3578例ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测结果分析

刘萍

3578例ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测结果分析

刘萍

目的探讨ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测对自身免疫性疾病的诊断意义。方法收集2011～2014年在我院就诊并进行ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测的患者共3578例，分析检测结果。结果以ANA、dsDNA和ENA抗体谱中≥1种抗体检测结果阳性即为阳性标本，结果显示女性阳性率显著高于男性（P＜0.01）；ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测结果阳性可见于多种临床疾病，以系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关节炎（RA）、混合性结缔组织病（MCTD）、干燥综合征（SS）多见，其中系统性红斑狼疮最常见；在SLE、RA、MCTD、SS检测中，ANA对抗原的检测较全面，覆盖面广，检测阳性率高，但特异性不强；dsDNA在SLE的诊断中具有重要意义，特异性高，但敏感性差；ENA抗体谱检测阳性率低，特异性强。三者进行联合检测，可以通过互补提高自身抗体的检出率。结论自身免疫性疾病患者体内存在多种自身抗体，联合检测ANA、dsDNA和ENA抗体谱有助于自身免疫性疾病的诊断和鉴别。

ANA；dsDNA；ENA抗体谱；自身免疫性疾病

自身免疫性疾病（autoimmune diseases，AID）是由于自身抗原表位反应的抗体或自身反应性淋巴细胞参与，由自身免疫反应引发，并导致一系列组织损伤或功能障碍的疾病。目前主要是通过临床表现和实验室检查来诊断AID的类型。抗核抗体（ANA）、抗双链脱氧核糖核酸抗体（dsDNA）、抗核抗体谱IgG（ENA抗体谱）的检测是AID的常用实验室检测指标。为了进一步研究ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测对AID诊断的作用与意义，现对2011～2014年在本院进行ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测的3578例患者检测结果进行分析。

1 资料与方法

1.1 资料来源2011～2014年在本院就诊并进行ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测的患者共3578例，其中男1862例，女1716例。年龄1～93岁，平均37岁。收集患者的临床资料和实验室检测结果，以出院诊断作为疾病诊断依据。

1.2 方法抽取患者空腹静脉血5 ml（非抗凝管），3000 r/min离心5 min，吸出血清，2～8℃保存。ANA和dsDNA检测采用美国Trinity Biotech Plc公司产品，ENA抗体谱采用德国欧盟医学实验诊断有限公司产品，严格按照操作说明书进行检测。

1.2.1 ANA和dsDNA抗体检测采用酶联免疫法（ELISA）。纯化的ANA抗原或dsDNA抗原包被在相应的固相微孔内，微孔分别加入阴性对照、校准品、阳性对照，用血清稀释液1∶21稀释的患者血清100 μl。室温孵育30 min，洗板5次，每孔加入辣根过氧化酶结合的山羊抗人抗体结合物100 μl，洗板5次；每孔加入TMB染色底物液100 μl，室温避光15 min，每孔加入1N H2SO4终止液100 μl。5 min后用酶标仪（美国雷博公司WellscanMk3）检测标本450 nm波长的OD值。标本的OD值除以校准品OD值再乘以校正因子（校准品试剂瓶上有）的积，所得值即为免疫状态指数（ISR）值。ISR值≥1.10，则结果为阳性。

1.2.2 ENA抗体谱检测采用免疫印迹法（IBT），步骤如下：（1）对膜条进行预处理，然后加入患者血清进行温育30 min，再清洗3遍；（2）加入酶结合物温育30 min，再清洗3遍；（3）加入底物温育10 min，然后用蒸馏水清洗膜条，风干后得到检测膜条；（4）干透后的检测膜条用台式扫描仪（Canon LiDE110）扫描，并采用EUROLineScan软件评价结果；（5）以检测膜条字母端第一段区域为质控区，可见一条黑色质控带，其余膜条包被抗原的部位为白色则结果为阴性，其余膜条包被抗原的部位出现线性黑色则为阳性；（6）用EUROLineScan软件根据EuroimmunAg扫描仪对膜条的扫描结果评价出阳性程度，“+”越多表示阳性程度越强。

1.3 统计学方法使用SPSS13.0软件进行统计分析，不同组间计数资料的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检测结果以ANA、dsDNA、ENA抗体谱中≥1种抗体检测结果阳性即为阳性标本，阳性标本共855例，其中男性196例，女性659例，男女比例为1∶3.36，女性明显多于男性。男性标本1862例，阳性率为10.5%；女性标本1716例，阳性率为38.4%，女性标本阳性率显著高于男性（P＜0.01）。

2.2 阳性标本分析ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测结果阳性可见于多种临床疾病，如多发性硬化、低蛋白血症、淋巴结肿大原因待查、双手麻木查因、脑挫裂伤、间质性肺炎、2型糖尿病、雷偌综合症、免疫性血小板减少、慢性肾衰竭尿毒症期、血小板减少性紫癜、发热待查、肺间质纤维化、胆囊结石伴胆囊炎、消化道出血、溶血性贫血、腹膜后淋巴结切除术后、肺部感染、慢性乙型病毒性肝炎（重型）、双侧胸腔积液、自身免疫性溶血性贫血、风湿性心脏病、重度贫血、先天性肝纤维化、幼年特发关节炎等，最常见的有系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、混合性结缔组织病、干燥综合征，这4者均为自身免疫性疾病，其中系统性红斑狼疮的例数远多于其他疾病（表1）。

表1 阳性率排前4位的疾病分布

2.34 种最常见自身免疫性疾病患者ANA、dsDNA、ENA抗体谱检测结果分析从表2可见，在SLE、RA、MCTD、SS这4种患者中，ANA的阳性检出率最高，dsDNA次之，ENA抗体谱中的各抗体检出率各不相同。

3 讨论

ANA是以自身真核细胞成分作为靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体［1］。由于ANA的重要性和复杂性，目前ANA的检测方法繁多，最常用的是间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、免疫印记法，检测ANA的标准方法是间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence，IIF）［2］。本研究选择的是酶联免疫吸附法，因为IIF作为自身免疫病筛查手段的一个重要缺陷是其诊断特异性不强［3］，有研究表明大约有20%健康人群的血清用IIF筛查AID会得出假阳性结果，其中大部分与血清中的抗DFS70抗体有关［4-5］。实际上在多种非自身免疫病甚至健康人群血清中都存在抗DFS70抗体，而AID如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等血清中却较少出现该抗体［5-7］。此外，Mahler等［8］用IIF技术检测345例抗核糖体P蛋白抗体阳性血清时，仅得到不足30%的阳性率，提示IIF技术用于检测某些特定自身抗体的敏感性较差。而酶联免疫吸附法可用于大批量标本测定，在结果判断时对操作者经验程度要求不高，不受非DNA结合蛋白影响，可以通过滴度体现出抗体浓度高低。

临床上女性自身免疫性疾病患者明显多于男性患者，本研究结果也是如此。这是因为雌激素是体液免疫增强剂，而雄激素是天然的免疫抑制剂。因此女性的免疫反应强于男性，更容易患一些自身免疫性疾病。雌激素及其代谢产物水平、雌激素受体基因多态性、雌激素受体介导的信号通路等，也与自身免疫性疾病密切相关［9］。

从表2可见，在这4种最常见的自身免疫性疾病中，ANA均有较高的检测阳性率，且高于dsDNA和ENA抗体谱，但其特异性较差。原因在于ANA是以自身真核细胞成分作为靶抗原的一组自身抗体的总称，是一种广泛存在的自身抗体，不仅存在于细胞核内，还存在于细胞浆，细胞骨架以及细胞分裂周期，无器官特异性和种属特异性。因此，ANA检测实验只能考虑作为自身免疫性疾病的筛查实验。dsDNA在SLE检测中意义较大，具有较高的特异性，其参与了SLE的病理过程。dsDNA与DNA结合，形成免疫复合物沉积在肾小球基底膜，dsDNA也可直接作用于肾小球抗原造成SLE患者的肾损害。随着疾病活动的控制，dsDNA滴度可以下降或消失。因此，dsDNA是SLE疾病诊断和治疗监测的一个重要指标。dsDNA对诊断SLE的特异性高，但敏感性差，本研究中，dsDNA的阳性率是68%，存在漏检，故dsDNA阴性并不能排除SLE。另外，本研究中，ENA抗体谱中的抗核小体和SM检测阳性只出现在SLE疾病患者中，亦具有高度特异性，可作为SLE血清学诊断的标志性抗体。但其特异性高，阳性率低，本研究中，抗核小体阳性率为10%，抗SM抗体的阳性率为12%。

表24 种自身免疫性疾病患者ANA、dsDNA、ENA抗体谱检测结果［n（%）］

对SLE而言，ANA、dsDNA、ENA抗体谱在其诊断中有各自的特点，联合检测可减少因单项实验发生的漏检误诊情况，起到互补作用。RA疾病患者和SLE疾病患者有许多相似的临床症状，例如关节疼痛、肿胀、晨僵等。RA作为自身免疫性疾病，在本研究的检测中ANA的检测亦有较高的阳性率（51%），dsDNA检测的阳性率是25%，但ENA抗体谱检测除SSA检测有少量阳性（6%）外，其余皆为全阴。这对RA的鉴别诊断有重要作用。

在MCTD疾病患者的检测中，ANA的检测阳性率为47%，dsDNA检测的阳性率较低（8%）。另外，ENA抗体谱中的JO-1抗体只在MCTD患者的检测中表达出阳性，这对MCTD的鉴别诊断有重要作用。

本研究在SS疾病检测中，ANA以及ENA抗体谱中SSA检测的阳性率达到了100%，dsDNA检测的阳性率是30%，三者联合检测对其诊断和鉴别具有重要意义。

SLE、RA、MCTD、SS作为临床较常见自身免疫性疾病，在其检测中，ANA对抗原的检测较全面，覆盖面广，检测阳性率高，但特异性不强。dsDNA在 SLE的诊断中具有重要意义，特异性高，但敏感性差。而ENA抗体谱检测阳性率低，但特异性强。三者进行联合检测，可以通过互补提高自身抗体的检出率。因此，在临床应用时，同时进行ANA、dsDNA和ENA抗体谱联合检测，将有助于自身免疫性疾病的筛查、诊断和鉴别，同时减轻患者负担。

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R 446.61

A

1004-0188（2016）05-0559-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.05.036

2015-12-24）

510010广州，广州军区广州总医院检验科