仔猪猪瘟母源抗体消长规律测定

罗先 岑晓鹏 应清香 范斯敏

（1，福建农林大学动物科学学院 350002；2，福建省南平市延平区动物卫生监督所 353000；3，福建省南平市动物疫病预防控制中心 353000；4，福建省南平市建阳区动物疫病预防控制中心 354200）

仔猪猪瘟母源抗体消长规律测定

罗先1岑晓鹏2应清香3范斯敏4

（1，福建农林大学动物科学学院 350002；2，福建省南平市延平区动物卫生监督所 353000；3，福建省南平市动物疫病预防控制中心 353000；4，福建省南平市建阳区动物疫病预防控制中心 354200）

选择福建省南平市某规模化猪场猪瘟抗体检测合格的10头能繁母猪，分别从每头母猪所生的仔猪中随机抽取2头，共20头，25日龄断奶，不注射猪瘟疫苗，分别于l日龄、5日龄、10日龄、15日龄、20日龄、25日龄、30日龄、35日龄、40日龄用猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒检测猪瘟抗体水平，通过检测数据掌握母源抗体的消长规律。结果表明，哺乳仔猪出生后5～10日龄血清抗体阳性率达到了100%，为最高。抗体水平于15日龄以后开始降低，至25日龄左右达到保护临界值 (80%阳性率)，40日龄时降低到5%。

仔猪；猪瘟；母源抗体；消长规律

哺乳仔猪在一段时间内被动地获得抵御病毒的能力，完全依赖于母源抗体的存在，但母源抗体又会影响免疫接种。本研究监测了断奶前后不同日龄的仔猪猪瘟抗体水平，得出的数据便于掌握母源抗体消长规律，有利于猪瘟免疫程序的合理制定。

1 材料与方法

1.1 试验样品

挑选的哺乳仔猪为福建省南平市某规模化猪场同期分娩的10头经产母猪 (分娩前均经过血清学检测，判定为猪瘟抗体合格保护力)所产，随机抽取每头母猪所产的仔猪中的2头，共20头。不接种猪瘟疫苗免疫，仔猪于25日龄断奶。分别于l日龄、5日龄、10日龄、15日龄、20日龄、25日龄、30日龄、35日龄、40日龄采集血液分离血清，并进行猪瘟抗体检测，观察母源抗体的消长规律。

1.2 试剂

IDEXX公司猪瘟病毒抗体 (CSFV-Ab)ELISA检测试剂盒，批号43220-Y241。包括用CSFV-Ag包被的微量反应板，阳性对照血清（Positive Control）， 阴性对照血清（Negative Control）， 样品稀释液（Sample Diluent）， 酶标抗体（Conjugate）， 10 倍浓缩洗涤液（Wash Concentrate×10）， TMB 底物溶液（TMB Substrate）， 终止液（Stop Solution）， 均购自北京IDEXX生物科技有限公司。

1.3 实验器材

MH-2微量振荡器、QL-901 Vortex离心机、Eppendorf 10～100μl单道移液器、 BRAND30～300μl 8 道移液器、 AXYGEN 200μl移液器吸头、Thermo Multiskan MK3型酶标仪、BioTek洗板机、500ml量筒、超纯水机、记时器等。

1.4 试验方法

（1）试验前，所有试剂需恢复到室温（18～25℃）。通过轻轻旋转使试剂均匀混合。

（2）取出用抗体包被的微量反应板，并将每个样品的位置在记录表上标记好。

（3）用8道移液器吸取50μl的样品稀释液加入每个反应孔中。

（4）阴阳性对照各设置2孔，余下的反应孔为被检样品。用单道移液器吸取50μl阴性对照血清加入阴性对照孔，再吸取50μl阳性对照血清加入阳性对照孔，然后吸取50μl被检样品加入余下的反应孔。

（5）将反应板置于振荡器中，振荡混匀。

（6）在恒温箱室温孵育2h。

（7）用洗板机洗涤每个反应孔，每孔加入300μl洗液，洗涤3次。最后一次洗涤后，将反应板在折叠好的纱布上拍干。

（8）用8道移液器吸取100μl酶标抗体加入每个反应孔中，在恒温箱室温下孵育30min。

（9）重复步骤（7）。

（10）用8道移液器吸取100μl的TMB底物溶液加入每个反应孔中。在室温条件下于避光处孵育10min。

（11）用8道移液器吸取100μl终止液加入每个反应孔中，终止反应。

（12）置于酶标仪上，用450nm单波长测定样本以及对照的吸光值（A450值）。

（13）结果计算：阻断率=（阴性对照平均A450值-样品A450值）/阴性对照平均A450值×100%；

（14）实验成立条件：阴性对照的平均A450值大于0.50， （阴性对照平均A450值-阳性对照平均A450值）/阴性对照平均A450值×100%的值大于50%。

（15）判定标准：具体见表1。

表1 猪瘟抗体检测结果判定

2 结果

母源抗体结果详见表2。

3 分析与讨论

从表2可以看出，仔猪出生后5～10日龄血清抗体阳性率达到了100%，为最高。抗体水平于15日龄以后开始降低，至25日龄左右达到保护临界值 (80%阳性率)，40日龄时已经降低到了5%。因为本试验中规定仔猪在25日龄断奶，所以母源抗体水平在25日龄后下降的速度变快，应该与此有关。鉴于该场的现有情况看来，在不采用超前免疫的情况下，26日龄为较佳的猪瘟疫苗免疫时间。

通过试验还发现，仔猪母源抗体水平下降速度取决于对应母猪的抗体水平，这与以往的一些研究结果基本符合。Vandeputte[1]发现，母源抗体能在哺乳仔猪吃奶后2h后被检测到，并能持续7周以上。猪瘟强毒在仔猪7周龄免疫后不能感染机体，未免疫的对照组则呈现出典型的发病症状。刘莉等[2]通过检测400头仔猪的血清抗体发现，猪瘟疫苗按常规免疫接种后，母猪产下的仔猪其母源抗体呈现出正态分布，从1日龄开始逐渐升高，可在11～16日龄达到最高峰值，之后母源抗体将随着仔猪日龄的增长开始逐渐降低，大约有部分仔猪（将近50%）的抗体水平于21日龄时降到1：16甚至更低。在这个阶段接种免疫疫苗不但能保持抗体在血清中的效价，还能避开干扰的母源抗体。林毅等[3]应用猪瘟Dot-ELISA试剂盒检测仔猪的抗体结果如下：7日龄猪的瘟抗体保护率为80.0%、14日龄的保护率为60.0%、21日龄的保护率为33.3%、28日龄的保护率为13.4%、35日龄的保护率为6.7%。其中7日龄仔猪的母源抗体水平较高。

表2 仔猪猪瘟母源抗体检测结果

综上所述，仔猪的母源抗体消长规律决定了仔猪猪瘟的免疫日龄，而这一规律必须通过抗体监测数据来确定。选择的免疫时间应该为仔猪母源抗体降低至保护率80%的这个最低临界值的日龄，这样既能维持抗体在血清中的效价，又能不受母源抗体的干扰。由于母猪的血清抗体与仔猪的母源抗体水平有着紧密的联系，所以在生产实践中应定期监测母猪的母源抗体水平，根据检测所得的数据对免疫程序进行调整优化，才能够更科学地提高猪群对猪瘟病毒的免疫力，有效地控制和避免猪瘟疫情在猪场的发生。

[1]灾andeputte J,Too HL.Adsorption of colostral antibodies against classical swine fever,persistence of maternal antibodies,and effect on response to vaccination in baby pigs[J].Am J灾et Res,2001,62(11):1805-1811.

[2]刘莉,金璐娟,杨旭,等.规模化猪场猪瘟母源抗体消退规律[J].黑龙江畜牧兽医,2004(10)：46-47.

[3]林毅,冯金传,张道永.规模化猪场4种免疫程序的免疫效果比较[J].中国兽医科技,2000,30(4)：20-22.