脐带间充质干细胞移植治疗难治性系统性红斑狼疮患者的疗效分析

裘影影+何建强+汤郁+芮金兵+王燕茹+李晶

【摘要】 目的 探讨脐带间充质干细胞（MSCs）移植治疗难治性系统性红斑狼疮（SLE）的疗效及安全性。方法 18例难治性SLE患者， 均采用脐带MSCs移植治疗， 评价移植前后SLE患者的临床表现和实验室检查的变化。结果 脐带MSCs移植治疗1个月后SLE患者疾病活动指数（SLEDAI）为（10.8±5.2）分， 3个月时为（6.7±4.6）分， 6个月时为（4.7±3.8）分， 均显著低于治疗前的（13.2±5.0）分（P<0.01）；治疗3个月后24 h尿蛋白定量为（1089±818）mg/24 h， 治疗后6个月后为（750±632）mg/24 h， 显著低于治疗前的（1853±1187）mg/24 h（P<0.01）；所有患者均无移植相关并发症的发生。结论 MSCs移植治疗SLE安全有效， 远期疗效还需进一步观察。

【关键词】 系统性红斑狼疮；间充质干细胞；脐带；移植

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.25.039

系统性红斑狼疮是累及多器官、多系统的自身免疫性疾病， 主要以T、B淋巴细胞高度活化， 大量自身抗体产生为特点。间充质干细胞（mesenchymal stem cells）是一种多能干细胞， 具有多向分化潜能、高度自我更新和免疫调节等功能。近年来， 一些研究表明MSCs在治疗自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮[1]等取得了一定的疗效。本科在传统治疗基础上加用MSCs移植治疗难治性SLE， 取得了较好的疗效， 现将结果报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选择2014年3月～2015年9月于江苏大学附属医院风湿科进行MSCs移植的18例SLE患者， 其中女17例， 男1例， 年龄18～50岁， 平均年龄（29.9±8.3）岁， 所有患者均合并肾损害。本项目经江苏大学附属医院伦理委员会审查通过， 医院具有干细胞移植资质， MSCs移植前患者均签署知情同意书。入选标准：①年龄18～65岁， 性别不限；②经临床确诊的SLE病例；③诊断标准：符合美国风湿病学会（ACR）1997年推荐的SLE分类标准；④难治性SLE定义：SLE患者经糖皮质激素和免疫抑制剂规范治疗3个月， 病情仍未得到控制；⑤疾病处于活动期：SLEDAI：≥8分， 24 h尿蛋白定量≥0.5 g， 血细胞减少， 肺动脉高压（轻中度）， 心功能为1～2级， 抗磷脂抗体综合征， 狼疮性肺炎。排除标准：①有严重药物过敏史；②有恶性肿瘤者；③有较严重感染者；④心功能3～4级患者；⑤非疾病本身所致的肝功能异常者；⑥有认知功能障碍者和精神异常；⑦终末期肾功能不全者；⑧血清人类免疫缺陷病毒（HIV）和其他致病性病原学检查阳性者；⑨非疾病本身所致的凝血功能障碍者；⑩其他原因不能纳入本项研究者。

1. 2 方法

1. 2. 1 脐带MSCs的分离和培养方法 按常规方法培养[2]， 脐带MSCs由无锡博雅干细胞集团提供， 移植的脐带MSCs为P2～4代的细胞， 细胞活力均>92%， 病原微生物学检测均为阴性， 流式细胞仪鉴定MSCs表面标记CD105、CD73、CD90阳性率≥95%， 而CD14、CD34、CD45、CD79、HLA-DR等阳性率≤2%。

1. 2. 2 脐带MSCs细胞移植治疗方法 移植治疗当日制备脐带MSCs细胞悬液， 4℃运输保存。所有患者按1×106/kg直接静脉输注脐带MSCs， 移植治疗前及治疗后2 d静脉使用头孢美唑2.0 g（2次/d）， 治疗前15 min给予异丙嗪25 mg肌内注射。

1. 3 观察指标及疗效判定标准 18例SLE患者MSCs移植后1、3、6月时进行随访， 记录并比较移植前、后SLE患者的临床表现及实验室检查如血尿常规、肝肾功能、24 h尿蛋白定量、抗核抗体（ANA）、抗双链DNA（dsDNA）、血清补体水平、血沉、C反应蛋白（CRP）等指标， 并观察有无移植相关并发症的发生。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 疗效

2. 1. 1 移植前后疾病活动度变化 脐带MSCs移植治疗1个月后SLE患者SLEDAI为（10.8±5.2）分， 3个月时为（6.7±4.6）分， 6个月时为（4.7±3.8）分， 均显著低于治疗前的（13.2±5.0）分（P<0.01）。

2. 1. 2 移植前后24 h尿蛋白定量变化 SLE患者MSCs移植治疗3个月后24 h尿蛋白定量为（1089±818）mg， 治疗后6个月后为（750±632）mg/24 h， 显著低于治疗前的（1853± 1187）mg/24 h （P<0.01）。

2. 1. 3 移植前后血沉、CRP变化 MSCs移植后1、3、6个月， 患者血沉较移植前均明显下降（P<0.01）， MSCs移植后3、6个月患者CRP较移植前降低（P<0.05）。见表1。

2. 1. 4 移植前后血清肌酐变化 2例肾功能不全的患者， 1例患者在移植3个月后血清肌酐由原来的245 μmol/L下降至185.4 μmol/L， 6个月时血清肌酐降至165.7 μmol/L， 另1例患者经治疗后血清肌酐降低不明显。

2. 1. 5 移植前后血清补体及自身抗体变化 13例合并低补体血症患者移植后3个月血清补体C3为（0.68±0.16）g/L，

6个月时为（0.75±0.14）g/L， 均高于治疗前的（0.58±0.14）g/L （P<0.01）。1例患者经MSCs移植治疗6个月时ANA滴度经由1∶320降至1∶100， 3例患者经MSCs移植治疗6个月时ANA滴度由1∶1000降至1∶320， 11例抗体阳性患者dsDNA由移植前（476.3±257.0）IU/ml降至移植后3个月（350.8±224.6）IU/ml（10例， P<0.05）， 1例dsDNA抗体阳性的患者在移植后3个月转为阴性。

2. 1. 6 移植前后血液系统指标变化 5例合并血小板减少的患者在移植治疗6个月时血小板由移植前的（34.4±14.1）×109/L上升至（55.8±12.8）×109/L（P<0.01）。

2. 2 不良反应 所有患者在MSCs移植后均未出现明显不良反应。

3 讨论

由于SLE 不仅存在T、B 淋巴细胞的免疫异常， 还存在造血干细胞和MSCs异常， 因此有学者提出SLE是一种“干细胞病”。虽然目前造血干细胞移植治疗SLE取得了一定的疗效， 但由于其存在费用昂贵、风险高和严重的术后并发症等因素， 因而在临床上较难广泛推广。

MSCs具有显著的自我更新和多向分化的能力， 体内、外实验均证实了MSCs具有较强的免疫抑制的作用[3]。MSCs具有低免疫原性， 不需要经过严格配对使用， 可用于不同个体之间的移植。

本实验的结果发现， 难治性SLE患者尿蛋白在MSCs移植3个月后有明显下降， 在随访6个月内尿蛋白持续下降， 1 例合并肾功能不全的患者血清肌酐水平在给予脐带MSCs移植治疗后也有下降趋势， 这提示MSCs对SLE肾损伤可能有一定的修复作用。18 例难治性SLE 患者经脐带MSCs移植治疗后SLEDAI 明显下降， 同时伴有ANA、dsDNA、血沉、CRP降低和补体C3升高， 提示脐带MSCs移植治疗可以降低SLE患者的疾病活动度。5例合并血小板减少的患者， MSCs移植治疗后血小板均有不同程度的升高， 提示MSCs对SLE血液系统损伤有一定的治疗作用。所有患者均无明显的移植相关并发症的发生， 随访6个月SLE患者的临床症状无复发， 提示MSCs移植治疗难治性SLE患者安全有效， 远期疗效需要进一步的随访观察。

参考文献

[1] Wang D， Li J， Zhang Y， et al. Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation in active and refractory systemic lupus erythematosus： a multicenter clinical study. Arthritis Res Ther， 2014，16（2）：79.

[2] Lu LL， Liu YJ， Yang SG， et al. Isolation and characterization of human umbilical cord mesenchymal stem cells with hematopoiesis-supportive function and other potentials. Haematologica， 2006， 91（8）：1017-1026.

[3] De Miguel MP， Fuentes-Julián S， Blázquez-Martínez A， et al. Immunosuppressive properties of mesenchymal stem cells： advances and applications. Curr Mol Med， 2012，12（5）：574-591.

[收稿日期：2016-04-20]