鼻咽癌EGFL7的表达与肿瘤侵袭转移的关系

陈顺金，陈靖，吴笑英，黎润球(东莞市人民医院耳鼻喉科、病理科，广东东莞53000)

·论著·

鼻咽癌EGFL7的表达与肿瘤侵袭转移的关系

陈顺金1，陈靖2，吴笑英1，黎润球1
(东莞市人民医院耳鼻喉科1、病理科2，广东东莞523000)

目的检测鼻咽癌表皮生长因子样结构域7(EGFL7)的表达水平，并观察其与肿瘤侵袭转移的相关性，为临床诊疗提供依据。方法选取2014年1月至2016年1月我院收治的鼻咽癌患者50例为观察组，同期鼻咽炎患者50例为对照组，应用免疫组化分析法检测两组患者的EGFL7表达水平、微血管密度(MVD)和淋巴管密度(LVD)，并分析EGFL7与病理特征、MVD和LVD的关系。结果观察组患者的EGFL7高表达率为38.0%(19/50)，显著高于对照组的10.0%(5/50)，差异具有统计学意义(P＜0.05)；EGFL7与年龄、性别和EB病毒无关(P＞0.05)，与临床分期和淋巴结转移有关(P＜0.05)；EGFL7与MVD呈正相关(P＜0.05)，与LVD无相关(P＞0.05)。结论EGFL7与鼻咽癌转移有关，与血管形成有关，与淋巴管形成无关。

表皮生长因子样结构域7；鼻咽癌；鼻咽炎；相关性

鼻咽癌是发生在鼻咽腔的恶性肿瘤，多发生于顶部和侧壁，是耳鼻喉科常见的恶性肿瘤之一。鼻咽癌发生转移是导致患者死亡的主要原因，其中颈部淋巴结转移最常见。血管形成是恶性肿瘤转移的重要原因，淋巴结转移也是最重要的途径，尤其是头颈部恶性肿瘤[1]。现阶段研究显示，生物因子与肿瘤血管、淋巴管形成有重要关系，比如：血管内皮生长因子(vascularendothelialgrow th factor，VEGF)与肿瘤血管、淋巴管的形成存在较大关系[2]。表皮生长因子样结构域7(epidermalgrow th factor like domain 7，EGFL7)与血管内皮有关，在血管形成中发挥重要作用，与其功能完善也有较大关系[3]。研究显示，EGFL7在肿瘤细胞中也会出现表达，但是其是否与淋巴管形成有关尚无定论[4]。本研究旨在研究EGFL7的表达水平，并观察其与肿瘤侵袭转移的相关性，为临床诊疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2014年1月到2016年1月我院收治的鼻咽癌患者50例为观察组，所有患者均经病理确诊为鼻咽癌。男性39例，女性11例；年龄38～80岁，平均(59.4±3.3)岁；临床分期：Ⅰ+Ⅱ期31例，Ⅲ+Ⅳ期19例。另选取同期行鼻咽活检且病理确诊为鼻咽炎患者50例为对照组，男性38例，女性12例。年龄37～80岁，平均(58.9±2.8)岁。两组患者的年龄和性别比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。本研究经医学伦理委员会批准，所有患者及家属均知情同意，并签署知情同意书。

1.2 方法手术取标本放置于10%甲醛溶液中，常规石蜡包埋，以4µm厚度进行连续切片。应用兔抗人EGFL7单克隆抗体(由上海生物技术有限公司提供)检测两组组织中EGFL7表达水平。应用免疫组化分析法检测观察组微血管密度(m icrovesseldensity，MVD)、淋巴管密度(lymph vesseldensity，LVD)，所有操作均按照操作说明进行，均由同一医师操作。EGFL7为胞浆染色，染色程度：0分表示胞浆无染色；1分表示胞浆淡黄色云雾状染色；2分表示胞浆黄素颗粒状染色；3分表示胞浆深黄色均匀染色；阳性细胞所占比例：0分表示阳性细胞数≤10%；1分表示阳性细胞数为11%～40%；2分表示阳性细胞数为41%～70%；2分表示阳性细胞数超过70%。总计分为着色强度+阳性细胞所占比例。总计分0分表示阴性；总计分1～2分表示弱阳性；总计分3～4分表示阳性；总计分5～6分表示强阳性(阴性+弱阳性表示低表达；阳性+强阳性表示高表达)。MVD计数和LVD计数：将其放置于200倍的显微镜下观察记录5个视野，取平均值进行计数。

1.3 统计学方法应用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，应用Pearson进行相关性分析，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EGFL7表达情况观察组患者的EGFL7高表达为38.0%，显著高于对照组的10.0%，差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 鼻咽癌和鼻咽炎组织中EGFL7表达水平比较[例(%)]

2.2 EGFL7与临床病理关系EGFL7与年龄、性别和EB病毒无关(P＞0.05)，与临床分期和淋巴结转移有关(P＜0.05)，见表2。

表2 EGFL7与临床病理关系[例(%)]

2.3 MVD、LVD与临床病理关系EGFL7高表达者MVD显著高于低表达者，有淋巴结转移者MVD、LVD均显著高于无淋巴结转移者，Ⅲ+Ⅳ期者MVD、LVD均显著高于Ⅰ+Ⅱ期者，比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 MVD、LVD与临床病理关系(±s)

表3 MVD、LVD与临床病理关系(±s)

临床病理EGFL7表达分类高表达低表达t值6.748 P值0.009 t值1.023 P值0.193淋巴结转移有无5.462 0.012 5.036 0.013 TNM分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期例数19 31 20 30 31 19 MVD 86.45±13.25 52.52±9.36 81.24±10.57 56.25±6.73 62.38±3.85 84.67±8.04 4.529 0.019 LVD 9.35±2.32 6.93±1.07 13.04±2.04 2.09±0.95 14.33±2.26 5.29±0.74 3.952 0.021

2.4 相关性分析Pearson相关性分析结果显示，EGFL7与MVD呈正相关关系(r=0.745，P＜0.05)，与LVD无相关关系(r=0.004，P＞0.05)。

3 讨论

转移侵袭是恶性肿瘤的重要特征，是导致恶性肿瘤恶化的重要原因，给患者生命带来较大威胁。多数研究显示，不同肿瘤出现侵袭转移时均具有相似的步骤，主要包括：原发肿瘤迅速生长、形成新的血管、肿瘤细胞脱落经血管或淋巴进入循环、躲避免疫攻击达到新的靶器官[5]。而肿瘤细胞到达新靶器官后先形成一个无血管的微小转移病灶，然后出现新血管形成，进而发展成为可见的转移病灶。由此可见，新生血管形成在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用[6]。血管内皮细胞和血管内皮相关因子在血管形成中发挥重要作用，比如：VEGF可以刺激血管和淋巴管的内皮细胞增生，进而刺激血管和淋巴管的生长。EGFL7与血管形成有关，但是其是否与淋巴管形成有关不确切[7-8]。其与鼻咽癌侵袭转移的关系也研究较少，因此，本研究探讨鼻咽癌EGFL7表达情况，并观察EGFL7与肿瘤侵袭转移的关系。

本研究显示，说明鼻咽癌组织中会存在EGFL7高表达，分析其原因可能为[9-10]：EGFL7可以促进新血管形成，进而促进肿瘤细胞的生长和繁殖，因此会在恶性肿瘤组织中出现高表达。淋巴结转移是肿瘤转移的常见途径，是多数肿瘤转移的首要途径。肿瘤分期与肿瘤侵袭转移具有较大关系，肿瘤出现侵袭转移时肿瘤分期也会出现变化，因此观察肿瘤淋巴结转移情况和肿瘤分期情况可以推测肿瘤侵袭转移情况[11]。EGFL7与年龄、性别和EB病毒无关(P＞0.05)，与临床分期和淋巴结转移有关，说明EGFL7与肿瘤侵袭转移存在一定关系，EGFL7促进血管形成在一定程度上促进肿瘤细胞增殖，肿瘤细胞增殖过度转移的可能性也会增加，肿瘤转移后EGFL7促进新血管形成进而使转移肿瘤细胞稳定生长，因此EGFL7与肿瘤转移侵袭存在一定关系。EGFL7高表达者MVD显著高于低表达者，有淋巴结转移者MVD、LVD均显著高于无淋巴结转移者，Ⅲ+Ⅳ期者MVD、LVD均显著高于Ⅰ+Ⅱ期者，与其他研究结果具有相似性[12]，说明肿瘤出现淋巴结转移和分期较高者MVD和LVD也会相应表达增加，EGFL7高表达者仅会出现MVD高表达，LVD无明显差异，推测EGFL7在肿瘤侵袭转移中发挥作用仅与血管形成有关，而与淋巴管是否形成无关。本研究证实，EGFL7与MVD呈正相关关系，与LVD无相关关系，充分证实EGFL7与VEGF不同，EGFL7仅仅刺激新血管形成，进而促进肿瘤侵袭转移，而不刺激淋巴管形成。

综上所述，EGFL7在鼻咽癌组织中会出现高表达，且EGFL7高表达与肿瘤侵袭转移有关，EGFL7可以刺激血管形成进而促进肿瘤侵袭转移，对淋巴管形成与否无明显影响。

[1]邱圣红,魏球娣,梁志娴,等.中医临床护理路径在鼻咽癌放疗患者中的应用[J].广东医学,2014,52(9)∶1460-1462.

[2]周敬淳,刘明,张伟,等.鼻咽癌动态增强MRI相关参数及其与DLC-1表达的关系[J].中国老年学杂志,2015,35(19)∶5530-5532.

[3]李璐,王建红,黄辉,等.EB病毒m iR-BART4*和m iR-BART18-3p在鼻咽癌中的表达及意义[J].安徽医科大学学报,2015,50(9)∶1267-1270.

[4]LiQ,Wang AY,Xu QG,etal.In-vitro inhibitory effectof EGFL7-RNAi on endothelialangiogenesis in glioma[J].Int JClin Exp Pathol,2015, 8(10)∶12234-12242.

[5]鲍志宇,崔英.VEGF和survivin与鼻咽癌的相关性研究进展[J].中国老年学杂志,2014,34(8)∶2315-2316.

[6]Andersen M,TrapaniD,Ravn J,etal.Methylation-associated silencing ofmicroRNA-126 and its hostgene EGFL7 inmalignant pleural mesothelioma[J].Anticancer Res,2015,35(11)∶6223-6229.

[7]方敏,宋涛,吴式琇,等.c-Jun在鼻咽癌组织中的表达以及对鼻咽癌复发的影响[J].中国医药导报,2015,36(31)∶35-39,43.

[8]邓小芸,赖玉琼,黄伟俊,等.超声造影对鼻咽癌颈部转移淋巴结的诊断价值[J].广东医学,2014,35(20)∶3186-3188.

[9]Wang XX,Yao XB,Qiang ZS,et al.A ttenuation of EGFL7 inhibits human laryngocarcinoma cells grow th and invasion[J].Int J Clin Exp Med,2015,8(3)∶3141-3155.

[10]连仕锋,季明芳,吴标华,等.EB病毒血清学筛查鼻咽癌高、中危人群的随访研究[J].中华预防医学杂志,2015,49(1)∶26-30.

[11]刘星烁,李红雨,赵书君,等.上皮性卵巢癌组织中m iR-126、EGFL7的表达与微血管密度的检测[J].郑州大学学报(医学版), 2015,59(2)∶244-248.

[12]刘学锋,孙明,詹运洪,等.EGFL7蛋白和上皮性钙黏附蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学,2015,23(7)∶968-971.

Expression of EGFL7 in nasopharyngeal carcinoma and its relationship w ith tumor invasion and metastasis.

CHEN Shun-jin1,CHEN Jing2,WU Xiao-ying1,LIRun-qiu1.Departmentof ENT1,Departmentof Pathology2,Dongguan People'sHospital,Dongguan 523000,Guangdong,CHINA

Objective To detect the expression of epidermalgrow th factor like domain 7(EGFL7)in nasopharyngeal carcinoma,and to observe its correlation w ith tumor invasion and metastasis,in order to provide the basis for clinical diagnosis and treatment.M ethods Fifty patientsw ith nasopharyngeal carcinoma in our hospitalwere selected as observation group from January 2014 to January 2016.Fifty patientsw ith nasopharyngitis of the same period were selected as the control group.The expression levels of EGFL7,m icrovessel density(MVD)and lymphatic vessel density (LVD)of two groups were detected using immunohistochemical analysis,and the relationship between EGFL7 and pathologic features,MVD and LVD were observed.Results The high expression rate of EGFL7 in the observation group was38.0%(19/50),significantly higher than 10.0%(5/50)in the controlgroup,and the differencewas statistically significant(P＜0.05).EGFL7 had nothing to do w ith age,sex and EB virus(P＞0.05),butwas associated w ith clinical stage and lymph nodemetastasis(P＜0.05).EGFL7 and MVD were positively correlated(P＜0.05),and therewasno correlation between EGFL7 and LVD(P＞0.05).Conclusion EGFL7 is related to themetastasisof nasopharyngeal carcinoma and the formation of blood vessels,butnotcorrelated to the formation of lymphatic vessels.

Epidermalgrow th factor like domain 7(EGFL7);Nasopharyngeal carcinoma;Nasopharyngitis；Relationship

R739.63

A

1003—6350（2016）16—2618—03

2016-02-17)

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2016.16.013

陈顺金。E-mail：gdqyb77@163.com