重庆地区不同育龄围产期女性B族溶血性链球菌的研究

何建维，张　燕，陈　敏，袁　寅，范　超，李勤琴，邓少丽，陈　鸣，唱　凯

(第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科　400042)



·临床研究·

重庆地区不同育龄围产期女性B族溶血性链球菌的研究

何建维，张燕，陈敏，袁寅，范超，李勤琴，邓少丽，陈鸣，唱凯△

(第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科400042)

目的探讨该地区不同育龄女性围产期B族溶血性链球菌(GBS)感染情况。方法采用聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术，对该院2015年1月至2016年1月3 206例标本进行GBS 核酸检测。结果GBS阳性标本226例，阴性2 980例，感染率为7.05%，20～25岁组为6.88%，26～30岁组为6.51%，31～35岁组为7.50%，36～40岁组为11.46%，40岁以上组为11.11%，其中30～40岁组感染率最高。不同组别之间两两比较，差异无统计学意义(P>0.05)。该地区育龄女性与北京、南京、上海等地区比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论对该地区34～37周围产期女性开展GBS筛查，降低感染率，为围产期保健提供临床价值。

B族链球菌；围产期感染；实时荧光定量PCR

B 族溶血性链球菌(GBS)是导致围产期母婴感染的重要病原菌之一，占16%～61%。孕产妇感染GBS可引起早产、晚期流产、胎膜早破等，而新生儿感染可导致新生儿肺炎、脑膜炎、败血症等。为了解重庆地区不同育龄女性围产期GBS感染情况，现对该院3 206例正常孕妇进行分析。报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料2015年1月至2016年1月该院定期产检的孕产妇，年龄20～45岁，孕周34～37周，共计标本3 206例。

1.2仪器与试剂CFX-96实时荧光定量PCR仪(美国BIO-RAD公司)，ND-1000微量核酸蛋白测定仪(上海在途生物科技公司)，高速离心机(美国Beckman公司)。GBS DNA提取试剂和扩增试剂购自泰普生物科学(中国)有限公司。

1.3方法

1.3.1标本采集拭去外阴过多分泌物，将无菌拭子插入生殖低位1/3，轻轻旋转采取阴道分泌物，再用另一个拭子插入肛门，在肛门括约肌上2～3 cm处轻轻旋转取得直肠分泌物，将采集的标本置入无菌套管，密闭送检。室温下保存不应超过1 d，4～8 ℃保存不超过6 d。

1.3.2核酸提取向无菌套管加入1 mL清洗液，高速震荡2 min制成标本悬液，取出全部样品加入1.5 mL无菌离心管中，13 000 r/min离心5 min，弃上清液，加入1 mL清洗液充分震荡混匀，13 000 r/min离心5 min，弃上清液，加入50 mL清洗液充分震荡混匀，加入1管提取固形物，强力震荡5 min，加入10 μL内参照，95 ℃干浴2 min，立即冰浴2～5 mim，13 000 r/min离心1 min，留上清液作为模板用于PCR扩增。

1.3.3PCR扩增反应体系为44.3 μL PCR Mix反应液、0.5 μL Taq 酶(Taq DNA Polymerase)、0.2 μL UNG酶(UNG)，多个标本建议统一配制后再分装至PCR反应管。向PCR反应管中加入5 μL模板，盖紧盖子后瞬时离心上机。扩增程序：37 ℃ 2 min→94 ℃ 2 min,94 ℃ 20 s→55 ℃ 45 s(40个循环)。从第11个循环开始收集荧光信号。

1.4结果判读按照GBS核酸检测试剂盒说明书进行，GBS阴性：FAM CT值等于30或“No CT”，Texas Red(内参)CT值小于30，且有较好的对数增长曲线。GBS阳性：FAM CT值小于或等于23，且有较好的对数增长曲线，Texas Red(内参)CT值小于30，且有较好的对数增长曲线。见图1、2。

图1　　GBS阴性PCR扩增曲线

图2　　GBS阳性PCR扩增曲线

1.5统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行数据分析，组间比较使用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1各组 GBS检测结果比较3 206例标本检出阴性2 980例，阳性226例，感染率为7.05%。20～25岁组567例检出阳性39例，感染率为6.88%；26～30岁组1 797例检出阳性117例，感染率为6.51%；31～35岁组667例检出阳性50例，感染率为7.50%；36～40岁组157例检出阳性18例，感染率为11.46%；40～45岁组18例检出阳性2例，感染率为11.11%。其中36～40岁组感染率最高，为11.46%。各组之间两两比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2不同地区GBS感染率结果比较选取北京[1]、上海[2]、南京[3]、中山[4]、桂林[5]等5个地区进行比较，重庆地区女性与中山、桂林地区比较，差异无统计学意义(P>0.05)，与北京、上海、南京等地区比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　　各地区围产期女性GBS感染率结果比较

3　讨　　论

GBS在健康者的感染率可达 15%～35%，妊娠女性感染率大约为 10%～30% ，被西方国家列为围产期感染的首要病原菌之一[6]。以往认为 GBS 感染情况远不如西方国家严重，病死率低于国外报道[7]。但近年来寄生于阴道的GBS上行感染至宫腔造成孕产妇严重感染及胎儿、新生儿病死。因此，明确重庆地区不同育龄围产期女性GBS感染情况对围产期保健指导和优生优育具有重要意义。

GBS为兼性厌氧的革兰阳性B溶血性链球菌，属于条件致病菌，是围产期母婴感染的主要病原菌之一，可引起胎膜早破、羊膜腔感染、早产、产褥感染、新生儿肺炎、脑膜炎、败血症等[8]。目前我国还未将GBS作为围产期女性常规检查，但美国约90%的妊娠35～37 周的孕妇已开展GBS 筛查[9]。GBS检测方法主要是传统的细菌培养和荧光PCR方法，细菌培养一般24～48 h才能报告，并受多种因素影响，阳性检出率不高。荧光PCR是一种快速检测方法(2～4 h)，且具有较高的敏感性和特异性[10]。

我国对围产期GBS的筛检尚未建立统一标准，且面临着阳性检出率偏低和耐药菌株增加的问题。抗菌药物滥用，导致GBS耐药菌株增多，给GBS感染的预防性治疗带来新的挑战。广州地区1999年分离的GBS菌株对红霉素和林可霉素耐药率分别达到45%和26%。

GBS感染率随人种、地区、年龄不同而有差异[11]。重庆地区20～25岁组感染率为6.88%，26～30岁组感染率为6.51%，31～35岁组感染率为7.50%，36～40岁组感染率为11.46%，40～45岁组感染率为11.11%。不同育龄围产期女性GBS感染率均大于5%，所以应对重庆地区妊娠晚期女性开展GBS筛查，对阳性结果给予预防性治疗，降低GBS感染率。GBS检出率受多种因素影响，如地区差异、人群构成、采样时间和部位、个人卫生条件等。采样时同时采取阴道拭子和肛门拭子，可提高GBS的阳性检出率。

[1]马延敏，吴连方，黄醒华．孕妇B族溶血性链球菌带菌与母婴预后的关系[J]．中华妇产科杂志，2000，35(1)：32-35．

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[3]季修庆，陆根生，胡平，等．荧光定量PCR检测南京地区孕晚期妇女生殖道B族链球菌的带菌情况[J]．检验医学，2014，29(6)：628-630．

[4]黄晓玲，何艳君，林云霞．中山市妊娠晚期妇女B族链球菌带菌情况调查[J]．实用医学杂志，2015，31(17)：2905-2906．

[5]何国才，白清，李高，等．桂林地区孕晚期孕妇B族链球菌检测及药敏分析[J]．国际检验医学杂志，2013，34(15)：2006-2007．

[6]Smith C．Academy of American Pediatrics.Committee on infectious diseases and committee on fetus and newborn,revised guidelinds for prevention of early-onset group B Streptococcal(GBS)infection[J].Pediatrics，1994，99(3)：51-52．

[7]Edmond KM,Kortsalioudaki C,Scott S,et al.Group B streptococcal disease in infants aged younger than 3 months:systematic review and meta-analysis[J].Lancet,2012,379(9815):547-556.

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[9]王静，刘杰，王淑贞，等．徐州地区妊娠晚期妇女感染B群链球菌的筛检情况及药物敏感性分析[J]．国际检验医学杂志，2015，36(20)：2963-2964．

[10]仝净净，姚开虎，杨永弘．新生儿B族链球菌感染预防策略的研究进展[J]．中国当代儿科杂志，2014，16(10)：1075-1080．

[11]张丽华，杨维青，张丽，等．广东东莞地区2009～2014年围产期孕妇B群链球菌的分离与耐药性分析[J]．中国感染与化疗杂志，2015，15(6)：575-578．

，E-mail:changaki0203@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.058

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1673-4130(2016)19-2784-03

2016-02-22

2016-06-17)