排冲胚和育成牛做供体超排冲胚前3个月时，加强饲养，平均日增重0.30～0.40kg/d，使超排时总增重达个体体重的5%以上。

2.2 胚胎移植

对5头供体奶牛在发情配种后第7天和第8天冲胚。

2.2.1 非手术冲卵技术操作步骤

①保定供体牛，呈头高尾低状态，在第一、二尾椎结合处用2%利多卡因 （5～10ml）作尾椎硬膜外麻醉；②排粪及清洁外阴部。用清洁温水清洗后用消毒毛巾擦干净；③采用直肠把握法。用子宫颈扩张棒扩张子宫颈，插入黏液去除棒，抽出子宫颈内黏液。将冲卵管插入须冲洗的子宫角，到达子宫角弯曲部位时将钢芯退出约3cm，继续向前推进冲卵管，当钢芯再次到达子宫角弯曲部位时，再将钢芯退出少部分并将冲卵管向前推进，如此反复，直到冲卵管前端到达子宫角深部。从冲卵管冲气孔用注射器注入约9～18ml空气使气球膨胀，关闭进气孔后，将钢芯取出开始冲胚；④用注射器从冲卵管口将冲卵液推入子宫角，用直肠中的手将子宫角抬高，用集卵漏斗接入集卵皿内。一般反复冲7～8次，冲洗完后推两次空气进入子宫角，帮助液体排空；⑤冲胚时按每头牛用一个容器装回收液，做好标记。

2.2.2 术后处理

冲卵结束后，将气球内的空气放掉，把冲卵管抽回至子宫体，直接从冲卵管灌注青霉素、链霉素和氯前列烯醇4ml，再拔出冲卵管。

2.2.3 检胚

①检胚前的准备；检胚前试验室及各种器具要事先作好消毒工作，室温要保持在25℃；②胚胎回收采取两种方法。过虑法回收和沉淀法回收；③找胚。用体视显微镜放大6×1.5倍进行找胚，找到的胚胎用自制的玻璃微吸管把胚胎取出，检出的胚胎放入装有培养液的平皿中。

2.2.4 胚胎的质量鉴定和分级

鉴定一般在放大60～200倍体视显微镜下进行。①鉴定依据。一是未受精卵一没有分裂球及胞团的卵子；二是桑椹胚一发情后5～6d冲出的卵，只观察到球状的细胞团，分不清分裂球，占据透明带内腔的大部分；三是致密桑椹胚一发情后第6～7天回收的卵，细胞团变小，占透明带内腔的60～70%；四是早期囊胚一发情后第7～8天冲出的卵，细胞的一部分出现发亮的胚泡腔；细胞团占透明内腔的70～80%，难以分清内细胞团和滋养层；五是囊胚一发情后第7～8天回收的卵子内细胞团和滋养层界线清晰，胚泡腔明显，细胞充满透明带内腔；六是扩张囊胚一发情后第8～9天回收的卵子，胚泡腔明显扩大，体积增大到原来的1.2～1.5倍，与透明带之间无空隙，透明带变薄，相当于正常厚度的1/3；②胚胎的分级。根据卵子分裂与否，形态色调、分裂球大小、均匀度、细胞的密度、透明带以及变性情况将胚胎分为A、B、C、D4个等级。A、B、C级胚胎为可用胚胎，D级胚胎为不可用胚胎。通过5次供体牛超数排卵冲出的胚胎，鉴定后A、B、C3级胚胎占87.29%，共254枚，D级胚胎37枚。

2.3 鲜胚移植

供、受体牛经过同期发情处理，从供体牛获得的胚胎立即移植到受体牛的子宫内。

2.3.1 胚胎冲洗

在移植前对胚胎进行冲洗，方法是在一个培养皿中，分别滴10～12滴培养液，每滴0.1ml左右，用玻璃微吸管吸入培养液，从培养液中取出胚胎放入第1滴培养液中，如此反复直到最后1滴冲洗完毕。

2.3.2 装细管及输胚器 （枪）

用0.25ml的塑料细管，采用7段装胚法，用微型注射器吸入。输胚器的安装基本与细管精液输精枪相同，装好后要注意保温和避免污染，并要尽快输入受体牛子宫。

2.3.3 合理搭配受体和胚胎

一般处于发情第6天的受体牛选用致密桑椹胚移植；处于发情第7天的受体牛选用早期囊胚移植；处于发情第8天的受体牛选用囊胚或扩张囊胚移植。

2.3.4 输胚

受体牛采用备选的300头低产奶牛，采取同期发情后共有278头奶牛经同期发情鉴定后，符合受体牛标准。输胚前确定受体牛处于发情周期的第6～8天，通过直肠检查卵巢上是否有明显的黄体存在，只有明确了黄体的存在并发育正常，才能进行输胚，而且胚胎必须输在有黄体一侧的子宫角深处。操作方法：先将塑料保护外套插入阴道，再插入输胚器。尽量减少对子宫的刺激，避免子宫受伤，从插入输胚器到开始输胚的时间越短越好，一般最好在3min内完成操作。

2.4 妊娠诊断和饲养管理

2.4.1 妊娠诊断

移植后的受体牛分群饲养，加强管理，观察并做好受体牛的发情记录。移植70～90d后进行妊娠诊断。受体牛经移植妊娠成功158头，移植成功率达62.40%。

2.4.2 饲养管理

对鲜胚移植后妊娠的受体奶牛加强饲养管理，避免应激反应，妊娠受体在产前3个月补充足量的维生素、微量元素，钙磷比例控制在1～1.5：1。产前45d，适当限制能量摄入，既要保证胎儿的正常发育，又要避免难产。避免打斗、追赶，不要抽打受体牛以免引起流产，加强防疫消毒，保持圈舍清洁卫生。

2.5 分娩及产后管理

（1）对162头受体妊娠母牛的分娩情况统计见附表。

附表 受体妊娠母牛分娩情况统计表

手术分娩的原因主要是选择小规模饲养户的受体牛，怀孕后期饲养管理没有跟上，导致受体牛膘情较差，个别胎儿体位不正造成的。流产受体牛主要是因为怀孕后期患病，治疗不及时造成的。

（2）哺乳母牛的饲养管理。①对哺乳期的母牛加强饲养管理，补充足量的微量元素和维生素，以满足犊牛的生长发育，采取专人专管；②优良犊牛一定要让其有充分的母乳来满足犊牛的需要，否则会影响犊牛的生长发育。

3 结论

通过高产优质良种供体奶牛的引进，开展超数排卵、同期发情、鲜胚移植、妊娠、分娩管理等试验。取得了较好的研究目标。供体奶牛超数排卵后冲胚有效胚胎平均达10.08枚/头/次，鲜胚移植成功率达62.40%，经鲜胚移植产后的母牛1个产奶周期平均产奶量达10.8t，乳脂率达到3.6%，经济效益和社会效益明显增加，提高了农民收入，为加快奶业产业化生产具有中重要的推动作用。