高效液相色谱法测定葡萄中8种氨基甲酸酯农药残留

周嘉诚　陈楠　黎小鹏

摘要 使用高效液相色谱法测定葡萄中8种氨基甲酸酯农药（涕灭威亚砜、涕灭威砜、涕灭威、灭多威、克百威、3-羟基克百威、速灭威和仲丁威）的残留量。样品前处理采用乙腈提取、氨基柱净化，C18色谱柱分离、高效液相色谱仪-柱后衍生-FLD检测器分析检测，结果表明：8种氨基甲酸酯农药在30 min内得到良好的分离，线性相关系数r2为0.999 75～0.999 93，检测限达2.5～7.1 μg/kg，当添加水平为0.5 mg/kg时，回收率范围为82.0% ～101.2%。该方法快速灵敏，操作简单且效果显著。

关键词 葡萄；高效液相色谱法；氨基甲酸酯农药；残留量

中图分类号 S481+.8 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）08-0117-02

Abstract Investigated a method for determination of 8 carbamate pesticides residue （including：Aldicarb sulfoxide，Aldicarb sulfone，aldicarb，meth-omyl，carbofuran，3-hydroxy g Budweiser，Tsumacide and Bassa） in grape by high performance liquid chromatography（HPLC）.Using acetonitrile to extract，Amino to purify，C18 column to separate and detecting in HPLC-FLD detector.The results showed that 8 carbamate pesticides had fine separated in 30 minutes，the linearly dependent coefficient r2 was between 0.999 75 and 0.999 93，detection limit was 2.5～7.1 μg/kg and the recovery range was 82.0%～101.2% when add level was 0.5 mg/kg.The method was rapid and sensitive，the operation was simple and the effect was remarkable.

Key wors grape；high performance liquid chormatography；carbamate pesticide；residue

葡萄，俗名草龙珠、赐紫樱桃、菩提子、蒲陶、山葫芦，是世界上分布最广的果树作物，作为著名水果，可生食或制葡萄干，或酿酒，酿酒后的酒脚还可提取酒食酸等。我国葡萄生产发展十分迅速，截至2013年，我国葡萄栽培面积已达71.464万hm2，葡萄产量达到1 155万t，产量稳居世界首位[1]。然而，葡萄的农药残留一直是制约产业链发展的重要因素，虽然国内专家指出多年来鲜食葡萄及其产品葡萄酒均未发生过农药残留超标问题，但葡萄市场却依然遭遇着消费者的信任危机。究其原因，是当前国内葡萄的种植多为散户种植，对葡萄的田间管理不规范，导致杀虫剂、杀菌剂等农药过量使用，尤其是在葡萄4个月的生长周期内，农户大致会喷7～8种农药，从而导致葡萄果实中农药残留过高，并牵连到葡萄酒等多种行业的农药残留问题，给我国葡萄产业链的质量安全带来重重隐患[2]。

当前，已有不少著作提出了关于葡萄中农药多残留检测的方法[3-4]，归纳起来，农药残留的检测方法主要集中在气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）、液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）等[5]。本文采用乙腈提取，固相萃取净化，浓缩定容后仪器检测，使用高效液相色谱-柱后衍生-荧光检测法（HPLC）同时测定8种氨基甲酸酯农药，该方法主要特点是前处理步骤简单，且灵敏度高，分析效果显著。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260型高效液相色谱仪，配有FLD检测器，柱后衍生系统（Pickering公司），百分之一天平[奥豪斯仪器（上海）有限公司]，IKA T18匀浆机（IKA公司），圆周式震荡摇床（IKA公司），台式冷冻高速离心机（上海安戈仪器有限公司），氮吹仪（Organomation公司），Autoscience固相萃取仪（天津奥特赛斯仪器有限公司），Poxwar漩涡混合器（苏州珀西尔实验设备有限公司）。

前处理所使用的乙腈、氯化钠、甲醇、二氯甲烷为分析纯，其中氯化钠为广州化学试剂厂生产，其余均为天津市富宇精细化工有限公司生产；最终定容的甲醇为色谱纯，赛默飞世尔科技（中国）有限公司生产；氨基固相萃取小柱（500 mg 6 mL），安捷伦公司生产；0.2 ？滋m尼龙滤膜，天津市津腾实验设备有限公司生产；柱后衍生试剂氢氧化钠溶液、OPA稀释溶液、邻苯二甲醛和巯基乙醇均为Pickering公司生产。

涕灭威亚砜、涕灭威砜、涕灭威、灭多威、克百威、3-羟基克百威、速灭威和仲丁威8种氨基甲酸酯类农药标准品均由农业部环境保护科研监测所生产，浓度均为1 000 mg/L，使用前用甲醇（色谱纯）稀释成所需浓度的混合标准工作液。

1.2 试验方法

1.2.1 样品的前处理。按NY/T 789-2004[6]的标准于中山市三乡镇农场抽取葡萄样品，取全果，经混匀粉碎后制成待测样。

取25.0 g混勻粉碎后的样品置于100 mL离心管中，加入50 mL乙腈，用高速匀浆机匀浆2 min，加入7 g氯化钠，用圆周式震荡摇床剧烈震荡3 min，置于离心机以8 000 r/min离心5 min。

吸取10.00 mL上清液（乙腈相）到15 mL试管中，将试管置于氮吹仪在50 ℃下氮吹至近干，用2 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）溶解残渣，待净化。

取氨基柱置于固相萃取仪，用4.0 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）活化氨基固相萃取小柱后，倒入上述待净化液并收集洗脱液，用3 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）清洗待净化液试管后过柱，并重复1次。挤干固相萃取小柱，洗脱液于50 ℃氮吹至近干，用色谱纯甲醇+水（1：1）准确定容至2.5 mL，在混合器上混匀后，用0.2 ？滋m滤膜过滤，供高效液相色谱仪分析检测。

1.2.2 仪器条件。Pickering C18液相色谱柱，4.6×250 mm，5 μm；流动相组成：甲醇、水，梯度洗脱（表1）；流速：1.200 mL/min；柱温：42 ℃；进样量：10.0 μL；定量方法：外标法；检测器：荧光检测器；检测器波长：激发波长330 nm，发射波长465 nm；柱后衍生系统：流速0.3 mL/min，水解温度100 ℃，衍生温度为室温。

2 结果与分析

2.1 8种氨基甲酸酯农药的液相色谱图

根据既能使待測农药完全分离，又能节约分析时间提高分析效率的原则[7]，优化仪器条件。按照1.2.2描述的仪器条件进行测定，得到8种氨基甲酸酯农药的液相色谱图（图1）。

2.2 标准曲线、线性范围及检出限

试验前取甲醇（色谱纯）配制成的8种氨基甲酸酯类农药（涕灭威亚砜、涕灭威砜、涕灭威、灭多威、克百威、3-羟基克百威、速灭威和仲丁威）混合标准贮备液，用甲醇（色谱纯）分别稀释成0.01、0.02、0.05、0.10、0.50 mg/L 5个浓度点作校正曲线混合标准溶液，并按照1.2.2的仪器条件进行测定。

以3倍信噪比表示检出限，以各色谱峰的面积为纵坐标，各标准溶液的浓度作横坐标绘制标准曲线，各标准物质的线性范围、检出限、线性回归方程及相关系数r2如表2所示。可以看出，8种氨基甲酸酯类农药在0.01～0.50 mg/L的线性范围内，相关系数r2均大于0.999 7。

2.3 方法回收率及精密度

以1.2.1的样品前处理方法，1.2.2的仪器分析条件，取经检验确证不含有待测农药的葡萄样品，并使用8种氨基甲酸酯农药混合标准溶液以0.5 mg/kg的添加水平进行回收率和检测精密度的分析试验，试验把葡萄样品分成6个平行样品进行测定，经检测8种氨基甲酸酯类农药的回收率达到82.0%～101.2%，相对标准偏差在2.8%～6.5%之间。以上数据表明，本文所用前处理方法和仪器分析方法可以得到良好的回收率和精密度，具有很好的检测能力。

3 结论

葡萄中8种氨基甲酸酯农药（涕灭威亚砜、涕灭威砜、涕灭威、灭多威、克百威、3-羟基克百威、速灭威和仲丁威）的残留量，以乙腈提取、氨基柱净化作为样品前处理方法，使用高效液相色谱仪-荧光检测器测定C18柱分离后的衍生物，当添加水平为0.5 mg/kg时，样品回收率达到82.0%～101.2%，线性相关系数r2为0.999 75～0.999 93，相对标准偏差在2.8%～6.5%之间，并且检测限可达到2.5～7.1 μg/kg。此方法步骤简便，操作简单，并可达到良好的分析效果，可以用于对葡萄中氨基甲酸酯类农药残留的定量检测。

4 参考文献

[1] 河北新闻网.我国鲜食葡萄产量多年稳居世界首位[EB/OL].（2014-09-28）[2016-03-01]http：//news.tangjiu.com/html/xingyedongtai/putao-jiu/20140928/202695.html.

[2] 张世祥.农药残留障碍葡萄产业化[J].农村经济与科技：农业产业化，2012，23（10）：58-59.

[3] 秦曙，乔雄梧，王霞，等.应用GC-MS测定葡萄中的5中农药残留[J].分析测试学报，2004，23：242-243.

[4] 李海艳，尚德军，李晓岩，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定葡萄干中27中农药残留[J].分析测试学报，2013，32（5）：625-629.

[5] 李蓉，储大可，张朋杰，等.QuEChERS/HPLC-MS/MS法测定黄瓜、菜心、葡萄、香蕉中127种农药残留[J].分析测试学报，2015，34（5）：502-511.

[6] 农药残留分析样本的采样方法：NY/T 789-2004 [S].北京：中国农业出版社，2004.

[7] 阮卓卿，黎小鹏，李拥军，等.高效液相色谱法测定草莓中7种氨基甲酸酯农药残留[J].现代农业科技，2014（13）：141，146.