Folin-Ciocaheu比色法测定白花蛇舌草总酚的含量

林珊，陈达鑫，蔡巧燕，彭军，林久茂

（1.福建中医药大学中西医结合研究院，福建福州350122；2.福建省中西医结合老年性疾病重点实验室，福建福州350122）

Folin-Ciocaheu比色法测定白花蛇舌草总酚的含量

林珊1，2，陈达鑫1，2，蔡巧燕1，2，彭军1，2，林久茂1，2

（1.福建中医药大学中西医结合研究院，福建福州350122；2.福建省中西医结合老年性疾病重点实验室，福建福州350122）

目的测定白花蛇舌草中总酚的含量。方法用Folin-Ciocaheu比色法，以没食子酸为对照品，测定白花蛇舌草中总酚的含量。结果没食子酸在0.82～5.74μg／m L线性关系良好，白花蛇舌草总酚含量为111.27 mg／g。结论Folin-Ciocaheu比色法简单、快速、稳定、可行，可为白花蛇舌草的质量控制提供了实验依据。

白花蛇舌草；总酚；含量测定；Folin-Ciocaheu比色法

白花蛇舌草Hedyotis Diffusa Willd为茜草科草本植物，具有清热解毒、利尿消肿、活血止痛、抗菌消炎、抗肿瘤的功效，临床治疗恶性肿瘤、胃肠炎、阑尾炎、泌尿系感染等［1］。抗肿瘤活性为白花蛇舌草最重要的药理活性，中医一直用于腹部肿瘤治疗和癌症放疗、化疗后的辅助治疗，效果明显。我们课题组在药理研究中发现，白花蛇舌草的抗肿瘤作用确切［2-4］。白花蛇舌草主要化学成分有萜类、黄酮类、蒽醌类、香豆素类和酚酸类等化合物，总酚是一类广泛存在于植物体内的多羟基酚类化合物的总称，具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等作用［5］。为了开发利用白花蛇舌草中酚类化合物，我们用Folin-Ciocaheu比色法测定白花蛇舌草中总酚的含量，为白花蛇舌草的质量控制提供实验依据。

1　材料

1.1药材白花蛇舌草购自福建中医药大学国医堂，产自河南，经福建中医药大学药学院范世明高级实验师鉴定为茜草科植物白花蛇舌草。

1.2试剂没食子酸对照品（成都曼斯特生物科技有限公司，纯度≥98%）；福林酚试剂（北京索莱宝科技有限公司）；其它试剂为分析纯。

1.3仪器UV-1800紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；SHB-Ш循环水式多用真空泵、RZ01C旋转蒸发器、HH-S恒温水浴锅（郑州市长城科技工贸有限公司）；SFG-02B电热恒温鼓风干燥箱（黄石市恒丰医疗器械有限公司）；KQ-500E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AR2130电子天平（奥豪斯仪器有限公司）；CP225D电子天平（德国赛多利斯公司）；Elix5纯水制备系统（厦门市精艺兴业科技有限公司）。

2　方法与结果

2.1对照品溶液的制备称取经105℃干燥至恒重的没食子酸对照品4.1 mg，置25 mL瓶中，60%乙醇溶解并定容至刻度，配制成0.164 mg／mL对照品溶液，备用。

2.2供试品溶液的制备称取60℃恒温干燥的白花蛇舌草细粉1.5 g，加10倍量的85%乙醇，回流提取2次，每次1 h，过滤，合并过滤液，定容至25 mL瓶中，备用。

2.3含量测定

2.3.1测定波长选择吸取没食子酸对照品溶液、供试品提取液各0.2 mL，置于10 mL瓶中，加60%乙醇各0.4 mL，蒸馏水3 mL，10%福林酚试剂2.5 mL，7.5%碳酸钠溶液2 mL，加蒸馏水至刻度定容，在暗处反应30 min。以60%乙醇做空白对照，在紫外-可见分光光度计400～800 nm波长处扫描，以确定最大吸收波长，结果没食子酸和白花蛇舌草总酚在742 nm波长处有最大吸收值。

2.3.2标准曲线绘制分别吸取没食子酸对照品溶液0、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35 mL，置于10 mL瓶中，按2.3.1项的方法进行显色，以60 %乙醇溶液为空白，在742 nm波长处测定吸光度，得标准曲线方程：

A＝113.36C+0.0114 r＝0.9993

结果表明没食子酸在0.82～5.74μg／mL线性关系良好。

2.3.3总酚含量测定按2.2项制备供试品溶液，取样品液0.2 mL，置10 mL瓶中，按2.3.2项的方法测其吸光度，计算总酚含量，并按下式计算总酚得率：

总酚得率＝总酚的含量／药材的质量×100%

结果见表1。RSD为0.68%，说明该方法稳定可行。

表1　总酚含量测定

2.3.4精密度试验取对照品溶液0.2 mL（浓度0.164 mg／mL），按2.3.2项方法测定吸光度，结果见表2。RSD为0.72%，表明方法精密度良好。

2.3.5稳定性试验取供试品溶液0.2 mL，在0、20、40、60、80、100、120 min，按2.3.2项方法测定吸光度，结果见表3。RSD为1.53%，表明供试品溶液中总酚含量稳定。

表2　精密度实验

表3　稳定性实验

2.3.6重复性试验按2.2项方法制备6份供试品溶液，按2.3.2项方法测定吸光度，结果见表4。 RSD为0.70%，表明方法重复性良好。

表4　重复性的实验结果

2.3.7回收率试验精密称取白花蛇舌草6份，每份0.5 g，分别加入没食子酸对照品溶液0.2 mL（浓度0.164 mg／mL），按2.2项制备供试品溶液，按2.3.2项测定，结果见表5。计算回收率：

回收率＝（测得量－药材含有量）／加入量×100%。

加样回收率平均值为95.76%，RSD为1.54%。

表5　回收率实验

3　讨论

3.1植物多酚的测定方法有多种，我们曾考察普鲁士蓝法、重氮比色法，均因方法显色不稳定，或方法步骤复杂而未采用。Folin-Ciocaheu比色法操作较简单［6］，结果稳定可靠，有利于快速测定大批量样品，实验证明Folin-Ciocaheu法符合要求。

3.2由于白花蛇舌草中酚类物质水溶性较差，因此在选择提取溶剂时，我们考察了50%、60%、80%乙醇作为提取溶剂，最终采用60%乙醇为溶剂，所得的溶液显色后测定结果较稳定。

总之，Folin-Ciocaheu法重现性好，稳定、可行，可为白花蛇舌草的质量控制提供实验依据。

［1］纪宝玉，范崇庆，裴莉昕，等.白花蛇舌草的化学成分及药理作用研究进展［J］.中国实验方剂学杂志，2014，20（19）：235-240.

［2］林久茂，彭军，魏丽慧，等.白花蛇舌草提取物诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的机制研究［J］.福建中医药，2010，41（5）：49-51.

［3］林久茂，魏丽慧，李琼瑜，等.白花蛇舌草通过调控Wnt／βcatenin通路抑制大肠癌细胞及大肠癌干细胞的生长［J］.中华中医药杂志，2015，30（5）：1805-1808.

［4］CAIQ，LIN J，WEI L，et al.Hedyotis diffusa Willd inhibits colorectal cancer growth in vivo via inhibition of STAT3 signaling pathway［J］.International Journal of Molecular Sciences，2012，13（5）：6117-6128.

［5］杨璐，努尔比耶，李宏.新疆红枣果实不同部位总酚的含量测定［J］.食品研究与开发，2016，37（1）：152-156.

［6］张科卫，马彩霞，缪六舒.Folin-Ciocaileu比色法测定不同产地生姜中总酚［J］.中成药，2012，34（12）：2450-2452.

R284.1

B

1000-338X（2016）05-0031-02

2016-07-16

教育部博士点基金资助课题（20133519110003），陈可冀中西医结合发展基金资助课题（CKJ2015007、CKJ2014013）

林珊（1981—），女，医学硕士，主要从事中西医结合基础研究。

林久茂（1976—），男，副研究员。E-mail:jiumaolin@hotmail.com