四种鱼类蛙病毒调查

刘莎莎吴名杰王晓龙*

（1.黑龙江省林业监测规划院　哈尔滨　150090）

（2.东北林业大学保护医学与生态安全研究中心　哈尔滨　150040）



科学实验

四种鱼类蛙病毒调查

刘莎莎1吴名杰2王晓龙2*

（1.黑龙江省林业监测规划院哈尔滨150090）

（2.东北林业大学保护医学与生态安全研究中心哈尔滨150040）

我国水产养殖业发展迅速，养殖密度不断增加，发生病害的几率也逐渐加大。当前，鱼类极其重要的一种新生病毒性传染病——蛙病毒病，普遍分布于全球，黑龙江省鱼类中尚未见报道。本调查从黑龙江省抚远县采集鱼样本共计114尾，其中鲟鱼8尾，鲑鱼42尾，鲤鱼42尾，鲫鱼22尾。利用PCR方法对其蛙病毒带毒情况进行调查。检测结果表明黑龙江省抚远县鲟鱼、鲑鱼、鲤鱼和鲫鱼均未检测出蛙病毒。蛙病毒可经贸易传播，考虑到在黑龙江地区鱼养殖规模以及贸易市场的扩大，必须严格控制本地市场上的鱼类贸易，加大检疫力度，减少蛙病毒引入的风险。

鱼类；蛙病毒；调查

鱼类蛙病毒病是鱼类疾病中最难以预防和治疗的一类疾病，它不仅造成野生鱼种的损失，对于养殖鱼种，由于特定的生存环境，常造成毁灭性及巨额损失，已成为制约鱼类养殖业持续稳定发展的重要因素之一。

本文仅就黑龙江省抚远县鱼类蛙病毒病调查相关情况介绍如下。

1　材料

黑龙江省抚远县四种鱼类肝脏组织样本共计114个，其中鲟鱼8个，鲑鱼42个，鲤鱼42个，鲫鱼22个。

2　方法

2.1DNA的提取：

按天恩泽试剂公司动物DNAOUT试剂盒说明书进行操作提取鱼肝脏样本组织DNA，备用。

2.2蛙病毒PCR方法检测：

根据所优化的反应体系进行反应。

PCR反应体系为20μL：DNA模板0.5μL，ddH2O 8.7μL，2×Taq Mix10μL，上游引物（10uM）0.4μL，下游引物（10uM）0.4μL。反应条件：94℃预处理5min；进行35个循环，每个循环包括94℃30sec，55℃30sec，72℃30sec；循环完成后72℃充分延伸5min；最后4℃保存。

3　结果

检测结果表明黑龙江省抚远县鲟鱼、鲑鱼、鲤鱼和鲫鱼均未检测出蛙病毒，表明未被蛙病毒感染。

图1　鲟鱼样本检测结果

图2　鲑鱼样本检测结果

图3　鲤鱼样本检测结果

图4　鲫鱼样本检测结果

本次调查是黑龙江省抚远县第一次进行鱼类蛙病毒的调查，未出现阳性结果，说明了蛙病毒在黑龙江省抚远县鱼类中并无分布，可能与该地区的各种生境因子有关，仍然需要更详细的数据和进一步的分析。

该研究将对蛙病毒在高寒地区鱼类种群中的全球分布研究提供依据。同时，考虑到黑龙江省冷水鱼类种群的多样性，在未来的研究中，也应该对黑龙江省其它冷水鱼类种群的蛙病毒带毒率情况进行详细的调查。

本次调查的结果也为我们对不断变化的环境下中国冷水鱼类种群健康状况进行评价并提出相应保护策略具有重要的意义。

由于国外的一些研究己经证实蛙病毒在同一地区每年的流行率都呈现出较大的波动，因此在黑龙江省抚远县加强对鱼类种群蛙病毒流行的长期监测也就显得尤其重要，这将有助于我们了解这个地区蛙病毒的流行情况以及重复发生的频率等，为我们对本地区鱼类物种的保护提供更好的建议。

蛙病毒有通过贸易传播的可能［3］。在最近国外的很多关于蛙病毒的研究，也已经证实了通过贸易传播蛙病毒的可能性。考虑到在黑龙江地区高寒鱼养殖范围的扩大以及其在本地贸易市场的扩大，同时考虑到本地区外来物种贸易量的增加，蛙病毒引入到黑龙江地区冷水鱼种群中的原因也就变得非常可能，我们必须加强对这个地区高寒鱼物种贸易市场的监控，严格控制本地市场上的鱼类贸易，加大检疫力度，减少蛙病毒外来引入的风险。

一作简介：刘莎莎，女，1983年4月生人，山东招远人，本科学历，工程师。研究方向：野生动物保护与利用。

*为通讯作者，联系方式：yttuhh@yeah.net