ABO血型的双向全程释放电泳图谱*

乔 姝， 高丽君， 宝勿仁必力格， 高雅琼， 韩丽红， 秦佩媛， 苏 燕， 秦文斌

(1.包头医学院第一附属医院输血科,内蒙古包头 014010；2.包头医学院血红蛋白研究室； 3.连云港市立医院检验科)



ABO血型的双向全程释放电泳图谱*

乔 姝1， 高丽君2， 宝勿仁必力格2， 高雅琼2， 韩丽红2， 秦佩媛3， 苏 燕2， 秦文斌2

(1.包头医学院第一附属医院输血科,内蒙古包头 014010；2.包头医学院血红蛋白研究室； 3.连云港市立医院检验科)

目的:创建双向全程电泳图谱，比较研究A型、B型、AB型、O型4种血型的差异。方法：取10支试管，第1管只加全血20 μL，不加蒸馏水，第2管加全血18 μL，蒸馏水2 μL，第3管加全血16 μL，蒸馏水4 μL，以此类推，第10管加全血2 μL，蒸馏水18 μL。用这10种标本做双向十层电泳，第一向时加入前进和后退两种再释放，第二向为普泳。丽春红-联苯胺复染后观察结果。结果：从10个前进区带和10个后退区带可以看出A型、B型、AB型、O型4种血型的电泳图谱互不相同。结论:各种血型的血红蛋白释放结果不同，说明红细胞表面的A抗原和B抗原对红细胞释放血红蛋白有影响。

ABO血型；血红蛋白释放；双向全程电泳图谱

1900年Landsteiner发现血型[1]，第二年他指出将不同人的血清与红细胞混合可以区分A、B、O三组[2]，von Decastello和Sturli[3]增加第四组(AB)。A组个体血清能够凝集B组人的红细胞，但不凝集同组中其他人的红细胞；B组人的血清凝集A组人的红细胞，但不凝集同组中其他人的红细胞；O组的红细胞不能被任何人的血清所凝集，但其血清却具有双重凝集能力，既能凝集A组又能凝集B组的细胞。AB组血清中没有凝集素，但细胞可以被其它所有血型的血清凝集。结构分析表明A和B抗原是糖蛋白和糖脂的糖类决定簇，A型末端糖基是N-乙酰氨基半乳糖，B型末端糖基是半乳糖[4]。

如上所述，ABO血型的研究由来已久，但无人从红细胞释放血红蛋白角度进行研究。本文从双向全程释放电泳方面来研讨ABO各型之间的差异，结果见正文。

1 材料及方法

1.1 材料 ABO血型标本来自包头医学院第一附属医院检验科血库。

1.2 方法 参考文献[5]，具体如下。

1.2.1 标本处理 取10支试管，第1管只加全血，不加蒸馏水，第2～9管里加蒸馏水由少到多、加全血由多到少，构成一个连续的、完整的等低渗条件，具体操作参见表1。

表1 全血的等渗、低渗全程处理

注：第1管为等渗，原来的全血，没有蒸馏水。第2～10管为低渗。水量逐渐增加，全血相应减少，第10管中全血占10 %，蒸馏水占90 %。

1.2.2 双向电泳 用以上一系列标本直接做电泳。第一向电泳为先普泳，再来前进再释放和后退再释放。普泳即电势梯度6 V/cm，泳2 h 15 min，停电15 min。前进再释放即电势梯度6 V/cm，再通电30 min。后退再释放即电势梯度6 V/cm，倒极再通电15 min。第二向电泳为普泳即电势梯度6 V/cm，倒极转向再泳1 h 15 min。

1.2.3 染色 先染丽春红,将凝胶板直接放入丽春红染液中过夜，取出、照相，再晾干或烤干。再染联苯胺,将凝胶板直接放入联苯胺染液中，加3 %过氧化氢直到血红蛋白变成蓝黑颜色，转入漂洗液(5 %醋酸、1 %甘油)换洗2次，每次5 min，取出晾干。

1.2.4 结果保存 晾干凝胶与玻板结合，可长期保存。

2 结果

2.1 A型血电泳图 由图1可以看出，前进带只见于7～10泳道(←所指处)，后退带也如此，此时，前进带较强，后退带较弱。

2.3 AB型血电泳图 由图3可以看出，前进带1～10泳道都有，但前后泳道较强，中间较弱，后退带也如此，只是，此时前进带与后退带强度相近。

2.4 O型血电泳图 由图4可以看出，这个进退带都比较强，前进带几乎均匀增强，后退带先弱后强，下边后几个退带的强度反而超过了对应前进带。

ABO血型取决于红细胞表面的A抗原和B抗原。A型血的特点是红细胞有A抗原，没有B抗原，血清含抗B抗体,没有抗A抗体；B型血的特点是红细胞有B抗原，没有A抗原，血清含抗A抗体,没有抗B抗体；AB型血是红细胞同时有A、B两种抗原，血清不含抗B和抗A抗体；O型血红细胞没有A、B两种抗原，血清含有抗B和抗A抗体。红细胞表面的抗原与红细胞内部成分有什么联系，例如与红细胞内的血红蛋白有何联系，它们对红细胞内血红蛋白的电泳释放有何影响，不同血型效果是否有差异。

全程释放电泳图谱中的进退带来源于红细胞内血红蛋白的电泳释放，而且是一系列等渗、低渗条件下的电泳释放，可以全面反映红细胞膜对血红蛋白释放的影响。现在看来，红细胞表面的A抗原和B抗原对红细胞释放血红蛋白有影响，而且不同血型影响各异，说明不同抗原对红细胞释放血红蛋白的影响是不一样的，涉及到前进、后退带。

A抗原和B抗原是一种糖脂，其中寡糖不同决定抗原的特异性，它们都与红细胞膜骨架的带4.1蛋白相连。现在看来可能是红细胞表面的这些糖脂影响到血红蛋白的释放，带4.1蛋白可能起到引领作用。这种推测是否正确，有待进一步深入研究。

[1] Landsteiner K.Zur Kenntnis der antifermentativen lytishen und agglutinietenden Wirkungen des Blutserums und der Lymphe[J].Zbl Bakt,1900,27：357-366.

[2] Landsteiner K.Uber Agglutinationserscheinnungen normalen menschlichen Blutes [J].Klin Wschr,1901,14：1132-1134.

[3] von Decastello A, Sturli A.Ueber die isoagglutinine im Serum gesunder und kranker menchen[J].Mfinch Med Wschr,1902,49:1090-1095.

[4] Watkins WM.Biochemistry and genetics of the ABO,H,Lewis and P blood group systems[J].Advances in Human Gentics,1980,10：1-136.

[5] 秦文斌.活体红细胞内血红蛋白的电泳释放[J].中国科学生命科学，2011，41(8)：597-607.

Two-way full release electrophoresis map of ABO blood type

QIAO Shu, GAO Lijun, BAO Wurenbilige,GAO Yaqiong，HAN Lihong,QIN Peiyuan,SU Yan,QIN Wenbin

(1.DepartmentofBloodTransfusion,TheFirstAffiliatedHospitaltoBaotouMedicalCollege，Baotou014010，China; 2.ResearchLaboratoryofHemoglobininBaotouMedicalCollege; 3.DepartmentofLaboratoryMedicine,LianYungangMunicipalHospital)

Objective:To compare and study the difference in blood type A, B, AB, O, after creating a two-way full electrophoresis map.Method：10 test tubes were used. Only 20 ul whole blood was added to the first tube, without distilled water；18 ul whole blood and 2 ul distilled water were added to the second tube；16 ul whole blood and 4 ul distilled water were to the third tube；by analogy, 2 ul whole blood and 18 ul distilled water were added to the tenth tube. The 10 kinds of specimen were adopted for two-way ten-layer electrophoresis. Forward and backward re-release was added to the first phase, and the second phase was ordinary electrophoresis. Observation was conducted after ponceau-benzidine redyeing.Results:From 10 forward zone and 10 back zone the electrophoresis map for blood type A, B, AB, O was not the same between each other.Conclusion:The results of hemoglobin release for all kinds of blood type are different, reflecting that A and B antigens on the surface of the red blood cells have an effect on hemoglobin release from red blood cell.

ABO blood type; Hemoglobin release; Two-way full electrophoresis map

内蒙古自治区教育厅重点科研项目(NJ09157)

秦文斌

2015-10-16)