高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中青霉素类药物残留量

◎董雪玲（北京东方纵横产品检测有限公司（有机实验室），北京 101102）

高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中青霉素类药物残留量

◎董雪玲
（北京东方纵横产品检测有限公司（有机实验室），北京 101102）

为测定牛奶中青霉素类药物残留量，将牛奶样品采用乙腈沉淀蛋白，通过正己烷液萃取除脂，经高效液相色谱C18柱分离，选用乙腈+0.1%甲酸-水为流动相进行梯度洗脱，采用高效液相色谱-串联质谱法在正离子多反应监测模式下测定。结果表明，采用高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中青霉素类药物残留量在国家规定的限量范围内，该方法可以简便、快速、准确地测定牛奶中青霉素类药物残留量。

牛奶；青霉素；高效液相色谱-串联质谱法

目前，测定牛奶中青霉素类药物残留的分析方法主要有微生物法、高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法[1，2]。其中，高效液相色谱-串联质谱法具有较高的准确性、高特异性，同时不受化学基质的影响，并且应用简便快速。

1　材料与方法

1.1仪器与试剂

Agilent 6460三重四级杆液相色谱串联质谱仪（安捷伦公司）；甲醇、乙睛和正己烷均为色谱纯；标准品：萘夫西林（纯度≥94.0%）、青霉素G（纯度≥97.2%）、哌拉西林（纯度≥98.2%）、青霉素V（纯度≥97.9%）、苯唑西林（纯度≥95.9%）、阿莫西林（纯度≥99.5%）、氨苄西林（纯度≥98.8%）、氯唑西林（纯度≥98.9%）和双氯西林（纯度≥97.5 %)，Sigma公司产品。

1.2方法

1.2.1样品处理

牛奶样品处理方法参照GB/T 20755-2006方法。

1.2.2色谱条件

色谱条件参照GB/T 20755-2006方法。

1.2.3青霉素类标准系列溶液

分别量取1 μ g/mL青霉素类混合标准储备5、10、20、40、80 μ L和100 μ L到1 mL容量瓶中，用乙腈溶液定容。得到浓度为5、10、20、40、80 ng/mL 和100 ng/mL的青霉素类系列标准工作液[3]。以含量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制工作曲线。

2　结果

2.19种青霉素类药物标准曲线及线性相关系数

按照1.2.3进行配制，并按照1.2.2色谱条件进行分析，9种青霉素类药物在5～100 μ g/L时具有良好的线性关系，相关系数（r）为0.999 2～0.999 8。其中：

2.2牛奶中青霉素的含量

依据1.2.1样品处理过程对样品进行处理，经0.22 μ m滤膜过滤，上机测试。本批次测定的牛奶样品得到的结果为萘夫西林、青霉素G、哌拉西林、青霉素V、苯唑西林、阿莫西林、氨苄西林、氯唑西林和双氯西林均没有检测到。牛奶中这些指标的含量均符合国标限定的含量。

3　结论

青霉素类抗生素属于β-内酞胺类抗生素，是一类重要的抗菌药物，在兽医临床上广泛应用。此类药物不规范的使用会导致青霉素残留在牛奶中，如果长期饮用会使青霉素在人体内不断积累从而造成人体生理功能紊乱。许多国家对青霉素残留牛奶都进行了严格管制。采用高效液相色谱-串联质谱法可以测定牛奶中青霉素类药物残留量，本批次的牛奶中的青霉素含量均在国家规定的范围内，对人体不会造成伤害。

[1]王惠娇，黄方取，周鸿艳，等.高效液相色谱一串联质谱法测定牛奶中8种青霉素类药物[J].中国卫生检验杂志，2015，25（17）：2881-2883.

[2]赵维，杜钢，李向荣.高效液相色谱一串联质谱法测定牛奶中9种青霉素类药物的残留量[J].浙江大学学报，2012，41（2）：171-176.

[3]肖惠贞，刘红河，甄珍，等.高效液相色谱一串联质谱法测定乳制品中7种青霉素类抗生素残留[J].中国卫生检验杂志，2014，24（11）：1546-1552.

Penicillin Drugs Residues in Milk with High Performance Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometry Determination

Dong Xueling
（Beijing Oriental and Product Testing Co. LTD.，Beijing 101102，China）

For the determination of penicillin drugs residues in milk，the milk samples were determinated by using protein precipitation by n-hexane extraction liquid grease，by using high performance liquid chromatography C18 column，using acetonitrile +0.1% formic acid and water as mobile phase in gradient elution，using high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry in positive ion multiple reaction monitoring mode. The results showed that HPLC-MS/MS determinating the penicillin drugs residues in milk was in the limited within the scope stipulated by the state，the method was simple，rapid and accurate for determination of penicillin drugs residues in milk.

Milk； Penicillin； HPLC-MS/MS

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.04.030

TS252.7；O657.63