MMP-13在骨性关节炎滑膜组织中的表达分析

包　刚，刘　永，刘亚丽，常　虹,刘　莹

(1.吉林油田总医院 骨一科，吉林 松原138000；2.吉林大学中日联谊医院 放射治疗科)



MMP-13在骨性关节炎滑膜组织中的表达分析

包刚1，刘永1，刘亚丽1，常虹1,刘莹2*

(1.吉林油田总医院 骨一科，吉林 松原138000；2.吉林大学中日联谊医院 放射治疗科)

骨性关节炎(OA)为临床中常见的一种非炎性、退行性、渐进性、慢性关节病变[1]。目前，骨性关节炎的发病机制还尚未明确。本文主要探讨OA患者滑膜组织中MMP-13表达情况及意义。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取34例2014年3月-2015年5月在本院接受诊治的OA患者为观察组。男性10例，女性24例；年龄：19-70岁，平均(54.34±3.43)岁。选取同期在本院骨科接受治疗的34例非OA患者作为对照组。男16例，女18例；年龄：20-70岁，平均(52.17±2.65)岁。在性别、年龄等一般资料比较上，2组患者无显著性差异(P>0.05)。所有入选患者均在接受手术治疗过程中获取滑膜标本作为本次研究检测对象。

1.2仪器及方法

北京中杉金桥生物技术有限公司生产的一抗MMP-13及相关试剂盒，由Dako公司生产的Envision试剂盒等，严格按照试剂盒具体说明实施相关操作。具体操作步骤表现如下：收集患者接受关节置换、膝关节镜、截肢手术等，从髌上囊位置切除下来的滑膜组织。在术后60 min之内，使用生理盐水对标本进行3次反复冲洗，然后迅速取1/2的标本放置于液氮罐中，待实施Western blot蛋白提取操作时使用。使用浓度为10%的福尔马林对另外1/2标本进行固定，再石蜡将其包埋，然后实施连续4 μm 切片。选用Envision法实施免疫组化染色，MMP-13一抗浓度设置为1∶100，实施抗原经高压修复。按照试剂盒说明严格执行Western blot实验具体操作。

1.3结果判断

阴性(-)：阳性细胞数≤10%；弱阳性(+)：11%≤阳性细胞数≤25%；阳性：25%<阳性细胞数<50%；强阳性(+++)：阳性细胞数≥50%。仅存在均匀或片状黄染，或者未见颗粒者均视为阴性。

1.4统计学方法

研究结果通过SPSS20.0统计软件进行统计学分析，计量资料行t检验，计数资料行χ2分析处理，以P<0.05表示差异比较存在显著性。

2　结果

在Western blot实验结果方面：MMP-13蛋白在对照组滑膜组织中的相对表达量为0.263±0.431，在观察组中的相对表达量为1.064±0.231，观察组显著高于对照组(P<0.05)，见表1。在免疫组化染色检测方面：在对照组患者的滑膜组织仅见少部分MMP-13蛋白表现为阳性表达，观察组患者滑膜组织中MMP-13蛋白阳性表达率明显高于对照组，差异比较有统计学意义(P<0.05)，见图1-4。

表1　2组患者MMP-13表达情况

注：与对照组比较，*P<0.05。

图1对照组MMP-13表达

图2观察组MMP-13在胞浆中表达

图3观察组MMP-13在浆细胞胞浆中表达

图4观察组MMP-13在细胞间质中表达

3　讨论

有报道指出，MMPs参与OA病理过程中，关键酶主要为基质降解素(MMP-3)和明胶酶3(MMP-13)。MMP-13的作用主要是将胶原分子中所存在的三维螺旋结构进行分解，其对Ⅱ型胶原蛋白的降解尤为突出[2]。由此可推测，在OA的发生及进展过程中，MMP-13可直接降解软骨基质，同时，在OA病理机制中某种蛋白通道的激活中也有可能与MMP-13存在密切相关性[3]。本次研究结果显示，在OA患者的滑膜组织中存在MMP-13蛋白强阳性表达，其阳性率显著高于非OA患者。Western blot操作结果显示，MMP-13蛋白在OA患者中的表达量表现为明显增高，与非OA患者表达量比较存在显著性差异。研究显示，MMP-13蛋白、MMP-3蛋白在OA患者滑膜组织中均表现为显著高表达，Pearson相关分析，MMP-13蛋白与MMP-3蛋白的表达为正相关[4]。

[1]赏后来,郭亭,赵建宁.骨性关节炎实验室诊断指标的意义及研究进展[J].医学研究生学报,2012,25(02)：204.

[2]张明,刘立宏,郭文娟,等.实时荧光定量PCR检测骨性关节炎病人膝关节液中miR-140的表达[J].中南大学学报(医学版),2012,37(12):1210.

[3]刘扬.白细胞介素-24基因在膝关节骨性关节炎发病中的作用及意义[J].中国现代医学杂志,2016,26(13): 63.

[4]贺占坤,沈杰威.MMP-2、MMP-3、MMP-9和TIMP-1评价膝关节骨性关节炎的临床研究[J].重庆医学,2013,42(32): 3872.

1007-4287(2016)09-1548-02

2015-09-22)