早期梅毒血清IL-37和IL-38的检测

张胜佳　李富容　刘丹璇　温　晶　李　珍肖海璐　李中伟　郑荣涛　侯建玲　田洪青



·论著·

早期梅毒血清IL-37和IL-38的检测

张胜佳1,2李富容2刘丹璇2温晶2李珍2肖海璐1,2李中伟2郑荣涛2侯建玲2田洪青2

目的：检测早期梅毒患者血清IL-37和IL-38的水平。方法：采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测140例早期梅毒患者和180例正常对照血清IL-37、IL-38的表达水平。结果：早期梅毒患者血清中IL-37和IL-38的中位数分别为14.15 pg/mL和12.21 pg/mL,正常对照组分别为31.76 pg/mL和17.09 pg/mL，差异均有统计学意义(均P<0.005)。结论：早期梅毒患者外周血清中IL-37和IL-38降低，可能与梅毒患者细胞免疫相关。

早期梅毒；IL-37；IL-38

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum TP)引起的一种慢性性传播疾病，几乎可侵犯全身各个器官，产生多种多样的症状或体征、功能障碍、组织破坏乃至死亡。细胞免疫是机体清除梅毒螺旋体的主要免疫反应[1]。梅毒早期细胞免疫反应以Th1为主、Th17细胞高表达是其特征之一[2，3]。TNF-α作为一种经典的Th1型细胞因子在梅毒螺旋体的清除中发挥了重要作用，在早期梅毒外周血的表达明显高于正常对照[4-6]。IL-37作为新型的抗炎细胞因子，具有抑制炎症反应及炎症因子的功能，尤其是对TNF-α 的抑制率可以达到80%～98%[7]。Th17细胞是具有

独立功能的细胞亚群，Th17细胞在自身免疫性疾病、感染性等疾病中发挥着重要作用，Th17细胞以及其主要细胞因子IL-17在早期梅毒外周血中的表达明显高于正常对照[8]。IL-38作为炎症抑制因子，具有抑制Th17产生IL-17和IL-22的功能，在Th17介导的炎症中发挥作用[9]。因此我们推测IL-37、IL-38可能与早期梅毒的细胞免疫具有相关性。通过检测IL-37、IL-38在早期梅毒外周血与正常对照外周血中的表达水平，探讨其作用。

1　资料与方法

1.1研究对象研究对象均为2013年4月至2014年3月就诊于我院性病门诊的早期梅毒初诊患者。早期梅毒入选标准：病期在2年以内；未经驱梅治疗；TRUST和TPPA试验均阳性，或TP-PCR阳性。对照入选标准：无梅毒相关临床表现；未经驱梅治疗；TRUST和TPPA试验均阴性；可疑患者如果行TP-PCR检测，结果为阴性。早期梅毒和对照的排除标准：①HIV抗体检测阳性；②患有自身免疫性疾病或其他感染性疾病者；③妊娠、哺乳期妇女。

1.2实验方法

1.2.1主要仪器和试剂IL-37、IL-38 ELLSA 试剂盒(上海严谨生物科技有限公司)；酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司)；微孔振荡器；电热恒温培养箱；TRUST和TPPA试剂盒等。

1.2.2标本采集抽取患者和对照组静脉血2 mL，收集于无菌干燥试剂管中，静置、分离血清后置于-80摄氏度保存备用。

1.2.3TRUST、TPPA、HIV检测，操作均严格按照操作规则进行。

1.2.4IL-37、IL-38水平的检测采用双抗体夹心ELLSA方法，严格按照说明书步骤进行操作(标准品的稀释、加样、温育、配液、洗涤、加酶、温育、洗涤、显色、终止、测定)。在450 nm波长按顺序测量出各标本的吸光度(OD值)。用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度。

1.3统计学方法使用SPSS 19.0统计软件，计量资料以均数±标准差表示，两组数据比较采用独立样本t检验；多组数据比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1临床资料早期梅毒组入选140例。由于蛋白质降解的原因，部分标本未能检测到数据。最终纳入统计的例数：IL-37组为128例、IL-38组为138例。IL-37病例组：男53例，女75例；年龄16～86岁,平均32.4岁；一期梅毒21例，二期梅毒43例，早期潜伏梅毒(病期在2年以内)64例；有症状梅毒组包括一期和二期梅毒，无症状梅毒组包括早期潜伏梅毒。IL-38病例组：男59例，女79例；年龄15～86岁,平均32.7岁；一期梅毒23例，二期梅毒46例，早期潜伏梅毒69例。

对照组入选180例。由于蛋白质降解的原因，部分标本未能检测到数据。最终纳入统计的例数：IL-37组为176例、IL-38组为180例。IL-37对照组：男100例、女76例，年龄17～69岁,平均33.2岁；IL-38对照组：男95例，女85例，年龄18～69岁,平均33.7岁。

2.2检测结果

2.2.1IL-37、IL-38对照组和病例组的检测结果见表1。用两组独立样本t检验进行比较，结果显示：IL-37对照组和病例组间的差异有统计学意义(P<0.01)，IL-38 对照组和病例组间的差异有统计学意义(P<0.01)(表1)。

2.2.2对IL-37、IL-38在一期梅毒、二期梅毒、早期潜伏梅毒3组的检测结果进行方差分析比较，结果显示：3组IL-37差异无统计学意义(P>0.05)，而3组IL-38差异则具有统计学意义(P<0.01)(表2)。

2.2.3对IL-37、IL-38在有症状梅毒组和无症状梅毒组的检测结果进行t检验比较，结果显示：IL-37、IL-38在有症状组、无症状组间差异均无统计学意义(P>0.05)(表3)。

表1　IL-37和IL-38在梅毒病例组与对照组的检测结果

表2　IL-37和IL-38在各期梅毒组的检测结果

表3　IL-37和IL-38在有/无症状梅毒组的检测结果

3　讨论

IL-37是IL-1家族新型的抗炎细胞因子，具有抗炎和免疫抑制作用[10，11]。1992年Fitzgerard提出了梅毒发病机制中Th1/Th2反应失衡的学说：梅毒早期以Th1型介导的反应为主，随着梅毒病程的进展逐渐迁延转变为Th2型介导的反应，梅毒螺旋体的清除以Th1细胞免疫为主，一旦Th1/Th2失衡，向Th2方向漂移，机体的细胞免疫将会受到抑制，造成梅毒病程的迁延。许多国内外学者通过检测典型细胞因子在梅毒外周血的表达也进一步证实了Th1/Th2反应失衡的学说[12]。

TNF-α作为典型的Th1型细胞因子，其在早期梅毒外周血中的表达明显高于正常对照，而IL-37对TNF-α有很强的抑制力，本研究结果表明IL-37在早期梅毒外周血中的表达明显低于正常对照，降低了对Th1的抑制作用，可能与梅毒早期Th1细胞免疫增强具有相关性。

IL-38也是IL-1家族的成员，是一种抗炎细胞因子，通过抑制炎症因子从而抑制Th17细胞介导的炎症反应。IL-17在早期梅毒外周血中的表达明显高于正常对照，Th17在早期梅毒的细胞免疫中发挥重要作用[13-15]。

我们的研究结果表明IL-38在早期梅毒外周血中的表达明显低于正常对照，降低了对Th17以及IL-17的抑制作用，可能与早期梅毒Th17表达升高具有相关性。

我们对早期梅毒不同的分期进行了比较。IL-38在一期梅毒、二期梅毒、早期潜伏梅毒间的表达具有显著性差异，二期梅毒高于早期潜伏梅毒和一期梅毒。IL-37在一期梅毒、二期梅毒、早期潜伏梅毒间无显著性差异。推测二期梅毒患者血清中IL-38免疫抑制功能比一期梅毒更低，对IL-17表达的抑制进一步减弱。早期梅毒的不同分期之间的免疫反应可能存在差异。

以上两种细胞因子的试验均未纳入晚期梅毒患者。进一步扩大样本量或进一步分病期可能会进一步揭示相关细胞因子的作用。梅毒的细胞免疫机制错综复杂，这两种细胞因子具体以什么方式或通路发挥作用有待于进一步研究。

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(收稿：2015-03-11修回：2015-04-08)

Detection of serum level of IL-37 and IL-38 in the patients with early syphilis

ZHANGShengjia,LIFurong,LIUDanxuan,WENJing,LIZhen,XIAOHailu,LIZhongwei,ZHENGRongtao,HOUJianling,TIANHongqing.

1.SchoolofMedicalandLifeScience,UniversityofJinan,Jinan250062,China; 2.ShandongProvincialInstituteofDermatologyandVenereology,Jinan250022,China

TIANHongqing,E-mail:tianhq2006@126.com

Objective: To detect the serum level of IL-37 and IL-38 in the patients with early syphilis. Methods: The level of IL-37 and IL-38 was detected with ELISA in 140 patients with early syphilis and 180 healthy controls. Results: The medians of IL-37 and IL-38 in patients of early syphilis were 14.15 pg/mL and 12.21 pg/mL, which was lower than those of in healthy controls 31.76 pg/mL and 17.09 pg/mL (均P<0.05). Conclusion: The level of IL-37 and IL-38 is lower in the patients with early syphilis, indicating that IL-37 and IL-38 may be involved in the cellular immunity.

early syphilis; interleukin-37; interleukin-38

山东省科技发展计划项目(编号：2014GSF118104)

1济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院，济南，250062

2山东省皮肤病医院 山东省皮肤病性病防治研究所,济南,250022

田洪青，E-mail：tianhq2006@126.com