肾癌组织中线粒体融合蛋白2基因的表达及临床意义

甘妙平，李剑峰，郑燕深

(惠州市中心人民医院泌尿外科，广东惠州　516001)



·临床研究·

肾癌组织中线粒体融合蛋白2基因的表达及临床意义

甘妙平，李剑峰，郑燕深

(惠州市中心人民医院泌尿外科，广东惠州516001)

目的检测肾细胞癌线粒体融合蛋白-2(Mfn2)基因表达的变化，探讨其相关的临床意义。方法选取我院2014年2月至2016年1月收治的肾细胞癌患者74例，另取同期我院肾小球活检排除肾癌者30例作为对照组。Mfn2基因表达量使用荧光定量PCR检测。结果Mfn2在肾癌组织中表达量为0.182±0.031，显著低于对照肾组织的0.325±0.047(P<0.01)。肾癌组织中男女性别、不同年龄以及肿瘤病理类型之间Mfn2表达量无显著性差异(P>0.05)。Ⅲ、Ⅳ临床分期患者Mfn2表达量为0.146±0.029，显著低于Ⅰ、Ⅱ临床分期患者的0.212±0.038(P<0.05)。肿瘤有淋巴结转移患者Mfn2表达量为0.151±0.024，显著低于无淋巴结转移患者的0.228±0.042(P<0.05)。肿瘤中、低分化患者Mfn2表达量为0.154±0.028，显著低于高分化患者的0.231±0.051(P<0.05)。结论Mfn2基因在肾癌组织中低表达，Mfn2基因表达量与肾癌的临床分期、有无淋巴结转移以及肿瘤分化程度密切相关。

肾癌；线粒体融合蛋白-2基因；荧光定量PCR

肾细胞癌是泌尿系统见的恶性肿瘤，肾脏位置隐蔽，患者就诊时往往已经发展到中、晚期，错过了最佳治疗时间，肿瘤分子标志物对肿瘤的早期诊断具有潜在的应用价值，越来越多的肿瘤标记物研究倍受关注[1]。线粒体融合蛋白-2(mitofusion2，Mfn2)是定位于线粒体外膜上的跨膜三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate， GTP) 酶类蛋白，主要介导线粒体融合[2]，还参与细胞的能量代谢、信号转导、增殖及凋亡等细胞生物学过程，并且对多种肿瘤细胞都具有抗增殖和诱导凋亡的作用[3]。本研究检测了肾细胞癌Mfn2基因表达的变化，探讨相关的临床意义。

1　资料与方法

1.1临床资料选取我院2014年2月至2016年1月收治的肾细胞癌患者74例，所有病例均经病理证实，排除标准：接受过放疗、化疗或其他肿瘤相关治疗者，伴发其它脏器肿瘤者。其中男48例，女26例；年龄36～74岁，平均(58.7±11.2)岁；病理类型为肾透明细胞癌53例，乳头状肾细胞癌21例；TMN分期：T1期16例、T2期25例、T3期18例、T4期15例；有淋巴结转移44例，无淋巴结转移30例；高分化肿瘤27例，中、低分化肿瘤47例。另取同期我院肾小球活检排除肾癌者30例作为对照组，其中男19例，女11例；年龄33～71岁，平均(57.3±11.1)岁。肾癌组和对照组在性别、年龄方面统计学无显著性差异，具有可比性(P>0.05)。

1.2主要试剂和仪器RNA(ribonucleicacid)提取试剂盒购自大连宝生物公司，聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)、反转录试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司， SYBR Green 荧光定量-PCR试剂盒购自深圳华大基因有限公司，Nucleostemin基因引物由上海金斯瑞公司合成，Mfn2基因引物序列为5’- GTTAAGGCCGCTAAGGCCTTAAGCG-3’(上游)和5’- AGTCGGTTTAAAGCTGCCGCCGGT-3’(下游)。PCR仪和荧光定量PCR仪为美国罗氏公司生产。

1.3Mfn2基因表达的检测荧光定量PCR检测Mfn2基因的表达，取50 mg肾脏组织，超声组织匀浆，按照RNA提取试剂盒和反转录试剂盒说明书提取组织细胞总RNA和反转录出cDNA第一条链，按照荧光定量-PCR试剂盒说明书，加入PCR反应MIX、引物和SYBR Green等建立反应体系，94℃变性4 min，然后进行30个PCR循环：94 ℃ 30 s，62 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，最后72℃ 5 min。参照内对照基因，利用软件计算目的基因的相对表达量，Mfn2基因的相对表达量用(2-ΔCt)表示。

1.4统计学方法采用SPSS13.0软件进行分析，两组样本均数比较采用t检验，计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1Mfn2表达量的变化与肾癌的临床、病理参数的关系肾癌组织中不同性别、年龄以及肿瘤病理类型之间Mfn2表达量无显著性差异(P>0.05)。Ⅲ、Ⅳ临床分期患者Mfn2表达量显著低于Ⅰ、Ⅱ临床分期患者。肿瘤有淋巴结转移患者Mfn2表达量显著低于无淋巴结转移患者。肿瘤中、低分化患者Mfn2表达量显著低于高分化患者(P<0.05,表1)。

表1　不同临床类型肾癌组织中Mfn2表达量的变化±s)

2.2Mfn2在肾癌组织中的表达Mfn2在肾癌组织中表达量显著低于对照组(P<0.01，表2)。

表2　Mfn2在肾癌和肾组织中表达量的比较±s)

3　讨　论

与众多肿瘤相似，近年我国肾细胞癌的发病率正在逐年上升[4]，探讨肾癌的发病原因和机制对于患者早期诊断、临床治疗和随访具有潜在的应用价值。恶性肿瘤的发生、发展过程涉及到多种基因的失活或激活，这些异常的基因表达往往早于影像学的异常，可以成为一些肿瘤分子标志物[5]。Mfn2是一种高度保守的跨膜 GTP 酶类，广泛表达于心、肾、骨骼肌、肝、脑等组织器官，尤以心、肾和脑最为丰富[6]，近年来的研究发现其与肿瘤细胞的增值和凋亡关系密切，例如Mfn2可结合Ras蛋白，失活下游的Raf和 ERK1/2；降低 Rb 磷酸化水平使细胞周期停滞于 G0/G1 期；促进细胞色素 c、细胞凋亡诱导因子等多种凋亡相关蛋白的释放[7]。肖海涛等[8]使用甲基硒酸升高Mfn2基因表达后，发现可以显著抑制肾癌细胞的生长，在本研究中，Mfn2基因在肾癌患者中的表达量显著低于对照非肾癌组织标本，上述结果提示了Mfn2基因的低表达可能参与了肾癌的发生、发展过程。

肿瘤的恶性进展、侵袭和转移也是一个复杂、多因素参与的过程，白云等[9]在膀胱癌的研究中发现Mfn2基因低表达调节了肿瘤的恶性进展，与肿瘤的分化和临床分期密切相关，本研究在肾癌组织的检测也观察到了Mfn2基因表达量在临床Ⅲ、Ⅳ期患者显著低于Ⅰ、Ⅱ期患者，提示了Mfn2基因表达量的检测可用于肾癌患者的预后评估。比较Mfn2基因表达量在肾癌分级中的差异发现，Mfn2基因表达量在中、低分化患者显著低于高分化患者，提示了Mfn2基因低表达或失活会促进肾癌细胞的恶性表形。另外在肾癌组织的检测中也观察到了Mfn2基因表达量在有淋巴结转移的患者中显著低于无淋巴结转移的患者，提示了Mfn2基因表达下调参与了肾癌的侵袭和转移。

综上所述，本研究显示Mfn2基因在肾癌组织中低表达，Mfn2基因表达量与肾癌的临床分期、有无淋巴结转移以及肿瘤分化程度密切相关，Mfn2基因表达量的检测有可能成为肾癌临床分级、预后评估以及基因靶向治疗的新分子标记物。

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(编辑何宏灵)

Expression and clinical significance of Mitofusion 2 mRNA in renal cell carcinoma

GAN Miao-ping, LI Jian-feng, ZHENG Yan-shen

(Department of Urology, People’s Central Hospital of Huizhou, Huizhou 516001,China)

ObjectiveTo detect mitofusion 2 (Mfn2) mRNA expression in renal cell carcinoma (RCC) and to explore its clinical significance. MethodsA total of 74 RCC cases and another 30 non-RCC controls were enrolled in this study. Real-time PCR was used to detect Mfn2 mRNA expression. ResultsMfn2 mRNA expression was 0.182±0.031vs. 0.325±0.047 in RCC cases and controls (P<0.01). There were no statistical differences in Mfn2 mRNA expression between RCC patients of different gender, age, and pathological type (P>0.05). Mfn2 mRNA expression was 0.146±0.029 in Ⅲ and Ⅳ stage and 0.212±0.038 in I and II stage (P<0.05). Mfn2 mRNA expression was 0.151±0.024vs. 0.228±0.042 in lymph node metastasis group and non-lymph node metastasis group (P<0.05). Mfn2 mRNA expression was 0.154±0.028vs. 0.231±0.051 in median and low differentiation group, and well differentiation group (P<0.05). ConclusionLow expression of Mfn2 mRNA was detected in RCC, which was closely related to clinical stage, lymph node metastasis, and tumor differentiation.

renal cell carcinoma; Mfn2 mRNA; real-time PCR

2016-05-04

2016-05-25

甘妙平(1983-)，男(汉族)，大学本科，主治医师.研究方向：泌尿肿瘤的防治.E-mail：wangmingqiang2003@163.com

R737.11

A

10.3969/j.issn.1009-8291.2016.09.005