胃癌患者血清Cystatin C水平及影响其表达的相关因素分析

施玲飞　边平达　沈　朋

胃癌患者血清Cystatin C水平及影响其表达的相关因素分析

施玲飞边平达沈朋★

目的 研究血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cys C）的表达水平在胃癌患者与健康人群中的差异，分析影响其表达水平的相关因素。 方法 采用比浊法分别检测并比较90例胃癌患者和46例健康对照者中血清Cys C浓度差别，并进一步将胃癌患者血清 Cys C 的浓度与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤TNM分期、分化程度、癌栓形成作相关性分析。结果 胃癌患者血清Cys C水平低于健康对照者（P＜0.01）；相关性分析显示胃癌患者血清Cys C水平与年龄、肿瘤大小、癌栓形成、分化程度相关（P＜0.05），与患者性别、肿瘤TNM分期无关（P＞0.05）。结论 胃癌患者血清Cys C水平低于健康对照者，且血清Cys C水平能反映肿瘤的恶性程度，检测血清中Cystatin C表达水平有助于早期发现判断患者病情并协助制定术后治疗方案。

胃癌 血清 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C

胃癌是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，是危害我国人民健康的重大疾病之一，在新发癌症及病死率上高居第三［1］，因此胃癌的早期诊断及治疗尤为重要。研究发现［2］，半胱氨酸蛋白酶抑制剂 C（Cystatin C，Cys C）是调控肿瘤细胞入侵和转移的重要分子［3］，其异常表达可能与肿瘤进展有关，但目前Cys C在胃癌患者血清中表达情况的研究报道较少。本文拟检测胃癌患者和健康对照者血清Cys C的水平，分析影响其表达水平的差异，并试图分析影响胃癌患者血清Cys C表达水平的相关因素。

1　临床资料

1.1一般资料 选择2012年7月至2014年7月在浙江大学附属第一医院住院治疗的胃癌患者90例（观察组）。其中男59例，女31例；年龄37～80岁，平均年龄（60.38±5.88）岁。所有患者均经过病理检查确诊，采血前均未行手术、放化疗及抗肿瘤治疗。根据2010年AJCC胃癌TNM分期标准，划分为Ⅰ期39例、Ⅱ期25例、Ⅲ期19例、IV期7例。术后患者按照病理分级，高中分化 36例、低分化54例。另外，选取健康体检者82例作为对照组，男52例，女30例；年龄24～81岁，平均年龄（58.68±5.48）岁。本研究经伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2血清Cys C、Scr及eGFR水平检测 由于血清Cys C水平受肾功能影响［4］，需在统计分析中排除因肾功能水平差异导致的统计学差异，故所有受检者抽取晨间空腹肘静脉血3ml，分别做血清Cys C及血清肌酐（Serum creatinine，Scr）水平检测。样本在抽取后2h内离心（4℃，3000r/min离心10min），取血清置于-80℃冰箱冻存待检。血清Cys C水平采用颗粒增强散射免疫比浊法（PENIA）测定，采用罗氏诊断公司的专用试剂盒，采用试剂盒配备的校准物和质控品，肾小球滤过率（Estimating glomerular filtration rate，eGFR）采用改良的MDRD公式估算。检测所用仪器为日立7600-010型全自动生化分析仪。

1.3统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验。分类资料采用χ2检验。采用协方差分析去除可能混杂因素的影响。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组血清Cys C表达水平比较 观察组和对照组血清Cys C分别为（0.72±0.18）mg/L、（0.96±0.19）mg/L，差异有统计学意义（P＜0.01）。

2.2胃癌患者血清Cys C表达水平与临床病理特征的关系 将患者肾功能水平作为协变量进行方差分析，结果表明血清Cys C表达水平与患者年龄，肿瘤大小、肿瘤分化程度、癌栓形成均有相关性（P＜0.05），与患者性别、肿瘤TNM分期无关（P＞0.05），见表1。

表1　血清Cys C表达水平与胃癌患者临床特征的关系

3　讨论

Cys C是含有120个氨基酸的多肽链，分子量为15000，其由CST3基因编码，位于染色体20 p11.21［5］，属于2型半胱氨酸蛋白酶抑制物超家族中成员。存在于所有体液中，无组织特异性，是组织蛋白酶（Cathepsin，Cat）B、H、L、S的抑制剂［6］。细胞内半胱氨酸蛋白酶（Cats）参与和促进癌症过程可能会被半胱氨酸蛋白酶抑制物（Cystatin）控制吸收［7］，因此Cys C和Cats的表达水平与肿瘤的生长、转移和进展密切相关［8-9］，可作为恶性肿瘤的筛选指标，应用于研究和临床检验。

目前国内外研究发现［10-12］肺癌、原发性肝癌、食管癌的肿瘤组织中，Cys C的水平高于正常组织，Cys C-mRNA高表达。但Cys C在不同肿瘤中表达并不一致，另一些研究发现［13-14］，头颈部肿瘤和前列腺癌中Cys C表达是下调的。有结肠肿瘤研究者认为［15］，虽然患者体内Cat B和Cys C的含量均有增加，而Cat B的酶活性并未被相应增加的Cys C所平衡，即两者处于一种失平衡状态，导致了肿瘤的发生发展。作者检测了胃癌患者和健康对照者血清Cys C的浓度，发现胃癌组的血清Cys C浓度明显低于健康对照组（P＜0.01），提示血清Cys C水平低于正常人可能与胃癌发生相关。另外，方差分析结果提示Cys C与胃癌患者年龄、肿瘤直径、癌栓形成、分化程度有关，与患者性别、肿瘤TNM分期无关。由于Cys C反映了肾小球滤过功能［4］，年龄＞60岁的老年患者，由于其肾功能下降，故血清中Cys C水平高于＜60岁的患者。肿瘤的直径反映肿瘤体积以及肿瘤细胞的多寡，肿瘤细胞越多，血清Cys C消耗量越大，血清浓度越低。癌栓反应了肿瘤的转移及侵袭情况，转移灶使得肿瘤细胞呈多中心分布，大量消耗血清Cys C，故有癌栓组血清Cys C浓度更低。肿瘤细胞的分化程度亦能在血清Cys C浓度上体现，中分化组血清Cys C高于低分化组。然而本研究发现高分化组血清Cys C虽高于低分化组，但要低于中分化组，考虑高分化组样本量太少仅2例患者，可能影响了统计学的结果，需要进一步积累病例数。

总之，本资料初步证明在胃癌患者中，血清Cys C水平的变化与胃癌恶性程度及肿瘤的发生、发展有关，因此血清Cys C水平可作为筛选早期胃癌患者肿瘤分化及进展程度的指标，亦可作为胃癌患者术后肿瘤复发及预后的预判指标。由于Cys C与Cats的关系，在后续研究中可进行相关Cats的测定、Cats/Cysc的动态平衡情况，以进一步阐明胃癌发生发展的机制、与胃癌临床特征及预后的关系，寻找肿瘤基因治疗的新靶点。

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Objective The aim of this study is to investigate the expression difference of sera cystatin C level between patients with gastric cancer and contrast volunteers and the determine factors that related. Methods Blood samples were collected from 90 patients with gastric cancer and 46 healthy control subjects. Cystatin C concentration were detected by turbidity measurement and were analyzed by univariate method. The correlation of sera cystatin C concentration to gastric cancer patient's age，gender，tumor size，tumor TNM stage，differentiation degree，tumor thrombi was analyzed by univariate method. Results Cystatin C levels were signifi cantly lower in the patients with gastric cancer than that in the healthy control subjects（P＜0.01）. Correlation analyze reveals that the level of Sera Cystatin C was correlated with patient's age，tumor size，tumor thrombi，differentiation degree of tumor（P＜0.05）. Cystatin C is not relevant with patient's gender，tumor TNM stage of gastric cancer（P＞0.05）. Conclusion Sera cystatin C level in gastric cancer patients was signifi cantly lower than healthy control subjects and refl ects the degree of malignant tumor. Sera cystatin C contributes to the early detection，diagnosis of patients with gastric cancer and helps the planning of therapy scheme after surgery.

Gastric cancer Sera Cystatin C

310024浙江省人民医院望江山院区（施玲飞 边平达）

310003 浙江大学医学院附属第一医院（沈朋）