蒲公英等五种中草药不同组合体外大肠杆菌抑菌效果比较

金三俊，杨月月，王玉姣，董佳琦，任红立，汪晶晶，刁新平*

（1.东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨 150030；

2.河南科技大学动物科学技术学院，河南 洛阳 475300；

3.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030）

蒲公英等五种中草药不同组合体外大肠杆菌抑菌效果比较

金三俊1，杨月月2，王玉姣3，董佳琦1，任红立1，汪晶晶1，刁新平1*

（1.东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨 150030；

2.河南科技大学动物科学技术学院，河南 洛阳 475300；

3.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030）

试验选取了蒲公英、白头翁、金银花、黄连、黄芩5种常见中草药的不同组合进行了体外抑菌实验并测定各组对大肠杆菌的抑菌效果。结果表明，黄芩和黄连、黄芩和蒲公英、黄芩和金银花、蒲公英和金银花、金银花和白头翁、白头翁和蒲公英等组合对大肠杆菌均有一定的抑制作用。黄芩和黄连、黄芩和蒲公英、黄芩和金银花、蒲公英和金银花及金银花和白头翁对大肠杆菌的抑菌直径分别为9、8、75、2、2 mm。试验结果表明，5种中草药的不同组合对大肠杆菌均有一定的抑制效果，黄芩和蒲公英组合对大肠杆菌有较强的抑菌效果。

中草药；提取物；抑菌作用；蒲公英；黄芩

中草药是我国传统医学的瑰宝，容易获得且价格低廉，药物活性成分多，具有广谱抗菌作用。随着科技的发展，中草药饲料添加剂使用不断的扩增[1]。中草药可以用来治病、强健体魄，作为食材可以调养身体，很多中草药疗效已被现代的科学研究所证实。每味中草药都有其各自的性味和功能，可通过炮制和煎煮等方法发挥药效，由于西药存在药物残留以及耐药性的问题，因此中草药的研究显得越发重要。虽然西药的使用方便且广泛，但西药可使细菌和病毒产生一定的耐药性及变异，此外西药治疗也会对机体产生一定的毒副作用，西医治疗与中医不同，中医以调节人体的内在生理动能为主，而西医则是对疾病采取对抗性的疗法，这种对抗性的疗法对人的危害极大。近几年，国内外也有不少研究报道中草药的疗效，但是关于中草药的不同组合体外的抑菌效果的研究比较少。多数清热解毒中草药都具有一定的的抗菌消炎、抗病毒和促进机体免疫功能的作用，如：蒲公英，性味苦、甘、寒，其归肝，胃经，具有清热解毒，消痛散结和利尿通淋的作用；金银花是比较常见的一味中草药，俗称“二花”，具有清热解毒和疏散风热的功效。蒲公英、白头翁、金银花、黄连、黄芩均属于清热解毒药。本试验选取了蒲公英、白头翁、金银花、黄连、黄芩5种中草药及其不同组合进行体外抑菌试验，通过试验来了解中草药的配伍禁忌及其对病原菌的抑制和杀灭作用，为中草药在临床上准确合理的使用，提高生产环节动物的生长性能，消除细菌耐药性的研究提供一定基础。

1 中草药体外抑菌的研究现状

1.1 单味中草药体外抑菌的研究现状

不少学者做过单味中药体外抑菌实验，试验结果表明，单味中草药对耐药菌具有一定的抑制作用。栾耀芳等研究表明，黄芩、黄连、黄柏、大青叶和贯众这些中药对金黄色葡萄球菌具有抑制作用，为临床治疗特殊耐药菌株提供了较为有利的科学依据[2]。李仲兴等研究结果表明，黄连对金黄色葡萄球菌的抗菌活性有较好的效果[3]。张振卿研究了耐药细菌性痢疾的中药治疗，在治疗过程中采用了单味苦参胶囊口服或者100%苦参液保留灌肠的方法，结果表明，治疗耐药细菌性痢疾58例，并且近期治愈率为100%[4]。目前，清热解毒类的中草药在感染性疾病中发挥着重要的作用，研究比较多的有黄连、蒲公英、金银花。单味中草药对某些常见病菌有一定抑制作用，但大多数还停留在药理试验研究阶段。王嵩研究表明，单味中草药的抗菌作用较抗生素弱，而复方中药或中药提取物则可以提高抗菌效果[5]。

1.2 复方中草药体外抑菌的研究现状

中药制剂“肺炎1号”对临床耐药菌株（MRSA菌株、产ESBLs肺炎克雷白杆菌）进行体外抑菌实验表明，中药制剂对目前棘手的耐药菌株有很好的抑制作用[6]。现代药理学试验研究表明，双黄连中的3味中药都具有广谱抗菌作用，并且能够降低毛细血管的通透性，减少渗出，具有抗炎、抗过敏作用。痰热清注射液药理研究表明，黄芩有较广谱的抗菌、抗炎、抗病毒、解热、抗变态的反应作用，熊胆有解痉、抑菌、抗炎作用，山羊角有较强的解热作用，金银花、连翘对多种病原微生物有抑制或杀灭作用[7]。

1.3 目的与意义

在很多药用植物中发现了能够产生具有药理活性的物质，但提取物活性物质的含量却很低，导致其药效无法达到理想的效果[8]。就目前的水平而言，还不能够应用于工业生产或制药行业，面对这一严峻现状，发挥中草药的治疗优势将成为今后研究的重点。清热解毒中草药在临床上应用广泛，中药复方制剂作用优于单味中药，为中药抗菌感染应用提供了广阔的发展空间。

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 试验菌种及中草药

大肠杆菌由河南科技大学动物科学院微生物试验室提供。蒲公英、白头翁、金银花、黄连、黄芩均购买于河南省洛阳市涧西区张仲景大药房。

2.1.2 试验仪器

试管、pH试纸、滤纸、简易水汽蒸馏装置（购自上海博讯医疗设备有限公司医疗设备厂）、烧杯、镊子、搪瓷锅、电炉、超净工作台（购自上海博讯医疗设备有限公司医疗设备厂）、电子天平（购自德国Sartorius公司）、培养皿、霉菌培养箱（购自上海博讯实业有限公司医疗设备厂）、胶头滴管、玻璃棒等。

2.1.3 体外药物敏感性实验

采用平板纸片扩散法（抗菌药物纸片琼脂扩散法敏感试验），每个平板上均匀地放置5个药敏片，保持相邻两孔的距离＞2 cm，分别做好标记。用无菌注射器吸取大肠杆菌培养液0.1 mL，滴于平皿底层培养基上，用无菌棉签蘸取细菌培养液，均匀涂布于平板上，将蘸有中药液的药敏片对应地贴于已经划分且标记好的培养基表面。每个相同平皿做A、B、C、D、E 5个对照，然后置于34℃恒温培养箱中恒温培养14～24 h。用直尺测定出抑菌圈的实际直径，并计算出每种中草药对大肠杆菌抑菌圈的平均值，对其进行分析和讨论。

2.2 试验方法

2.2.1 中草药的选取

中草药的选取对试验的结果以及药效有一定的影响，每一味中草药都有其本身的特性，如果没有选择合适的药量及使用方法，就不可能使药物发挥其最大的功效[9]。蒲公英是常见的多年生草本植物，种子上有白色冠毛结节的绒球[10]。将干燥无杂质的蒲公英作为药材，经加工形成皱缩卷曲的团块[11]。白头翁俗称“老公花”，作为药材多选用干燥的根部，干燥的根部呈圆柱形至圆锥形，味苦涩，归胃、大肠经。金银花气味香，味甘微苦。黄连以根茎入药，有泻火解毒，清热燥湿功效，能够抑菌抗病毒、抗原虫，气微，味极苦。黄芩药理上以黄芩的根入药，有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效，其性寒，味苦，入心、肺、大肠经。

2.2.2 中草药提取液的制备

每味中草药有其特定的生物活性，不同的中草药提取方法不同，保留最大的有效成分。试验采用煎煮法来提取中草药的有效成分。称取蒲公英、白头翁、金银花、黄连、黄芩5种中草药各30 g，分别置于不同的搪瓷锅中进行煎煮，使药浓度控制为1 g·mL-1，倒入烧杯中使其温度降低，分装好，然后进行高压灭菌，放于4℃冰箱保存备用。

3 试验结果

3.1 单味中草药提取液抑菌的测定

单味中草药提取液对大肠杆菌的抑制效果见表1。

将药敏片放入蒲公英、白头翁、金银花、黄连、黄芩5味中草药的提取液中浸泡10～15 min，中草药提取液中的药敏片不得少于5片。于无菌操作台中，将大肠杆菌接种于高压灭菌后的培养基中，然后将浸泡好的药敏片贴在培养基上，放置34℃恒温箱培养14～24 h。

由表1可知，抑菌效果较好的为黄连，黄连的抑菌圈直径为11.62 mm，其次为金银花，金银花的抑菌圈直径为10.26 mm，蒲公英抑菌圈直径为8.1 mm，白头翁抑菌圈直径为8.0 mm，黄芩抑菌圈直径为8.7 mm。根据体外抑菌性结果的判定标准可知，5味中草药提取液的抑菌效果均为低敏，即抑菌效果就没有达到中、高敏状态，而目前细菌的耐药性越来越严重，单味中草药的提取液对细菌的抑制效果已不能满足动物生产的需要，因此本试验需要在单味中草药的抑菌基础上进一步研究复方中草药的抑菌效果[13]。由以上试验数据可知，5种中草药的提取液对大肠杆菌都能产生不同程度的抑制作用，抑制的强弱排序为：黄连＞金银花＞黄芩＞蒲公英＞白头翁。

3.2 复方中草药提取液抑菌的测定

复方中草药提取液对大肠杆菌的抑制效果见表2。

表1 单味中草药提取液对大肠杆菌的抑制效果

表2 复方中草药提取液对大肠杆菌的抑制效果

先将蒲公英、白头翁、金银花、黄连、黄芩5味中草药以相等的量（每味中草药5 mL进行混合）进行不同的组合，即：组合1，蒲公英和白头翁（白蒲）；组合2，蒲公英和金银花（金蒲）；组合3，蒲公英和黄连（连蒲）；组合4，蒲公英和黄芩（芩蒲）；组合5，白头翁和金银花（白金）；组合6，白头翁和黄连（白连）；组合7，白头翁和黄芩（白芩）；组合8，金银花和黄连（金连）；组合9，金银花和黄芩（金芩）；组合10，黄连和黄芩（连芩）。将药敏片放入组合液中浸泡10～15 min，每种复合中草药提取液中的药敏片不得少于5片。于无菌操作台中，先将大肠杆菌接种于高压灭菌后的培养基中，然后将浸泡好的药敏片贴在培养基上，放置34℃恒温箱培养12～24 h。

由表2可得，混合后的中草药提取液的抑菌效果有了一定的增强，其中第2、3、6、8和9组的抑菌效果比较明显，但4和1组的抑菌效果增强的幅度不是很大。第1组合是蒲公英和白头翁，第4组合是蒲公英和黄芩，蒲公英、白头翁和黄芩这3味中草药都属于清热药，但之间也有所不同，蒲公英的清热解毒作用较强，对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和伤寒沙门菌等有杀菌作用；白头翁属于清热凉血药，既能清热解毒又能入血和凉血，对铜绿假单胞菌和枯草杆菌有抑制作用；黄芩有清热燥湿，倾泻上焦实火，用于治肺热咳嗽，对流感病毒和皮肤真菌等也有抑制作用[14]。

4 讨论

就目前我国的畜牧业以及医学界的发展来看，中草药的发展有一种势在必行的趋势。畜牧业的发展不仅关乎着人类的健康，也是一个国家经济的重要组成部分，然而畜牧行业对抗生素的使用过于频繁，药物在动物体内的残留越来越严重，屠宰没有经过休药期（又称消除期，是指动物从停止给药到许可屠宰或乳、蛋等产品许可上市的间隔时间）的动物，残留在动物体内的药物对人体的健康也有一定危害，中草药的副作用少，毒害小，虽然药程时间长，但是能够减少药物残留，无论是对动物还是对人体健康中草药都是一个不错的选择[15]。

中草药的医药效果已成为当前及今后医学发展的方向，中草药毒副作用小，价格实惠，对疾病的根除有一定的效果[16]。中草药在日常生活中对维持身体健康有很大帮助，但很多中草药提取物活性不高，抑菌效果也就无法达到想要的结果。本试验主要根据中草药自身特性，对细菌的抗菌活性进行研究，在单味药对大肠杆菌的抑制效果的基础上来研究复合中草药提取液组合对大肠杆菌的抑制作用，为进一步对复方中草药的研究提供一定的基础[17-18]。通过混合提取液进一步研制中草药，结果表明中草药提取液混合后的抑菌效果有一定的增强，这一结论，可为今后对复方中草药的研究提供一定的理论支持[19-20]。

5 结论

5种中草药的不同组合对大肠杆菌均有一定的抑制效果，其中黄芩和蒲公英组合对大肠杆菌有较强的抑菌效果。

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The Effect of Traditional ChineseE.coliMedicine in VitroBacteriostasis

JIN Sanjun1,YANG Yueyue2,WANG Yujiao3,DONG Jiaqi1,REN Hongli1, WANG Jingjing1,DIAO Xinping1*

（1.College of Animal Science and Technology,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China;

2.College of Animal Science and Technology,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471000,Henan China;

3.College of Veterinary Medicine,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China）

This trial selected different combinations of five common herbs,dandelion,Pulsatilla,honeysuckle, berberine and skullcap,conducted in vitro antibacterial test operation of each group and measured inhibitory effect on E.coli.The results showed that skullcap and berberine,skullcap and dandelion,skullcap and honeysuckle,dandelion and honeysuckle,honeysuckle and Pulsatilla,Pulsatilla and dandelion,and other combinations had a certain inhibito⁃ry effect on E.coil.Skullcap and berberine,skullcap and dandelion,skullcap and honeysuckle,dandelion and honey⁃suckle,honeysuckle and Pulsatilla,their antibacterial diameters were 9,8,75,2,2 mm.Different combinations of five traditional Chinese herbs had a certain inhibitory effect on E.coli,skullcap and dandelions combination had strong an⁃tibacterial effect onE.coil.The results showedthat Chinese herbal medicine was a viable antibacterial drugs.

Chinese herbal medicine;extracts;antibacterial activity;dandelion;skullcap

S859.3；S852.61

A

1001-0084（2016）10-0001-04

2016-09-05

黑龙江省科技厅对外合作攻关项目（WB13B101）

金三俊（1991-），女，河南兰考人，硕士研究生，研究方向为动物营养与饲料科学。

*通讯作者：副教授，硕士生导师，E-mail:diaoxp63@163.com。