激活剂对检测活化部分凝血活酶时间的差异性研究

闫朝春，安仲武，秦继宝

（连云港市东方医院检验科，江苏连云港222042）

激活剂对检测活化部分凝血活酶时间的差异性研究

闫朝春，安仲武，秦继宝

（连云港市东方医院检验科，江苏连云港222042）

目的探讨不同激活剂作为活化部分凝血活酶时间（APTT）检测试剂时对APTT测定结果的影响。方法用鞣花酸和白陶土两种激活剂分别在LG-PABER-1型血凝分析仪和Sysmex CA-500全自动血凝分析仪上进行APTT检测，并在血浆中分别加入肝素钠和乏因子血浆进行APTT检测。运用t检验和方差分析对检测结果进行统计学分析。结果⑴在LG血凝仪上运用鞣花酸和白陶土作为不同激活剂，对37例临床标本进行APTT测定结果显示：白陶土作为激活剂测得的结果高于鞣花酸测得的结果（P＜0.05）。⑵同一批号的鞣花酸作为激活剂在Sysmex血凝仪和LG血凝仪上分别对40例临床标本进行APTT测定，结果显示：LG血凝仪上测得的结果高于Sysmex血凝仪测得的结果（P＜0.05）。⑶鞣花酸和白陶土作为不同激活剂对含有不同浓度肝素钠的血浆35例进行APTT测定结果显示：随着肝素钠浓度的增加，两种激活剂的APTT结果明显延长，与未加肝素钠组比较有显著差异（P＜0.05）。且鞣花酸组变化比白陶土组变化更明显。⑷运用鞣花酸和白陶土作为不同激活剂，对加入不同乏凝血因子的血浆后的血浆33例进行APTT测定显示：随着血浆中加入乏因子血浆的比例增多，两种激活剂的APTT结果延长也明显，与未加乏因子血浆的血浆的APTT比较有显著差异（P＜0.05）。且白陶土组变化比鞣花酸组更明显。结论不同激活剂APTT检测结果存在差异，且对肝素或乏因子血浆的敏感性存在差异；同一激活剂在不同仪器上APTT检测结果存在差异。建议不同的实验室应建立自己的参考范围。

活化部分凝血活酶时间；鞣花酸；白陶土

活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）测定是凝血功能检测的一项重要指标，也是术前检查的重要指标。它是临床上反映内源性凝血因子缺乏的主要指标之一［1］。可反映凝血因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ）、凝血酶原、纤维蛋白原以及因子Ⅴ、Ⅹ的水平［2］。检测方法目前多已仪器化，可运用半自动和全自动血凝分析仪进行检测。检测原理是将磷脂（部分凝血活酶）和激活剂加到血浆中，经过孵育，再加入适当浓度的钙离子，测定纤维蛋白形成的时间，即为活化部分凝血活酶时间［3-5］。本文探讨不同激活剂及激活剂在不同仪器上对APTT测定的影响，现将临床研究报道如下。

1 材料与方法

1.1 样本采集与处理选取本院临床作凝血功能检测的无黄疸、无溶血、无脂血标本。标本为静脉血置于含有1/10体积0.109mol/L枸橼酸钠抗凝剂（1份抗凝剂+9份全血）的硅化玻璃真空采血管中（浙江拱东医疗科技有限公司提供，批号1306243，公称液体容量2ml），轻轻地颠倒混匀，以3000r/ min离心15min，收集血浆进行试验。

1.1.1 肝素钠溶液（12.5U/ml）肝素钠由江苏万邦生化医药股份有限公司提供，规格为2ml：12500单位；国药准字H32020612。将肝素钠配制成终浓度为12.5U/ml的溶液。

1.1.2 乏因子血浆乏Ⅷ或Ⅸ因子血浆由西门子公司提供（批号983512）。

1.2 主要仪器与试剂仪器为LG-PABER-1型血凝分析仪（北京世帝科学仪器公司）和Sysmex CA-500全自动血凝分析仪（希森美康上海公司）。试剂为上海太阳生物技术有限公司提供，激活剂为鞣花酸（批号为892019）和白陶土（批号为311023）及0.025M的CaCl2溶液（批号为892030）。

1.3 方法⑴在LG-PABER-1血凝仪上运用鞣花酸和白陶土作为不同激活剂，对37例临床标本进行APTT测定。⑵运用同一批号的鞣花酸作为激活剂在Sysmex CA-500血凝仪和LG-PABER-1血凝仪上分别对40份临床标本进行APTT测定。⑶运用鞣花酸和白陶土作为不同激活剂对含有不同浓度肝素钠的血浆35份在LG-PABER-1血凝仪上进行APTT测定。12.5U/ml的肝素钠加入血浆稀释，使每份血浆含肝素钠终浓度分别为0.000U/ml、0.104U/ml、0.156U/ml、0.208U/ml、0.312U/ml、0.417 U/ml、0.625 U/ml，进行APTT测定。⑷运用鞣花酸和白陶土作为不同激活剂，对加入不同乏因子血浆后的血浆33份在LG-PABER-1血凝仪上进行APTT测定，加入方法为血浆与乏因子血浆按6：0、5：1、4：2、3：3、2：4混匀，制成待检血浆进行检测。

1.4 统计学方法计量资料以均数±标准差（x±s）表示，所有数据由Excel行基本运算，导入Stata 9.2统计软件包，组间均数比较运用t检验和方差检验进行分析。

2 结果

2.1 在LG-PABER-1血凝仪上运用鞣花酸和白陶土作为不同激活剂，对37份临床标本进行APTT测定结果显示：鞣花酸测得的APTT为26.1±4.5秒，白陶土测得的APTT为38.8±6.1s，两组数据存在差异（P＜0.05），且运用白陶土测得的结果较运用鞣花酸测得的结果明显延长。

2.2 运用同一批号的鞣花酸作为激活剂在Sysmex CA-500血凝仪和LG-PABER-1血凝仪上分别对40例临床标本进行APTT测定。结果显示LGPABER-1测得的APTT为26.1±4.4s，SYSMEXCA-500测得的APTT为23.9±4.8s，两组数据存在差异（P＜0.05），且LG-PABER-1血凝仪上测得的结果高于Sysmex CA-500血凝仪测得的结果。

2.3 运用鞣花酸和白陶土作为不同激活剂对含有不同浓度肝素钠的血浆35份进行APTT测定结果显示：随着肝素钠浓度的增加，两种激活剂的APTT结果明显延长，与未加肝素钠组比较有显著差异（P＜0.05）。且鞣花酸组变化比白陶土组变化明显，结果见表1。

2.4 运用鞣花酸和白陶土作为不同激活剂，对加入不同乏因子血浆后的血浆33份进行APTT测定显示：随着血浆中加入乏因子血浆的比例增多，两种激活剂的APTT结果延长也明显，与未加乏因子血浆的血浆的APTT比较有显著差异（P＜0.05）。且白陶土组变化比鞣花酸组更明显，结果见表2。

3 讨论

APTT是临床最常用的反映内源性凝血系统凝血活性的敏感筛查试验，对于内源性凝血因子缺陷及相关抑制物的检测和蛋白C抵抗现象的筛检，肝素治疗的监测，DIC早期的诊断，术前检查等方面有着广泛的用途［6］。探索有效控制影响APTT实验结果因素的系列方法，临床可获得准确的结果，有助于对APTT试验质量控制和标准化操作；有助于医生对血栓前状态，血栓性疾病患者体内血凝情况做出合理评价，有利于患者得到及时有效的诊断与治疗［7］。

表1 不同激活剂对含肝素钠血浆测定APTT结果（n=35，x±s）

表2 不同激活剂对含不同乏因子血浆的血浆测定APTT结果（n=33，x±s）

作者通过在同一仪器上运用不同激活剂对同一批标本进行检测APTT，研究结果发现运用鞣花酸和白陶土为激活剂测定APTT结果存在很大差异（P＜0.05）。白陶土时间长于鞣花酸，分析其原因可能是：白陶土不溶于水，使试剂成为混悬液，它以细小颗粒存在，可影响磁珠的运动，摩擦力有所增加，阻力亦增大，黏度便会增加，完成相同振幅所需时间延长；同等条件下，激活凝血因子形成纤维蛋白的过程变长；鞣花酸溶于水，以离子方式存在，为透明液体，该试剂用于全自动血凝仪，它的血浆凝固时间基本上不受试剂本身因素的影响［8］。因此，同一份标本在其它条件相同的情况下，用两种激活剂进行检测时，白陶土时间比鞣花酸要延长。在运用鞣花酸为激活剂在不同仪器上进行APTT检测结果也存在一定的差异（P＜0.05）。原因可能为检测原理的差异，LG血凝仪是利用磁感应原理的凝血检测法，在样品中加入一粒磁性小铁珠，测试槽两侧安装独立的线圈，交替产生电磁场，使小磁珠在恒定的血浆黏度中保持恒定的摆幅运动；采用电磁式感应器，测定磁珠的不同振幅，根据不同项目，仪器产生不同的磁场强度，由于是感应磁珠的相对运动，所以不会受到原血浆粘度的影响。当血浆凝固时，其黏稠度便会增加，磁珠摆幅逐渐变小至原振幅的50%时，计算机根据磁珠振幅情况可精确测试血浆凝固时间［3］。Sysmex血凝仪的原理是按一定比例混合后的样本与试剂因发生散射光的光强与凝集的程度存在一定的关系，并通过光电转换系统把这种微小的变化转化成放大的电信号。通过微处理器记录变化曲线，与标准曲线相比较，从而换算出检测项目的数值［9］。说明运用这两种原理进行APTT检测存在一定的差异。建议各实验室应根据自己的仪器和试剂建立自己的正常参考范围。

APTT是检测肝素用量的首选指标。应用小剂量普通肝素时（500～10000U/24h）可不做实验室检测，但应用中等剂量（10000～20000U/24h）或大剂量（20000～30000U/24h）时必须定期进行APTT实验检测，否则临床医生无法判断结果。一般情况下，行肝素抗凝后，APTT检测结果较健康对照组延长1.5～2.5倍可取得最佳抗凝效果，且出血风险较小。因此，APTT达健康对照值1.5倍时称为肝素“起效阈值”［10］。本文研究证实了肝素含量增多，APTT延长明显的观点。肝素可抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变为纤维蛋白，阻止血小板的粘附和聚集，使血浆中抗凝物质含量增多，影响凝血试验，使凝血时间延长［11］。笔者通过实验发现，随着肝素钠浓度的增加，两种激活剂的APTT结果延长也增加，与未加肝素钠组比较有显著差异（P＜0.05）。在监测肝素时检测APTT鞣花酸作为激活剂比白陶土作为激活剂更敏感。

NCCLS出了一个H47-A准则，要求APTT试剂/仪器系统应能查出少于0.3U/ml（30%）活性因子Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ的异常延长结果［7］。研究发现：鞣花酸作为激活剂时，可检出Ⅷ因子活性低于50%的甲型血友病，白陶土作为激活剂时，当凝血因子活性小于35%或更低时即可显示延长［4，5］。本文对于乏凝血因子的血浆检测APTT的研究发现，随着血浆中加入乏因子血浆的比例增多，两种激活剂的APTT结果延长也明显，与未加乏因子血浆的血浆的APTT比较有显著差异（P＜0.05）。鞣花酸与白陶土比较，白陶土更敏感。

总之，影响APTT检测的因素［12，13］很多，笔者也曾对于乙醇［14］和酸碱［2］进行探讨。对于试剂与仪器对APTT测定的影响值得临床引起重视，各实验室应建立自己的参考范围，这也是APTT难以标准化的因素之一。至于不同仪器使用［15］对APTT检测结果存在影响以及变异的关系，有待于作进一步的探讨。

［1］匡芳梅，赖兰英.贫血对PT和APTT检测结果的影响［J］.实验与检验医学，2014，32（6）：750-752.

［2］闫朝春，金艳凤，徐冬祥，等.酸碱度变化对实验室检测凝血4项指标结果的影响［J］.检验医学与临床，2010，7（9）：783-784.

［3］许文荣，谷俊侠.临床血液学检验［M］.南京：东南大学出版社，2001：165-168.

［4］丛玉隆.血栓与止血实验诊断的现代及发展［J］.中华检验医学杂志，2001，24（1）：5-7.

［5］王鸿利，谢爽.血栓与止血检测［J］.中华检验医学杂志，2005，28（3）：333-336.

［6］王勇，姚晓晖，王建褔.凝血四项试剂室温放置不同时间对测定结果的影响［J］.实验与检验医学，2012，30（5）：499-500.

［7］张茉莉，谢守军，薛承岩.影响活化部分凝血活酶时间测定的因素［J］.河北医学，2006，12（11）：1196-1197.

［8］诸静英，程大卫，邹静娟.对两种APTT试剂正常参考值的评估［J］.中国血液流变学杂志，2002，12（1）：57-59.

［9］林娟，门庆娟，刘长青，等.CA-500系列全自动血凝仪原理及日常维护［J］.医疗设备信息，2002，5：54.

［10］蒋灵霓.凝血及纤溶实验室检测的影响因素及临床应用［J］.国际检验医学杂志，2009，30（2）：196-198.

［11］董仁康，邓懋青.血凝试验的临床影响因素分析［J］.西南军医，2007，9（3）：79-80.

［12］闫朝春.2台血凝分析仪的性能比较及临床应用评价［J］.国际检验医学杂志，2014，35（13）：1770-1773.

［13］李秀兰，於兰娅.凝血试验检测结果的影响及分析［J］.实验与检验医学，2010，28（4）：404-405.

［14］闫朝春，蒋玲，冯茜，等.乙醇对凝血功能四项指标检测的影响［J］.检验医学与临床，2010，7（8）：696-697.

［15］张敏，徐敬然，寿爽.SYSMEX CS-5100和SYSMEX CA-7000血凝分析仪检测结果的比对分析［J］.实验与检验医学，2015，33（4）：444-446.

Comparison of two activators on activated partial thromboplastin time（APTT）test

YAN Chaochun，AN Zhongwu，QIN Jibao.

Department of Laboratory，Oriental Hospital of Lianyungang，Lianyungang Jiangsu 222042，China.

Objective To investigate the influence of different activators on activated partial thromboplastin time（APTT）test. Methods The APTT level of plasma which differential concentration heparin or poorⅧandⅨplasma was added into was determined by ellagic acid and kaolin in blood clotting analyzers between LG-PABER-1 analyzer and Sysmex CA-500 analyzer.The results were operated by t test and analysis of variance in statistics.Results⑴The APTT levels of 37 cases clinical specimen were tested by ellagic acid and kaolin with the same calcium chloride in LG analyzer.And the result of kaolin group was much higher than result of ellagic acid group（P＜0.05）.⑵The APTT levels of 40 cases specimen were tested by the same ellagic acid with the same calcium chloride in LG analyzer and Sysmex analyzer.And the result of LG analyzer was much higher than Sysmex analyzer's（P＜0.05）.⑶The APTT levels of 35 cases specimen that had differential concentration heparin were tested by two activators.The APTT was obviously increase along with increasing concentration of heparin（P＜0.05）.And ellagic acid group had marked change than kaolin group.⑷The APTT levels of 33 cases specimen that had differential poorⅧandⅨplasma were tested by two activators.The increasing degree of APTT was obviously increase along with increasing concentration of poorⅧandⅨplasma（P＜0.05）.And kaolin group had marked change than ellagic acid group.Conclusions The APTT level was different when in differential analyzer，when by differential activator.Reference range must been established himself by differential analyzer and activator in differential laboratory.

Activated partial thromboplastin time（APTT）；Ellagic acid；Kaolin

R446.11+1

A

1674-1129（2016）05-0571-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.05.011

2016-05-03；

2016-08-18）

闫朝春，男，1977年6月生，本科，副主任技师，研究方向：临床医学检验与管理，E-mail：YCC8255@163.COM.