灰毡毛忍冬花蕾正丁醇部位化学成分的研究*

肖世基，甘佳玉，张茂生

(遵义医学院 药物化学教研室，贵州 遵义　563099)



基础医学研究

灰毡毛忍冬花蕾正丁醇部位化学成分的研究*

肖世基，甘佳玉，张茂生

(遵义医学院 药物化学教研室，贵州 遵义563099)

目的 研究灰毡毛忍冬花蕾正丁醇部位化学成分。方法 采用硅胶柱色谱及制备液相色谱等分离方法进行分离纯化, 经核磁共振等波谱技术进行化合物结构鉴定。结果 从灰毡毛忍冬花蕾正丁醇部位中分离得到6个化合物, 分别鉴定为原儿茶醛(1)、咖啡酸丁酯(2)、3-O-咖啡酰奎尼酸丁酯(3)、3,5-O-双咖啡酰基奎尼酸甲酯(4)、3,4-O-双咖啡酰基奎尼酸甲酯(5)、β-谷甾醇(6)。结论 化合物1和2为首次从灰毡毛忍冬中分离得到。

灰毡毛忍冬; 忍冬科; 酚酸; 化学成分

灰毡毛忍冬 (LoniceramacranthodesHand-Mazz.) 为忍冬科 (Caprifoliaceae)忍冬属木质藤本植物, 以花入药, 主产地湖南和贵州省, 有“大银花”“岩银花”“山银花”“木银花”等名称[1]。《中国中药资源志要》记载灰毡毛忍冬花蕾甘、凉, 清热解毒, 宣散风热, 产地作“金银花”入药[2]。而2015年版《中华人民共和国药典》将来源于灰毡毛忍冬、红腺忍冬(LonicerahypoglaucaMiq)、华南忍冬(LoniceraconfuseDC.)或黄褐毛忍冬(LonicerafulvotnetosaHsu et S. C. Cheng)干燥花蕾或带初开

的花统称为“山银花”, 来源于忍冬(LonicerajaponicaThunb.)干燥花蕾或带初开的花称为“金银花”, 以示区分[3]。灰毡毛忍冬化学成分研究表明其主要含酚酸、黄酮苷和皂苷类化合物[4-8]。为了阐明黔产灰毡毛忍冬的化学成分, 为贵州道地药材的利用奠定物质基础, 为“山银花”合理用药提供科学依据, 我们进一步对采自贵州省遵义市的灰毡毛忍冬花蕾进行了研究, 从其正丁醇部位中分离得到6个化合物(见图1)。

1　材料与方法

1.1仪器与材料Agilent DD2 400-MR型核磁共振仪, TMS为内标 (美国Agilent公司); Sepacore中压制备系统(瑞士BüCHI公司); LC3000型高效液相色谱仪(中国北京创新通恒公司); C18, 5 μm, 10 × 250 mm半制备HPLC柱(日本YMC公司); 反相C18填料(ODS)(日本富士硅化学株式会社); 薄层色谱硅胶GF 254 和柱色谱硅胶(300～400目) (中国青岛海洋化工公司)。

灰毡毛忍冬花蕾于2013年9月购自遵义市绥阳县小关乡小关村, 由遵义医学院生药学教研室杨建文教授鉴定为灰毡毛忍冬(LoniceramacranthodesHand-Mazz.)花蕾, 样品标本(No.20130910)保存在遵义医学院天然药物化学实验室。

1.2提取分离灰毡毛忍冬花蕾干重20 kg,粉碎后用95%乙醇回流(90 ℃)提取3次, 每次3 h, 减压浓缩提取液得乙醇提物约3.8 kg, 将其分散于水中, 依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。减压浓缩萃取物得正丁醇部位约1.5 kg。取正丁醇部位浸膏900 g经乙酸乙酯浸泡提取浓缩提取物得到乙酸乙酯可溶物约50 g, 经中压硅胶柱色谱(90×460 mm, 氯仿-甲醇梯度洗脱)分为12个部分(Fr.1～12)。第1部分(Fr.1)有白色晶体析出, 重结晶得到化合物6; 第2部分(Fr.2)经ODS柱色谱(36×460 mm, 甲醇:水, 30:70→80:20,V/V)分离为6个部分(Fr.2.1～6); Fr.2.1经半制备HPLC分离(C18, 甲醇:水, 40:60,V/V, 3 mL/min)得到化合物3(12 mg,tR=10.0 min), Fr.2.4经半制备HPLC分离(C18, 乙腈:水, 30:70,V/V, 4 mL/min)得到化合物5(9 mg,tR=11.5 min), Fr.2.6经半制备HPLC分离(C18, 甲醇:水, 40:50,V/V, 3 mL/min)得到化合物4(40 mg,tR=12.2 min); 第3部分(Fr.3)经半制备HPLC分离(C18, 甲醇:水, 75:25,V/V, 3 mL/min)得到化合物2(10 mg,tR=8.1 min); 第四部分(Fr.4)经半制备HPLC分离(C18, 甲醇:水, 80:20,V/V, 3 mL/min)得到化合物1(17 mg,tR=13.5 min)。

2　结果

我们对采自贵州省遵义市的灰毡毛忍冬花蕾进行了研究, 从其乙醇提取物正丁醇部位中分离得到6个化合物(见图1), 分别鉴定为：原儿茶醛(1)、 咖啡酸丁酯(2)、3-O-咖啡酰奎尼酸丁酯(3)、3,5-O-双咖啡酰基奎尼酸甲酯(4)、3,4-O-双咖啡酰基奎尼酸甲酯(5)和β-谷甾醇(6)。

图1　从灰毡毛忍冬花蕾中分离得到的化合物结构图

化合物1：浅红色胶状物,1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 9.68 (1H, s, H-7), 7.29 (2H, m, H-2, 6), 6.90 (1H, d,J=6.0 Hz, H-5)。上述波谱数据与文献[9]报道的一致, 鉴定化合物1为原儿茶醛。

化合物2：浅黄色粉末,1H-NMR (400 MHz, CD3COCD3)δ: 7.54 (1H, d,J=15.9 Hz, H-7), 7.16 (1H, br. s, H-2), 7.04 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5), 6.86 (1H, br. d,J=8.0 Hz, H-6), 6.28 (1H, d,J=15.9 Hz, H-8), 4.14 (2H, t,J=6.6 Hz, H-1′), 1.65 (2H, m, H-2′), 1.41 (2H, m, H-3′), 0.94 (3H, t,J=7.4 Hz, H-4′)。上述波谱数据与文献[10]报道的一致, 鉴定化合物2为咖啡酸丁酯。

化合物3：棕色胶状物,1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.38 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-7′), 7.00 (1H, br. s, H-2′), 6.94 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.74 (1H, d,J=8.0 Hz, H-6′), 6.08 (1H, d,J=15.9 Hz, H-8′), 5.01 (1H, m, H-3), 3.85 ～ 4.00 (3H, m, H-4, 8), 3.57 (1H, m, H-5), 2.09 (2H, m, H-2, 6), 1.91 (1H, br. d,J=13.0 Hz, H-2), 1.75 (1H, br. t,J=11.2 Hz, H-6), 1.47 (2H, m, H-9), 1.23 (2H, m, H-10), 0.79 (3H, t,J=7.4 Hz, H-11)。13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 73.1 (C-1), 37.2 (C-2), 66.9 (C-3), 69.3 (C-4), 71.0 (C-5), 35.1 (C-6), 173.2 (C-7), 64.1 (C-8), 30.0 (C-9), 18.5 (C-10), 13.5 (C-11), 125.1 (C-1′), 114.6 (C-2′), 145.8 (C-3′), 145.2 (C-4′), 115.8 (C-5′), 121.4 (C-6′), 149.0 (C-7′), 113.6 (C-8′), 165.4 (C-9′)。上述波谱数据与文献[11]报道一致, 鉴定化合物3为3-O-咖啡酰奎尼酸丁酯。

化合物4：浅黄色胶状物,1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.62 (1H, d,J=15.8 Hz, H-7′), 7.55 (1H, d,J=15.6 Hz, H-7′′), 7.07 (2H, br. s, H-2′, 2′′), 6.96 (2H, m, H-5′, 5′′), 6.79 (2H, m, H-6′, 6′′), 6.34 (1H, d,J=15.8 Hz, H-8′), 6.22 (1H, d,J=15.6 Hz, H-8′′), 5.40 (1H, br. s, H-3), 5.33 (1H, br. s, H-4), 4.00 (1H, br. s, H-5), 3.65 (3H, s, OCH3), 2.32 (2H, m, Heq-2, 6), 2.14 (2H, m, Hax-2, 6)。13C-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 74.8 (C-1), 36.9 (C-2), 69.9 (C-3), 72.1 (C-4), 72.3 (C-5), 35.8 (C-6), 175.7 (C-7), 127.9 (C-1′), 127.7 (C-1′′), 115.5 (C-2′), 115.2 (C-2′′), 146.9 (C-3′), 146.8 (C-3′′), 149.8 (C-4′), 149.6 (C-4′′), 116.7 (C-5), 116.6 (C-5′′), 123.2 (C-6′), 123.2 (C-6′′), 147.6 (C-7′), 147.3 (C-7′′), 115.2 (C-8′), 114.9 (C-8′′), 168.9 (C-9′), 168.1 (C-9′′), 53.2 (OCH3)。上述波谱数据与文献[12]报道一致, 鉴定化合物4为3,5-O-双咖啡酰基奎尼酸甲酯即灰毡毛忍冬素G。

化合物5：浅黄色胶状物,1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.50 (1H, d,J=15.8 Hz, H-7′), 7.41 (1H, d,J=15.6 Hz, H-7′′), 7.03 (2H, br. s, H-2′, 2′′), 6.98 (2H, m, H-5′, 5′′), 6.75 (2H, m, H-6′, 6′′), 6.26 (1H, d,J=15.8 Hz, H-8′), 6.12 (1H, d,J=15.6 Hz, H-8′′), 5.27 (1H, m, H-3), 4.97 (1H, dd,J= 6.4, 2.8 Hz, H-4), 4.16 (1H, m, H-5), 3.59 (3H, s, OCH3), 2.24 (2H, m, Heq-2, 6), 1.98 (2H, m, Hax-2, 6)。13C-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 73.2 (C-1), 37.7 (C-2), 67.8 (C-3), 72.5 (C-4), 65.3 (C-5), 36.1 (C-6), 173.4 (C-7), 125.2 (C-1′), 125.0 (C-1′′), 114.8 (C-2′), 114.7 (C-2′′), 145.9 (C-3′), 145.8 (C-3′′), 148.9 (C-4′), 148.8 (C-4′′), 115.9 (C-5), 115.9 (C-5′′), 121.6 (C-6′), 121.5 (C-6′′), 145.7 (C-7′), 145.7 (C-7′′), 113.8 (C-8′), 113.2 (C-8′′), 166.0 (C-9′), 165.3 (C-9′′), 52.1 (OCH3)。上述波谱数据与文献[13]报道一致, 鉴定化合物5为3,4-O-双咖啡酰基奎尼酸甲酯即灰毡毛忍冬素F。

化合物6：白色针状物, 和β-谷甾醇标准品对照, 不同溶剂体系Rf值一致, 鉴定化合物6为β-谷甾醇。

3　讨论

酚酸是天然产物中一类重要的化合物, 其普遍存在于药用植物中, 活性也很广泛。本研究从灰毡毛忍冬花蕾中分离得到6个化合物, 其中有5个为酚酸类衍生物, 进一步佐证酚酸类衍生物是灰毡毛忍冬的主要成分。本研究为灰毡毛忍冬花蕾即“山银花”用药提供了科学依据, 也进一步丰富了其物质基础研究。

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[收稿2016-06-02;修回2016-07-11]

(编辑：王静)

Study on the chemical constituents ofn-butanol fraction ofLoniceramacranthoidesbuds

XiaoShiji,GanJiayu,ZhangMaosheng

(Department of Pharmaceutical Chemistry, Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099, China)

Objective To investigate the chemical constituents ofn-butanol fraction fromLoniceramacranthoidesbuds.Methods The structures of chemical constituents, isolated and purified by silica gel column chromatographic and preparative HPLC technologies fromLoniceramacranthoidesbuds, were elucidated by NMR spectrum.Results Six isolated compounds were identified as protocatechuic aldehyde (1), caffeic acidn-butyl ester (2), 3-O-caffeoyl quinic acid butyl este (3), 3,5-di-O-caffeoyl quinic acid methyl ester (4), 3,4-di-O-caffeoyl quinic acid methyl ester (5),β-sitosterol (6).Conclusion Compounds 1 and 2 were firstly isolated fromLoniceramacranthoidesbuds.

Loniceramacranthoides; Caprifoliaceae; phenolic acid; chemical constituent

国家自然科学基金资助项目 (NO:31560102)；贵州省教育厅自然科学研究资助项目 (NO:黔教合KY字 [2015] 362)；贵州省科技厅中药现代化资助项目 (NO:黔科合ZY字[2012]3014)；遵义医学院学科建设经费资助；遵义医学院博士启动基金资助项目 (NO:F-698)。

R284.1

A

1000-2715(2016)04-0350-03