中药复方消毒剂对鸡只常见菌的体外抑菌试验

范建华张 涛杨蕴蕾陈 勋李尚民窦新红

(1.中国农业科学院家禽所,江苏扬州 225125; 2.北京农学院,北京 102206; 3.上海复振物科技有限公司,上海 200437)

中药复方消毒剂对鸡只常见菌的体外抑菌试验

范建华1张 涛2杨蕴蕾3陈 勋3李尚民1窦新红*

(1.中国农业科学院家禽所,江苏扬州 225125; 2.北京农学院,北京 102206; 3.上海复振物科技有限公司,上海 200437)

为了解国内某厂家生产的植物源中药复方消毒剂的体外抑菌效果，试验采用了药敏打洞法和试管二倍稀释法，对临床常见的4种有害菌进行了体外抑菌试验。结果显示，该消毒剂对大肠杆菌高度敏感，对其他3种菌中度敏感；对禽巴氏杆菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度为62.5mg/ml，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为31.3mg/ml。结果表明，该厂家生产的中药消毒剂对鸡常见的4种有害菌有较好的体外抑菌效果。

中药复方消毒剂体外抑菌试验最小抑菌浓度

近年来，随着养禽业的快速发展，禽病也显得越来越复杂，特别是家禽细菌性疾病，传播广泛，危害较大，防治最难[1]。目前控制细菌性疾病的主要措施是应用抗生素或其他化学药物。然而，抗生素及化学药物的长期、大量使用，不仅导致了大量耐药菌株的频繁出现，而且在食物源动物的过量残留，也会引起食品安全问题。因此，当前积极研究和开发抗菌药物的替代品尤为迫切[2]。

用于疫病预防的兽用消毒剂也面临同样难题。现阶段临床应用较多的消毒剂，多属化学性消毒剂，种类繁多，常用的主要有复合酚类、碘类、季铵盐类和氯制剂四大类。尽管对疫病病原有较好的杀灭作用，但也存在许多问题，如长期使用某些化学消毒剂对鸡舍的笼具设施有一定的腐蚀性；某些强刺激性的化学消毒剂带鸡消毒时，对鸡的眼结膜和呼吸道有一定的损伤；另外，消毒剂在使用不当时，对饲养工人也有一定毒副作用[3]。

鉴于化学消毒剂可能存在一些不足。本试验是基于前期研究基础，从芦荟、苦楝、麻籽、皂荚、苦参根、地榆根、大青叶、柑橘果皮、金钱松根皮等多种植物中提取有效成分，根据中医药配伍理论，采用现代的复配技术，精炼而成的纯天然植物源消毒剂，将尝试对临床常见的4种细菌进行体外抑菌试验，旨在为今后进一步开发新型、绿色兽用消毒剂提供参考和依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品

受试药：500m1中药复方消毒剂水溶液，含1g/m1生药，由上海复振科技有限公司提供。

1.1.2 试验菌株

禽巴氏杆菌C48-1株、鸡白痢标准株YD 2株、大肠杆菌C15003株、金黄色葡萄球菌YD-1株，由本实验室保存、提供。

1.1.3 主要试剂、耗材

马丁肉汤培养基、血平板培养基、脑心浸液肉汤和生化反应管等均购自上海生工生物制剂有限公司；生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、净化工作台等由本实验室自行提供。

1.2 方法

1.2.1 菌液制作

将试验用菌株接种于脑心浸液肉汤上，摇床培养18 h，再转至血平板培养基培养。挑取典型菌落接种于马丁肉汤培养基再培养18 h后取出，将菌液用马丁肉汤培养基按10倍法稀释至107～109CFU/m1，备用。

1.2.2 药敏试验

试验采用平皿药敏打洞法[4]，即用灭菌移液枪取供试菌30µ1于平板培养基上，并用玻璃刮涂布均匀，然后用直径为6mm的打孔器均匀打孔，每板5孔，去除孔内琼脂并用少量营养琼脂封闭孔底。将供试药液加于孔中，以满而不溢为宜，并做好标记。试验做3次重复。置4℃冰箱中作用1 h后取出.于37℃恒温箱中培养18h，观察结果。结果判定：抑菌圈直径小于10mm为耐药，10～15mm为中度敏感，大于15mm为高度敏感。

1.2.3 最小抑菌浓度测定

试验分组及抑菌试验方案设计见表1方法。试验组，先在每个空白试管中加入1.0m1的马丁肉汤培养基，然后在第一管中加入1.0m1的试验药物，逐次采用试管二倍法[5]稀释，即按1：2、1：4、1：8……1：1024稀释。至第10管弃去1.0m1，然后在每管中加入25u1试验菌液。置于37℃摇床培养18h。18h后取出各组别，根据药物与试验菌反应显示的试管浑浊度，确定各种菌的最小抑菌浓度；阴性对照组只加培养基和药物；阳性对照组只加培养基和菌液，空白对照组只加菌液。

表1　试验设计及分组

2 结果

2.1 试验菌液最终反应浓度

禽巴氏杆菌、鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌4种菌经扩菌后，浓度分别为4.0×107CFU/m1、5.0×109CFU/m1、7.0×108CFU/m1和8.0×108CFU/m1。

2.2 药敏试验测定结果

结果显示，该消毒剂对大肠杆菌的敏感性最高，抑菌圈直径平均为18mm，对鸡白痢沙门氏菌、禽巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌等中度敏感，抑菌圈直径平均分别为11mm、12mm和12mm。详见表2。

表2　消毒剂药敏试验测定结果

2.2 消毒剂最小抑菌浓度（MIC）

消毒剂最小抑菌浓度结果见表2。由表2知，该消毒剂对禽巴氏杆菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度为62.5mg/m1，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为31.3mg/m1。

表3　消毒剂最小抑菌浓度结果

说明：“-”代表药物与菌液作用后试管澄清，无菌；反之“+”代表浑浊，仍有菌生长

3 讨论

随着经济贸易的全球化的发展，动物疾病流行也呈现全球化特点，一些新的疾病的流行给畜禽养殖业造成了巨大损失。由于新型传染病疫苗的研究需要较长周期，因此预防控制新型传染病只能通过加强饲养管理和注重消毒等预防措施来实现。这种形势下，研究一种或多种新型、高效、广谱、安全的消毒药显得十分必要[6]。然而，目前市场上常用的消毒剂，大多为化学性消毒剂，在使用过程中，对人类、畜禽和环境均存在不同程度的毒副作用。因此，在保证有效杀灭病原微生物，切断病原传播的前提下，减少化学性消毒剂的使用频率，寻找安全、高效的消毒剂替代品，成为当前研究的热点。

植物源中草药是我国的国粹，许多中草药具有良好的抑菌和抗病毒功效[7]。中草药抗菌、抗病毒的物质基础是活性成分，目前已知的多为生物碱、甙类、鞣酸类、酮类、醛类、酚类及挥发油等，如小檗碱、白头翁素、穿心莲内酯、苯甲酸、山梨酸、桉油精等。中草药的许多活性成分均能直接抑制或杀灭病原微生物，诱生干扰素，改变细菌、真菌细胞膜的通透性，干扰病毒复制所需的有些酶。因此，利用我国丰富的中草药资源，积极研究和开发绿色新型中草药消毒剂，将具有广阔的市场前景。

中草药消毒剂的研究和应用历史研究，早在唐代孙思邈的《备急千金要方》中就有记载，有太乙流金散（雄黄、雌黄、矾石、鬼箭羽等）烧烟熏之可以辟瘟气的说法。后来，随着中医药理论的推进研究和实践，后人已逐渐熟知掌握了单味和多味中草药药性药效，并且在此基础上，形成了瘟病的审症求因理论，将病原定性为湿热和温热两大类，消毒、杀菌应以芳香化浊避秽、清热解毒为原则[8]。因此，艾叶、苍术、大青叶、芦荟、香薷草、苦参等中药材被广泛应用于临床多种致病病原的熏蒸消毒，如胡晓蕙[9]等对一种主要由野菊花、厚朴、苍术、金银花、牛蒡子、辛夷等制成的水提剂预防上呼吸道感染进行观察。结果表明“中空剂”有体外直接抗CBV3、CBV5的作用，从而灭活或减少空气 中的病原微生物，可降低上呼吸道感染发病率；王淑云[10]等研究的由藿香、艾叶、苍术、石决明、佩兰等12味药物组成的复方消毒剂，应用结果表明：该消毒剂对医院手术室、病房、治疗室等场地具有较好的消毒效果，杀菌率达86.1%，对培养菌株金黄色葡萄球菌与大肠杆菌的空间和表面消毒，均具有较强的杀菌作用。

本试验使用的中草药消毒剂，其主要成分为芦荟、苦楝、麻籽、皂荚、苦参根、大青叶、柑橘果皮、金钱松根皮等多种植物中提取有效成分，其中苦楝、麻籽、苦参根、大青叶等含有丰富的生物碱和植物多酚等活性成分，能够抑制细菌和真菌等生物酶合成过程，迅速穿透和崩解细菌细胞壁，还能干扰某些肠道和呼吸道寄生病毒的RNA合成；芦荟和皂荚分别含有芦荟苷和皂苷，是优良的表面活性去污因子，具有良好的渗透能力和去污能力。其水溶液在振摇时能产生大量持久的蜂窝状泡沫，可以乳化油脂，有效去除污垢，在实际消毒过程中，能够有效地防止有机质对其他中草药消毒效果的破坏；柑橘果皮和金钱松根皮含有去味因子，有较好的芳香去味效果。因此，本试验使用的消毒剂方剂，符合中医的君臣佐使理论，复配设计合理。

通过本次体外抑菌试验证明，该消毒剂对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、禽巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌等主要家禽致病菌有很好的抑制作用，药敏试验结果显示4种菌的抑菌圈直径分别为18mm、11mm、12mm和12mm；对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为31.3mg/m1，对禽巴氏杆菌和鸡白痢沙门氏菌的最小抑菌浓度为62.5mg/m1。MIC测定结果与国内邱园园[11]、王金和[12]等报道相似，但与李淑红[13]、邱真真[14]等试验结果略有差异，可能与菌株不同菌型、抗药性，以及中草药药材来源不同所致的药效差异有关。

[1] 朱国强.家禽细菌性疾病的思考[J].中国禽业导刊，2010，24 （15）：23-24.

[2] 程古月，郝海江，谢书宇，等.抗生素替代品的研究进展[J].中国农学通报，2014，30（35）：97-106.

[3] 周德纲.兽用消毒剂研究进展[J].兽医导刊，2014，24（5）：42-44.

[4] 田艳玲.药敏试验方法在兽医临床中的应用[J].畜牧兽医科技信息，2014，12（11）：31-32.

[5] 黄通旺，李永忠.试管稀释法筛选β-内酰胺酶的中草药研究[J]广东医学，1998，12（1）：17-18.

[6] 洪学.畜禽消毒剂应用[J].四川畜牧兽医，2007，12（7）：6-8.

[7] 梁剑平，张应禄，李滋睿，等.兽用中草药研究开发展望[J].中兽医医药杂志，2005，24（4）：15-17.

[8] 胡晓蕙，蒋连泓，高岚，等.中药空气消毒剂预防上呼吸道感染的观察[J].浙江中医杂志，2002，12（6）：269-270.

[9] 王淑云，何飞舟，罗坤华，等.中药速效空气消毒片对医院空气消毒效果的临床观察[J].中华护理杂志，1997，32（1）：37-38.

[10] 高慧，张思超.中药消毒剂研究现状[J].山东中医药大学学报，2004，28（6）：476-478.

[11] 邱园园，韩金潭，孙翠翠，等.“香连”溶液干膏剂体外抑菌试验研究[J].中国畜牧兽医，2015，42（3）：708-713.

[12] 王金和，边传周，金登宇，等.中草药消毒剂杀菌效果的研究[J].中国畜牧兽医，2010，42（11）：39-41

[13] 李淑红，王京仁，成钢，等.8种中草药对猪大肠杆菌的体外抑菌试验[J].广东农业科学，2012，24（22）：131-135.

[14] 邱真真，王莎莎，鲁晓晴，等.新型复方中草药消毒剂的消毒效果及其杀菌机理研究[J].中华医院感染学杂志，2013，24 （17）：17-20.

窦新红，研究员

北京农学院兽医学（中兽医）北京市重点实验室开放课题（Kf2016032）