康胰汤治疗急性胰腺炎大鼠模型的效果

王绥能　龙育儒　曹小恒　王　菁　赵国栋　梁贤文

(海口市人民医院普外三科，海南　海口　570208)



康胰汤治疗急性胰腺炎大鼠模型的效果

王绥能龙育儒1曹小恒1王菁1赵国栋梁贤文

(海口市人民医院普外三科，海南海口570208)

目的观察康胰汤(KYT)对大鼠急性胰腺炎的治疗作用。方法选用SD大鼠，经胆胰管逆行加压注射4.5%牛磺胆酸钠复制急性胰腺炎动物模型；化学比色法测血清淀粉酶活性；快速比浊法测血清脂肪酶活性；湿棉球减干棉球重量测腹水量，并观察大鼠6 h存活情况；显微镜观察胰腺组织病理学改变，并进行胰腺炎组织学评分。结果400 mg生药/kg和800 mg生药/kg的康胰汤使大鼠存活率由66.67%分别升至75.00%和91.67%；腹水量由(4.1±0.83)g分别降至(2.7±0.66)g和(2.0±0.37)g；血清淀粉酶由(450.8±81.25)U/dl分别降至(322.1±64.08)U/dl和(203.2±55.47)U/dl；血清脂肪酶由(625.6±105.24)IU分别降至(179.8±47.01)IU和(148.1±31.35)IU；与胰腺炎模型组比较均有显著差异(P<0.05)。光镜下可见康胰汤治疗组胰腺水肿及炎性反应均明显减轻。结论康胰汤对大鼠急性胰腺炎具有较好治疗作用。

康胰汤；急性胰腺炎

急性胰腺炎(AP)的发生和发展是由各种炎症介质、氧自由基、胰腺泡细胞内钙超负荷等多因素共同作用的结果〔1～4〕。目前治疗AP的中药制剂不少〔5～8〕，但临床疗效显著的不多，而且其确切作用机制也未能完全明确。康胰汤是我院使用多年治疗AP的复方中药方剂，疗效非常显著〔9〕。该方剂主要组成：柴胡、黄岑、白芍、赤芍、郁金、木香、桃仁、金钱草、金银花、蒲公英、炒莱菔子、大黄和芒硝等，但它的作用机制也一直没有得到阐述。本研究拟观察康胰汤治疗AP大鼠的疗效。

1　材料与方法

1.1实验动物雄性SD大鼠，体重(265±15)g，购自广州第一军医大学实验动物中心。自购买之日起饲养于温度(25.0±3.24)℃、相对湿度为(81.5 ±5.85)%的室内条件下，光照周期光∶暗为1∶1。

1.2药品与试剂康胰汤方剂的药材购自海口市人民医院药房，常规煎制，并经旋转蒸发仪(德国Band公司产品)浓缩至1 g生药/ml备用，灌胃时用生理盐水配成不同浓度，每只大鼠灌胃5 ml；4.5%牛磺胆酸钠(Sigma公司产品)；血清淀粉酶和脂肪酶试剂盒购于南京建成生物有限公司。

1.3实验方法

1.3.1动物分组与模型制备使用雄性SD大鼠制备实验所需动物模型。将小鼠随机分为假手术组、模型组(AP组)、维拉帕米1 mg/kg鼠重组、400 mg生药/kg鼠重康胰汤组和800 mg生药/kg鼠重康胰汤组，每组12只。康胰汤组动物每天灌胃不同剂量的康胰汤，其他组灌胃等体积生理盐水，连续1 w。手术前大鼠禁食12 h，自由饮水，1%戊巴比妥钠(3 ml/kg鼠重) 腹腔注射麻醉，常规消毒，参照Aho等〔10〕的方法复制大鼠AP模型：取上腹部正中切口，逐层切开腹壁进入腹腔，在近肝门处分离出胰胆管，用血管夹夹闭胆管，在十二指肠乳头对侧用4.5号注射器针头穿透肠壁，刺入胰管，以恒定的速度(0.2 ml/min)缓慢注入牛磺胆酸钠(按1 kg小鼠注入1.5 ml计算)，注射完后留针3 min，放开血管夹，检查术野无出血，逐层缝合腹壁各层后。将大鼠置于通风处。假手术组同样方法开腹，翻动胃和十二指肠后关腹，置于相同环境。

1.3.2观察指标记录各组大鼠6 h存活情况，并计算存活率；存活大鼠于术后6 h剖腹，用准备好的干棉球置于腹腔内将腹水吸干并称重，随后烤干称重，计算腹水量；肉眼观察各组动物胰腺组织大体标本的病理改变，同时切取胰腺组织，常规行甲醛固定、石蜡包埋制片及HE染色，在显微镜下观察胰腺病理损害程度，按Schmidt方法评分〔11〕，并记录结果。

1.3.3血清标本收集术后6 h，每组大鼠经下腔静脉穿刺抽取血液约10 ml，并抽取血液标本置于4℃的离心机中，3 500 r/min离心15 min，分离上层血清，置于-20℃冰箱中待测。

1.3.4血清淀粉酶及血清脂肪酶检测血清淀粉酶测定采用碘-淀粉比色法；血清脂肪酶测定采用快速比浊法，全部按照试剂盒说明书进行。

1.4统计学处理采用SPSS19.0软件行单因素分析。

2　结　果

2.1大鼠存活情况假手术组大鼠术后6 h全部存活，AP组存活率为66.67%(8/12 只)，高剂量康胰汤治疗组为91.67%(11/12只)，低剂量康胰汤治疗组75.00%(9/12只)，维拉帕米组为83.33%(10/12只)。

2.2各组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶、腹水量的比较AP组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶活性及腹水量明显高于假手术组，康胰汤组及维拉帕米组均低于AP组(P<0.05)。见表1。

2.3胰腺标本组织学观察

2.3.1胰腺病理形态学观察 大体标本：除假手术组外，其余各组大鼠均可见胰腺组织水肿，表面颜色稍暗，并可见数量不等的散在出血点；腹腔内均有少量腹水，并有少数大鼠呈淡红色血性腹水；部分大鼠胰腺表面及大网膜可见轻重一不的皂化斑。部分AP组还可见胰腺片状坏死，并与胃、结肠等粘连，小肠壁充血水肿。显微镜下表现：假手术组大鼠胰腺组织腺泡及

表1　康胰汤对大鼠血清淀粉酶、脂肪酶及腹水量的影响

与假手术组比较:1)P<0.01；与维拉帕米组比较:2)P<0.05；与AP组比较:3)P<0.05；下表同

小叶结构完整，间质未见明显异常改变，未见细胞肿胀、坏死，亦未见出血坏死及炎症细胞浸润；而AP组大鼠胰腺组织可见大范围凝固性坏死，细胞肿胀明显，结构较为模糊，不易辨认，可见部分细胞溶解坏死，间质亦有水肿，小血管壁可见坏死，伴有出血，小叶及小叶间隔亦有累及，另外，腺泡间隔内还可见到大量的中性粒细胞浸润；维拉帕米组大鼠胰腺间质可见较多中性粒细胞浸润，小叶内腺泡细胞存在局灶性坏死，并可见明显出血；低剂量康胰汤组大鼠胰腺显微镜下表现与维拉帕米组相似；高剂量康胰汤组主要表现：胰腺间质有少许充血、水肿，伴有轻度中性粒细胞等炎性细胞浸润，仅部分大鼠胰腺小叶内腺泡细胞有散在出血点，未见明显坏死灶。

2.3.2胰腺组织学评分比较AP组大鼠胰腺组织炎性细胞浸润、细胞水肿、出血及腺泡坏死评分明显高于假手术组(P<0.01)；AP组大鼠相关指标评分均明显高于各用药组(P<0.05)，其中维拉帕米组及低剂量康胰汤组大鼠胰腺组织细水肿、腺泡坏死程度较高剂量康胰汤组重(P<0.05)，而高剂量康胰汤组胰腺出血评分与维拉帕米组相似，但较低剂量康胰汤组低(P<0.05)；高剂量康胰汤组大鼠胰腺组织炎性细胞浸润程度较维拉帕米组轻(P<0.05)，且在一定范围内，随着康胰汤剂量的增加，大鼠胰腺组织学评分降低。见表2。

表2　各组大鼠胰腺组织学评分比较±s，n=8，分)

3　讨　论

在正常情况下胰液中的胰酶无活性，只有在十二指肠内被激活后方有消化功能。在各种致病因素的作用下，各种胰酶提前在胰管或腺泡内被激活，这些具有活性的胰酶在局部对胰腺及其周围组织产生自身消化，各种蛋白酶、脂肪酶都可导致细胞坏死，磷脂酶A可产生有细胞毒性的溶血性卵磷脂，可溶解破坏细胞膜和线粒体膜的脂蛋白结构，致细胞死亡；弹力蛋白酶可破坏血管壁和胰腺导管，使胰腺出血和坏死；脂肪酶将脂肪分解成脂肪酸后，与钙离子结合形成脂肪酸钙，使血钙下降。胰液中各种酶被激活后的共同结果是胰腺和周围组织广泛充血、水肿，甚至出血坏死，并在腹腔和腹膜后渗出大量液体。大量胰酶及有毒物质被腹膜吸收后入血后，可导致心、脑、肝、肺、肾等器官损害，引起多器官功能障碍综合征。胰腺小叶内动脉及其分支之间无吻合存在，属于终末动脉，故胰腺组织对缺血非常敏感，急性胰腺炎时血流动力学发生改变，加重胰腺的血液循环障碍，可使水肿性胰腺炎向出血坏死性胰腺炎转化。

AP患者病变轻重不等，轻者病变多局限在体尾部，胰腺肿胀变硬，充血，被膜紧张，其下可有积液，腹膜内脂肪组织特别是大网膜可见散在的皂化斑，腹水为淡黄色，预后较好；重者病变以胰腺实质出血、坏死为特征，胰腺肿胀呈暗紫色，腹腔内为血性混浊渗液，可导致全身炎症反应综合征及多器官功能损害，引起严重腹膜炎、循环呼吸衰竭、休克等。AP有死亡率高、致残率高、住院费用高等特点。西医治疗以禁饮食、胃肠减压、镇痛解痉、抑制胃酸及胰液的分泌为主，存在感染征象时则需给予广谱高效抗生素抗感染治疗，同时补足血容量，维持水电解质、酸碱平衡，保持内环境稳定，并予足量的肠外营养支持，及时监测病情变化发展。内科保守治疗效果不佳时，行急诊手术治疗。

在中医范畴中，AP属“脾胆痛”、“脾心痛”、“胃脘痛”、“结胸痛”，其主要病机是气机升降失调、肝脾失和、肝失条达、脾失运化、脾胃湿热、气滞湿阻，蕴积于中焦而致病，根据“六腑以通为用，不通则痛”的理论，治疗以舒肝解郁、健脾燥湿、清热解毒、活血化瘀、泻实通下为主。目前已经知道，大黄可以抑制胰液的分泌，减轻胰液中胰蛋白酶、胰淀粉酶、弹性蛋白酶对胰腺组织的损伤，并可抑制多种炎症细胞因子及氧自由基的释放。康胰汤可缓解肠道麻痹，促进胃肠道蠕动，加快肠道功能恢复，促进排气排便，以减轻腹痛腹胀等症状，并降低肠黏膜的通透性，增加其屏障作用，防止肠内细菌异位入血，减少毒素吸收，同时减轻腹内压，促进静脉回流，并可使膈肌上抬得以缓解，减轻了对肺的挤压，可明显改善呼吸、循环系统症状。AP时胰腺分泌的各种胰酶提前在胰管或腺泡内激活，对胰腺及其周围组织产生自身消化，是引起胰腺炎加重的一个重要因素，中药康胰汤可抑制胰腺对各种胰酶的分泌，促进胰液的排泄，减少胰液滞留引起的自身消化损伤。Gong等〔12〕报道，中药对胰腺组织的再生具有促进作用，联合生长抑素能提高转化生长因子和表皮生长因子的基因表达，增加DNA合成和蛋白含量，促进胰腺的修复和再生。本研究结果显示，康胰汤可减轻胰腺组织水肿、出血坏死，减少腹腔及腹膜后渗液，降低血清淀粉酶及脂肪酶脓度，明显降低实验大鼠的死亡率。

1周新泽，陈玉泉.急性胰腺炎大鼠氧自由基、血栓素和前列环素变化及维生素E治疗研究〔J〕.肝胆外科杂志，1996；8(3)：121-6.

2Formela LJ，Galloway SW，Kingsnorth AN.Inflammatory mediators in acute pancreatitis〔J〕.Br J Surg，1995；82(1)：6-12.

3蒲青凡，严律南，沈骥，等.胰腺腺泡细胞钙超负荷在诱发大鼠由水肿性向坏死性胰腺炎转变中作用〔J〕.中华医学杂志，1999；79(2)：143-6.

4芦波，钱家鸣.重症急性胰腺炎病因及发病机制研究进展[J].中国实用外科杂志，2012；32(7)：590-2.

5丁红，李玖哲，伍西康，等.中西医结合治疗急性胰腺炎30例疗效观察〔J〕.云南中医中药杂志，2007；28(7)：11-4.

6许威，周木里，徐娉婷，等.银杏苦内酯B对急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织PAF-R表达的影响〔J〕.胰腺病学，2007；7(4)：216-8.

7杨金虎，李大库，张天抗，等.持续区域动脉灌注奥曲肽、复方丹参治疗犬重症急性胰腺炎〔J〕.肝胆胰外科杂志，2007；19(4)：227-9.

8孔棣，王思懿，陈永华，等.大柴胡汤对蛙皮素和内毒素引起的大鼠急性胰腺炎的作用〔J〕.中西医结合外科杂志，1997；28(3)：297-31.

9王绥能，林方略.中西医结合治疗重症型胰腺炎38例〔J〕.海南医学，2001；12(5)：39.

10Aho HJ，Koskensalo SM，Nevalainen TJ.Experimental pancreatitis in the rat.Sodium taurocholate-induced acute haemorrhagic pancreatitis〔J〕.Scand J Gastroenterol，1980；15(4)：411-6.

11Schmidt J，Lewandrowski K，Castillo CF.Histopathologic correlates of serum amylase activity in acute experimental pancreatitis〔J〕.Dig Dis Sci，1992；37(9)：1426-31.

12Gong Z，Yuan Y，Lou K，etal.Mechanisms of Chinese herb emodin and somatostatin analogs on pancreatitic regeneration in acute pancreatitis in rats〔J〕.Pancreas，2002；25：154-60.

〔2016-07-30修回〕

(编辑曲莉)

海南省自然科学基金项目(No：808244)

赵国栋(1978-)，男，副主任医师，主要从事消化道肿瘤的外科治疗研究。

王绥能(1964-)，男，副主任医师，主要从事消化道肿瘤的外科治疗研究。

R57

A

1005-9202(2016)15-3640-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.013

1海南省热带药用植物化学重点实验室