戊二醛苯扎溴铵溶液对鸡新城疫病毒的杀灭效果研究

2016-11-15高富红周德刚高艳艳李召斌

中国兽医杂志 2016年4期

关键词：中和剂戊二醛中和

高富红，周德刚，高艳艳，李召斌

（国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳 471003）

戊二醛苯扎溴铵溶液对鸡新城疫病毒的杀灭效果研究

高富红，周德刚，高艳艳，李召斌

（国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳 471003）

考察戊二醛苯扎溴铵溶液消毒剂对新城疫病毒的杀灭效果。参考中华人民共和国农业部《兽用消毒剂技术规范》（1992年版），采用悬浮杀灭试验，以鸡胚感染法，将其通过不同稀释倍数（800、1600、3 200）、在不同时间段（5、10、15、30、60 min）观察其对新城疫病毒的杀灭效果。结果：戊二醛苯扎溴铵溶液在20℃水浴中，1 600倍稀释，作用5 min，对鸡新城疫病毒的灭活率在80%以上。结论：戊二醛苯扎溴铵溶液在20℃水浴中，对鸡新城疫病毒的最低有效浓度为1 600倍稀释，该浓度对新城疫病毒的最快有效时间为5 min。

戊二醛苯扎溴铵溶液；鸡新城疫病毒；杀灭效果

新城疫（ND）是由副黏病毒科禽腮腺炎病毒属新城疫病毒引起的鸡高度接触性、急性传染病。对养鸡业有着巨大的威胁。目前国内外对本病的控制仍没有完全解决，由于对鸡群用药的限制及其存在的弊端，消毒剂的应用已成为养殖场对新城疫等病毒防控的有效途径［1］。

戊二醛苯扎溴铵溶液是由洛阳惠中兽药有限公司研制生产的新型复方消毒液，主要成分为戊二醛、苯扎溴铵。为了科学评价戊二醛苯扎溴铵溶液对鸡新城疫病毒的定性杀灭效果，参考中华人民共和国农业部《兽用消毒剂技术规范》（1992年版），国家兽用药品工程技术研究中心考察了其对鸡新城疫病毒的定性杀灭效果试验，现将试验报告总结如下。

1　试验材料

毒株：鸡新城疫（ND）病毒LaSota株，购自中国兽医药品监察所。

主要仪器：电子分析天平，生物安全柜，移液器，水浴锅，旭升全自动电脑孵化机。

试剂：戊二醛苯扎溴铵溶液，批号20110901，洛阳惠中兽药有限公司生产。

灭菌生理盐水：中和剂（甘氨酸0.5%+吐温-80 4%）；磷酸盐缓冲液（0.03 mol/L，pH值为7.28）。

SPF鸡胚：由普莱柯股份有限公司孵化室提供。

2　试验内容及方法

2.1中和剂、消毒剂及中和产物对鸡胚的安全性试验将中和剂原液、800倍稀释的戊二醛苯扎溴铵溶液、800倍稀释的戊二醛苯扎溴铵溶液与中和剂作用后的中和产物分别接种5枚鸡胚，0.1 mL/胚，以验证中和剂、消毒剂及中和产物对鸡胚是否安全。

2.2中和剂和中和产物对新城疫病毒的影响

将中和剂与病毒作用液、中和产物与病毒作用液分别用PBS进行10倍系列稀释，分别取10-2、10-3、10-4稀释度各接种5枚鸡胚，0.1 mL/胚。将接种过的鸡胚置37℃培养，24 h以内死亡的鸡胚去掉，24 h以后死亡的鸡胚及时取出，并记录死亡情况，至120 h全部取出。取尿囊液进行血凝（HA）试验。同时设病毒液对照组。以验证中和剂和中和产物对鸡新城疫病毒有无影响。

2.3对新城疫病毒的定性杀灭试验方法［2］分别取800、1 600、3 200倍稀释戊二醛苯扎溴铵溶液各2.5 mL，分别加入2.5 mL（含2×105EID50）鸡新城疫病毒液中，混匀。

在水浴20℃±1℃的条件下，分别于5、10、15、30、60 min时取上述溶液1 mL，加入9 mL中和剂，混匀，作用10 min。立即分别取各混合液接种9日龄易感鸡胚，0.1 mL/胚，各浓度组各作用时间分别接种5枚鸡胚，将接种的鸡胚置37℃继续孵化120 h。同时设阳性对照组和阴性对照组。

每日照蛋，弃去24 h以前死亡的鸡胚，取24～120 h的死亡鸡胚和活胚，逐个取尿囊液做红细胞凝集（HA）试验［5］，凝集价≥1∶16（微量法）者判为感染（HA阳性）。HA阴性表示鸡胚未被感染。根据感染数计算EID50并计算病毒灭活率。

2.4结果判定标准血凝（HA）阴性表示病毒灭活，HA阳性表示病毒未灭活，消毒剂对照组和消毒剂中和产物对照组应无鸡胚死亡。

以10次结果中以80%鸡胚均为阴性的消毒液最低浓度为灭活NDV有效浓度，以该浓度消毒剂灭活病毒的最短时间为最快有效时间。

3　试验结果

3.1中和剂、消毒剂及中和产物对鸡胚的安全性试验结果中和剂、消毒剂和中和产物通过进行鸡胚尿囊腔接种，观察120 h均未见鸡胚死亡，表明中和剂浓度为0.5%甘氨酸+4%吐温-80、800倍稀释的戊二醛苯扎溴铵溶液以及800倍稀释的戊二醛苯扎溴铵溶液同中和剂的作用产物对鸡胚是安全的。

3.2中和剂及中和产物对鸡新城疫病毒的影响试验结果中和剂及中和产物与鸡新城疫病毒作用后测得的病毒含量均与病毒对照组测得的病毒含量一致，表示中和剂和中和产物对鸡新城疫病毒无影响。

3.3戊二醛苯扎溴铵溶液对鸡新城疫病毒灭活测定结果根据表1中结果及结果判定标准，戊二醛苯扎溴铵溶液在1 600倍稀释，作用5 min，10次结果中有6次对新城疫病毒的灭活率达80%，其余4次灭活率达100%。说明戊二醛苯扎溴铵溶液对新城疫病毒的最低有效浓度为1 600倍稀释，该浓度对新城疫病毒的最快有效时间为5 min。

表1　戊二醛苯扎溴铵溶液对鸡新城疫病毒灭活测定结果

4　结论

戊二醛苯扎溴铵溶液在20℃水浴中，对鸡新城疫病毒的最低有效浓度为1 600倍稀释，该浓度对新城疫病毒的最快有效时间为5 min。

5　讨论

5.1本试验中浓度为0.5%甘氨酸+4%吐温-80的中和剂、800倍稀释的戊二醛苯扎溴铵溶液，经鸡胚尿囊腔内接种0.1 mL，鸡胚不发生死亡，且发育正常，这与武卫平［4］等的研究结果一致。同时800倍稀释的戊二醛苯扎溴铵溶液与中和剂作用后中和产物对鸡胚也是安全的。

5.2在消毒学研究中，除消毒剂性质不同所致灭活差别外，就同一消毒剂而言，其有效使用浓度与接种时间乃是决定消毒成败的关键所在［5］。采用悬浮杀灭试验，通过鸡胚感染研究表明，戊二醛苯扎溴铵溶液在同一作用时间点，随着作用浓度的升高，杀灭率也随之增强。在同一浓度条件下，随着作用时间的延长，杀灭率也随之提高。这同多数消毒剂对细菌的杀菌效果一样［6-10］，戊二醛苯扎溴铵溶液对病毒的杀灭效果也是随着浓度的增加、作用时间延长而增强。

［1］刘艳华，温芳，王学伟，等.兽用消毒剂二氧化氯检测方法的研究进展［J］.中国兽药杂志，2011，45（2）：51-54.

［2］中华人民共和国农业部.兽用消毒剂鉴定技术规范［S］.北京：（1992）农（牧药）字第101号，1992.

［3］中华人民共和国国家标准，新城疫诊断技术［M］.GB/T 1 6550-2008.

［4］武卫平，禚宝山，李富金，等.复方戊二醛消毒剂对鸡禽流感病毒（H9N2株）杀灭效果的研究［J］.中国兽药杂志，2005；39（12）：25-27.

［5］韩友圻.消毒剂灭活病毒影响因素的研究进展［J］.中国消毒学杂志，1993；10（3）：168-169.

［6］赵春兰，乔玫，宋哓红，等.复方强化戊二醛消毒液对细菌芽孢的杀菌效果观察［J］.中国消毒学杂志，2006；23（3）：233.

［7］李绥晶，王莉.复方戊二醛消毒剂杀菌效果的试验观察［J］.中国消毒学杂志，2003；20（3）：171.

［8］韩艳淑，刘继敏，董辉，等.戊二醛复方消毒剂性能的试验观察［J］.中国消毒学杂志，2002；19（3）：184.

［9］张亚尼，宋晖，张福娥，等.5种含氯消毒剂杀菌效果及能量试验研究［J］.中国消毒学杂志，2005；22（2）：147.

［10］徐燕，王玲，谈智，等.复方过氧化氢消毒剂杀灭微生物效果的试验研究［J］.中国消毒学杂志，2005；22（2）：361.

S852.65+9.5

0529-6005（2016）04-0105-02