多发伤患者血浆二胺氧化酶与急性胃肠损伤分级的相关性研究

李 军，欧阳军，夏晶晶

多发伤患者血浆二胺氧化酶与急性胃肠损伤分级的相关性研究

李 军1，欧阳军1，夏晶晶2

目的 探讨多发伤患者血浆二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）水平与急性胃肠损伤（acute gastrointestinal injury，AGI）分级的相关性。方法 48例多发伤患者依据损伤严重度分组，创伤严重度评分（injury severity score，ISS）≤16分为轻伤组（26例），ISS＞16分为重伤组（22例），另设正常对照组（10例）。正常对照组抽取外周静脉血1次，轻伤组和重伤组分别于伤后24、72、120 h抽取外周静脉血3次，采用酶联免疫吸附测试法检测血浆DAO，同时在相应时间点进行AGI分级，将血浆DAO与AGI分级进行相关性分析。结果 各组血浆DAO检测结果的时间与处理因素（外伤）之间存在交互作用（P＜0.01），轻伤组和重伤组血浆DAO水平均于伤后24 h较对照组有一定程度的升高（P＜0.01），且重伤组升高多于轻伤组（P＜0.01）；随伤后时间的延长血浆DAO水平逐渐下降，120 h轻伤组与对照组比较，差异无统计学意义，而重伤组仍高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。多发伤后24、72、120 h血浆DAO水平与AGI分级均有相关性。结论 血浆DAO在评估多发伤患者创伤严重程度及AGI分级中均有一定的临床意义。

多发伤；急性胃肠损伤分级；血浆二胺氧化酶

多发伤是平战时均较为常见的严重创伤，随着交通的日益发展，交通伤已成为严重创伤的主要致伤机制，约占54.2%[1]。创伤后出现胃肠功能障碍，提示患者病情严重、预后不良、病死率升高[2]。重症患者的急性胃肠功能障碍和衰竭受到越来越多的重视，2012年欧洲重症医学协会建议使用AGI这个概念，提出其主要的不足是缺少评估胃肠道功能/功能障碍的客观检测指标[3]。DAO在组胺和多种多胺代谢中起作用，存在于哺乳动物肠绒毛细胞内。肠黏膜受损时，黏膜细胞内DAO活性下降，而血液中DAO水平升高，是临床研究中用于反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度常用检测指标[4]。因此，本研究拟分析多发伤患者病情严重程度、急性胃肠损伤程度与血浆DAO水平的变化关系，探讨血浆DAO水平与多发伤患者胃肠功能的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014-11至2015-06石河子大学第一附属医院急诊外科收治的48例多发伤患者，排除胃肠道外伤，无慢性胃肠道疾病及泌尿系疾病病史，无妊娠状态，伤后入院时间均小于24 h，其中男29例，女19例，年龄19～64岁，平均（41.19±13.54）岁。其中车祸伤26例，坠落伤11例，刀刺伤5例，塌压伤6例。依据患者计算机断层扫描（Computed Tomography，CT）、X线片及手术资料，严格按照损伤严重度评分法进行分组，轻伤组（ISS评分≤16）26例，重伤组（ISS评分＞16）22例。其中脑外伤29例，胸部外伤18例，腹部外伤34例，四肢骨盆骨折23例。对照组10例为接受体检的健康人，其中男5例，女5例，年龄23～65岁，平均（45.60 ±14.72）岁。

1.2 病情评估 病情严重程度应用ISS评分：根据解剖划分为6个区域，计算3个最严重的损伤区域简明创伤分级（abbreviated injury scale，AIS）分值的平方和[5]。AGI诊断参照欧洲危重病学会制定的《欧洲危重病医学会关于AGI的定义和处理指南（2012）》标准，采用（Ab Viser）测量膀胱内压检测系统协助诊断AGI及对AGI进行分级，AGI分为4级：有发生胃肠道功能障碍或衰竭风险（I级）；胃肠功能不全，需要干预措施来重建胃肠道功能（Ⅱ级）；胃肠道功能经干预处理后不能恢复（Ⅲ级）；胃肠功能衰竭并影响其他器官威胁生命（Ⅳ级）。本试验为方便研究将胃肠功能正常者定为0级。

1.3 主要试剂和仪器 TGR-16G低温高速离心机（Thermo公司）；702超低温冰箱（美国Thermo Eleltron Corp）；酶标仪MODEL680（美国Biorad Corp）；SW-CJ-1F型超净台（浙江苏净净化设备有限公司）；人DAO试剂盒（上海骨朵生物科技有限公司）。

1.4 采血和贮存 对照组采外周静脉血1次，多发伤患者分别于伤后第24、72、120 h采外周静脉血3次。采取的静脉血以1500 g的离心力离心15 min后提取血浆贮存于-80 ℃冰箱待测。

1.5 血浆DAO水平的测定 采用酶联免疫吸附测试法，具体方法严格按照使用说明书操作，步骤如下：（1）取出试剂盒和样品，并解冻30 min。（2）用微量加样器在含DAO酶标板中依次加入标准品，试验组各加入样品血浆10 μl，并设一个空白对照组。（3）用封板膜封板后置37℃温育30 min。（4）向每孔加入酶标试剂50 μl。重复操作“3”。（5）用洗涤液（20倍浓缩洗涤液与双蒸水1∶20稀释使用）反复冲洗5次。每次静置30 s。（6）向每孔内加入显色剂A液、B液各50 μl。（7）37 ℃避光显色15 min。（8）每孔中加入终止液50 μl。（9）于酶标仪上读取各孔在波长450 nm处的吸光度（optical delnsity，OD）值。（10）使用软件ELISA Calc换算出其浓度值并绘制标准曲线。

1.6 统计学处理 采用SPSS 19.0软件分析处理试验数据。计量资料以描述。随时间的变化，指标的比较采用重复测量设计方差分析，对资料进行正态及球对称检验，不满足球对称条件时，使用Greenhouse-Geisser（G-G）法的球对称系数进行校正；组内与组间两两比较均采用LSD-t检验，相关性分析采用 Spearman相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

重伤组1例于伤后第13天因多器官功能衰竭死亡，余21例好转或治愈出院；轻伤组全部治愈。

2.1 血浆DAO水平 各组血浆DAO检测结果见表1，对照组DAO的平均水平从24 h到120 h无变化，而轻伤组与重伤组均降低，其中轻伤组由（4.30±1.45）μmol/ml到（1.46±0.55） μmol/ml，重伤组由（6.84±1.78）μmol/ml到（3.82±2.06） μmol/ml，对照组DAO平均水平由（1.11±0.33） μmol/ml到（1.11±0.33） μmol/ml。不同时间与损伤严重程度DAO平均水平比较的重复测量方差分析结果显示：不同时间的方差协方差矩阵的球形检验不满足球形分布（χ2=12.119，P=0.002），使用（G-G）法的球对称系数对自由度进行校正后，时间与处理因素（外伤）之间存在交互作用（F=7.011，P＜0.001）。经LSD-t检验，时间的单独效应分析显示：重伤组和轻伤组组内各个时间点间数据的差异有统计学意义（P＜0.001）；经LSD-t检验，损伤严重程度的单独效应分析结果显示：第24 小时和第72 小时三组间两两比较差异均有统计学意义（P＜0.001），第120 小时重伤组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.001），重伤组与轻伤组比较差异有统计学意义（P＜0.001），轻伤组与对照组比较差异无统计学意义（P=0.115），见表1。

表1 各组多发伤患者血浆DAO水平不同时间点的变化 （μmol/ml, x±s）

2.2 血浆DAO水平变化与急性胃肠损伤分级的相关性 对入院患者24、72、120 h血浆DAO浓度与其相应的AGI分级，进行spearman秩相关分析，各时间点的秩相关系数rs分别为0.867（P＜0.001）、0.893（P＜0.001）、0.868（P＜0.001）。

3 讨 论

急性胃肠损伤是多发伤患者临床治疗中常见的并发症。多发伤患者除了失血性休克对胃肠道产生的直接影响以外，伤后机体对创伤的反应（如应激反应、炎性反应等）及缺血-再灌注损伤还可导致胃肠道功能受到进一步打击[6]。目前认为多发伤患者胃肠道功能损伤可诱发原已存在于肠腔内的细菌和内毒素发生移位，增加全身炎性反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）或脓毒症以及多器官功能衰竭综合征（multiple organ disfunction syndrome，MODS）发生和发展概率[7]；亦有文献[2]报道改善患者的胃肠功能状况能明显改善严重多发伤患者的预后。本研究多发伤轻伤组和重伤组伤后24 h血浆DAO水平均较正常组升高，这与文献[8]报道的多发伤患者创伤后可能存在“隐匿性”胃肠功能损害的结论一致，说明多发伤早期有实施积极的针对胃肠损伤治疗方案的必要。

欧洲重症医学协会腹部疾病工作组认为由于目前胃肠道功能相关监测指标的缺乏，很难对急性疾病过程中胃肠道功能做出可靠的评估，从而阻碍了对胃肠道功能障碍治疗策略的研究[9]。有研究证实DAO的活性水平高低受到肠黏膜绒毛的高度、肠黏膜细胞中核酸和蛋白合成及增殖程度的影响[10]；也有研究人员发现在小肠严重创伤后的24 h内，可检测到血中DAO明显升高，提示DAO是具有高度活性的细胞内酶，其活性变化能反映创伤后小肠黏膜屏障功能受损和修复情况[11]。黎君友等[12]通过一系列实验检测动物血乳酸（lactic acid，LA）、D-乳酸、内毒素（lipopolysaccharide，LPS）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）等相关指标，并同时对小肠组织作病理观察，发现血浆DAO变化能更早地反映胃肠道损伤，且灵敏度较高。

本试验对每例多发伤患者的急性胃肠损伤评分与血浆DAO呈显著正相关，说明血浆DAO可被临床用于多发伤患者急性胃肠损伤分级的监测评估。本研究还发现伤后各时间点伤情严重者血浆DAO水平显著高于伤情较轻者，所以血浆DAO不仅能客观地反应多发伤患者急性胃肠损伤程度，还可能提示创伤的严重程度。同时血浆DAO测定具有方法简便顺捷、重复性好、结果稳定等优点，值得临床早期应用以评估患者伤情及帮

助提高预后水平。当然，由于本研究纳入的病例数量有限，真正将血浆DAO推广至临床作为急性胃肠损伤常规监测指标，需要大量样本的进一步临床研究证实。

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（2015-11-09收稿 2015-12-14修回）

（责任编辑 罗发菊）

Study on correlation between plasma diamine oxidase levels and acute gastrointestinal injury grading in multiple trauma patients

LI Jun1, OUYANG Jun1, and XIA Jingjing2. 1. Department of Emergency, The First Hospital Affiliated to Medical College of Shihezi University, Xinjiang Uygur Autonomous Region, Shihezi 832000, China; 2. Department of Internal Medicine, Tiankang Hospital, Chuzhou 239300, China

Objective To explore the relationship between acute gastrointestinal injury (AGI) grading and the level of plasma diamine oxidase (DAO) in patients with severe multiple trauma. Methods 48 patients with severe multiple trauma were divided into mild trauma group [injury severity score (ISS)≤16, 26 cases] and severe multiple trauma group (ISS score ＞ 16, 22 cases) according to ISS score. Another 10 healthy people were selected as the control group. Venous blood was collected once for the control group, and that of other two groups were collected three times in 24, 72, and 120 h after injured respectively. The concentration of plasma DAO was measured by enzymelinked immunosorbent assay. AGI grading was conducted at corresponding timing, and correlation analysis between plasma DAO and AGI grading was then processed. Results For the detection data of plasma DAO, there was significant interaction between time factor and treatment factor (P＜0.01). Compared with the control group， the DAO levels in the mild trauma group and the severe trauma group were both increased obviously in 24 h after trauma (P＜0.01), and were higher in the severe trauma group than in the mild trauma group (P＜0.01). Gradually the DAO level decreased and recovered to normal in 120 h after injured, the difference between mild trauma group and control group was not significant (P＞0.05), but DAO level of severe trauma group was significantly higher than that of control group (P＜0.01). The level of plasma DAO were both highly relevant to the degree of gastrointestinal dysfunction in 24, 72, 120 h. Conclusions DAO level has a certain clinical significance in evaluating the severity of trauma and AGI grading in patients with multiple trauma.

multiple trauma; acute gastrointestinal injury grading; plasma diamine oxidase

R641

10.13919/j.issn.2095-6274.2016.01.006

李 军，硕士，医师，E-mail:lj213hf@sina.com

1. 832000，新疆省石河子大学医学院第一附属医院急诊科；2. 239300 滁州，安徽省天长市天康医院内科