miR-21和miR-93表达水平与三阴性乳腺癌发生发展的相关性研究

罗玲娟, 帕提玛·阿布力米提, 谢新梅, 张洪亮

(新疆医科大学附属中医医院 肿瘤二科, 新疆 乌鲁木齐, 830000)



miR-21和miR-93表达水平与三阴性乳腺癌发生发展的相关性研究

罗玲娟, 帕提玛·阿布力米提, 谢新梅, 张洪亮

(新疆医科大学附属中医医院 肿瘤二科, 新疆 乌鲁木齐, 830000)

目的探讨miR-21和miR-93的表达水平与三阴性乳腺癌(TNBC)发生发展的相关性。方法选择行乳腺癌根治术的女性患者86例，收集癌组织与正常乳腺组织，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-21和miR-93的相对表达量，并分析其与临床病理特征的相关性。结果miR-21和miR-93在TNBC组织中相对表达量高于癌旁组织; TNBC组织中, miR21高表达54例，占62.79%, miR-93高表达50例，占58.14%; miR-21和miR-93在肿瘤直径>5 cm、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期以及淋巴结转移的患者中高表达率显著增高(P<0.01); miR-21和miR-93的表达水平与患者年龄、月经状态、病理分级无明显相关性。癌组织中miR-21与miR-93表达水平呈显著正相关(r=0.761,P<0.01)。结论miR-21与miR-93在TNBC中表达异常增高，且与肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移有关，可作为TNBC诊断及判断预后的辅助指标。

微小核糖核酸; miR-21; miR-93; 三阴性乳腺癌; 逆转录聚合酶链反应

据统计，世界范围内乳腺癌每年新增女性病例约有120～140万，其中三阴性乳腺癌(TNBC)占10%～15%[1]。TNBC恶性程度高、易转移和复发[2]，且生物学行为、分子表达特征和临床病理特征较为特殊，常规组织病理学诊断已不能满足对其治疗指导和预后判断的需求。微小核糖核酸(miRNA)是一类长度为20～25个核苷酸的内源性非编码单链RNA, 广泛存在于真核生物中，参与多种信号通路的调节[3]。研究[4-6]表明, miRNA参与细胞增殖、凋亡、分化等重要过程的调控，其表达失调与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关。本研究通过检测三阴性乳腺癌患者组织中miR-21和miR-93的表达水平，探讨其与临床病理特征的相关性，现报告如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

选择2014年2月—2016年1月在新疆医科大学附属中医医院行乳腺癌根治术的女性患者86例，纳入标准: ① 均经术后病理证实为TNBC; ② 年龄≥18岁; ③ 术前均未行放、化疗、免疫治疗及内分泌治疗等; ④ 签署《知情同意书》。排除标准: ① 妊娠或感染患者; ② 肝肾功能不全; ③ 合并有心脑血管疾病、糖尿病及其他肿瘤。患者年龄26～63岁，平均(40.98±9.67)岁；肿瘤直径1.0～14.0 cm, 平均(5.65±1.48)cm; 绝经60例；未绝经26例；临床分期: Ⅰ～Ⅱ期57例, Ⅲ～Ⅳ期29例；病理分级: Ⅰ级7例, Ⅱ级59例, Ⅲ级20例；伴淋巴结转移27例。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1标本收集：收集所有患者癌组织和距肿瘤边缘2 cm以上的癌旁组织，严格无菌操作下，将标本切成小块，分装，30 min内-80℃冻存待测。

1.2.2逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测：采用Trizol试剂盒(美国Invitrogen公司)提取总RNA后，以GAPDH为内参，行PCR。反应体系中含：总RNA 1μL、模板cDNA 2.5 μL、聚合酶Ex Taq HS 0.1 μL、AMV逆转录酶0.5 μL、上下游引物各0.1 μL。miR-21引物序列：F: 5′-TGCGCTAGCTTATCAGACTGAT-3′, R: 5′-CCAGTGCAGGGTCCGAGGTATT-3′; miR-93引物序列: F: 5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′, R: 5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′; GAPDH引物序列: F: 5′-CAGGGCTGCTTTTAACTCTGGTAA-3′, R: 5′-GGGTGGAATACATTGGAACATGT-3′。 反应条件为: 94 ℃ 2 min; 94 ℃ 40 s, 50～65 ℃ 40 s, 72 ℃ 1 min, 共35个循环; 72 ℃ 5 min, 1个循环。反应结束后，取6 μL产物以2%琼脂糖凝胶电泳，扫描电泳条带灰度，计算miR-21和miR-93的相对表达量。

1.3评价标准

计算miR-21和miR-93的平均相对表达量，高于此值为高表达，低于此值为低表达。

1.4统计学处理

2　结　果

2.1癌组织和癌旁组织中miR-21、miR-93表达水平比较

miR-21和miR-93在TNBC组织中相对表达量高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1　癌组织和癌旁组织中miR-21、miR-93表达水平比较±s)

与癌旁组织比较, **P<0.01。

2.2癌组织中miR-21和miR-93表达水平与临床病理特征的相关性

癌组织中, miR21高表达54例，占62.79%, miR-93高表达50例，占58.14%。miR-21和miR-93在肿瘤直径>5 cm、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期及淋巴结转移的患者中高表达率显著增高(P<0.01); miR-21和miR-93的表达水平与患者年龄、月经状态、病理分级无显著相关性(P>0.05)。见表2。

2.3癌组织中miR-21和miR-93表达水平的相关性

TNBC组织中, miR-21、miR-93在癌组织中均呈高表达，两者的表达水平呈显著正相关(r=0.761,P<0.01)。

表2　癌组织中miR-21和miR-93表达水平与临床病理特征的相关性[n(%)]

与同一病理特征的另一亚项比较, **P<0.01。

3　讨　论

TNBC是一种亚型乳腺癌，多见于45岁以下的年轻女性，恶性程度高；首次确诊时临床分期晚、组织分级高、肿瘤直径大、多淋巴结转移；肿瘤侵袭性强，病情进展迅速，化疗、内分泌治疗等效果均不佳；预后差, 3年内远端转移和局部复发率高[7]。miRNA是一种小分子RNA片段，具有高度保守性、时序性和特异性，可调控癌基因和抑癌基因的表达，在多种肿瘤的发生发展过程中具有重要作用[8-9]。miR-21是目前研究较多的miRNA之一，据报道[10-11], miR-21高表达于甲状腺乳头状癌、食管鳞癌等肿瘤组织中。基础研究[12]显示, miR-21的表达水平对结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为均存在影响。吴子晏等[13]研究表明, miR-21高表达与骨肉瘤肺转移及对化疗药的敏感程度密切相关。刘洁等[14]也认为, miR-21的表达水平影响着结肠癌晚期患者对化疗药物的敏感性，或可作为预测化疗疗效的指标。miR-93位于MCM7基因的第13号内含子内，研究[15]显示, miR-93高表达可能通过下调抑癌基因染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)mRNA的表达，促进胃癌SGC-7901细胞的迁移和侵袭。

本研究应用RT-PCR检测TNBC组织及癌旁组织中miR-21和miR-93表达水平，并分析其与临床病理特征的相关性，结果显示，癌组织中miR-21和miR-93均过表达，两者表达水平呈显著正相关，且其表达水平与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移与否密切相关，提示miR-21和miR-93或可作为TNBC诊断及预后预测的辅助指标，其具体作用机制尚有待进一步研究。

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Study on correlation between expression levels of miR-21, miR-93 and the occurrence and development of triple-negative breast cancer

LUO Lingjuan, PATIMA·Abulimiti, XIE Xinmei, ZHANG Hongliang

(SecondDepartmentofOncology,TCMHospitalAffiliatedtoXinjiangMedicalUniversity,Urumchi,Xinjiang, 830000)

ObjectiveTo explore the correlation between expression levels of miR-21, miR-93 and the occurrence and development of triple-negative breast cancer (TNBC). MethodsA total of 86 females with radical mastectomy were selected to collect cancerous tissues and normal mammary tissues. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the relative expression of miR-21 and miR-93, and its relationship with clinical pathological characters was analyzed. ResultsThe expression of miR-21 and miR-93 was significantly higher in TNBC tissues than that in para-canerous tissues. Of all patients, 54 patients (62.79%) had high expression of miR-21 and 50 (58.14%) cases had high expression of miR-93 in TNBC tissues. The expression of miR-21 and miR-93 increased significantly in patients with tumor diameter >5 cm, in clinical stage of Ⅲ～Ⅳ and with lymph node metastasis (P<0.01). Meanwhile, the expression of miR-21 and miR-93 had no significant association with patients′age, menstrual status and pathological degree. However, the expression levels of miR-21 and miR-93 were positively associated with cancerous tissues (r=0.761,P<0.01). ConclusionThe expression levels of miR-21 and miR-93 are abnormally high in TNBC tissues, and are in close association with tumor diameter, clinical stage and lymph node metastasis, so they can be used as complementary indexes for the diagnosis and prognostic evaluation in patients with TNBC.

micro ribonucleic acid; miR-21; miR-93; triple-negative breast cancer; reverse transcriptase polymerase chain reaction

2016-04-21

中国高校医学期刊临床专项资金(11525862)

张洪亮, E-mail: zhanghongliang@csco.cn

R 737.9

A

1672-2353(2016)19-031-03DOI: 10.7619/jcmp.201619009