柚皮苷脂质体缓释凝胶制备工艺优化

王海燕 陈月华 李娟 陈琼

摘要：考察影响柚皮苷脂质体缓释凝胶制备工艺的各因素，以包封率为指标，确定柚皮苷脂质体缓释凝胶最佳制备工艺条件。以成型性、涂展性、稳定性的综合作用为指标，采用正交试验设计对影响凝胶剂质量的卡波姆940用量、载药量、5%羟苯乙酯乙醇溶液和三乙醇胺用量进行考察，并用高效液相色谱法测定所制凝胶中柚皮苷的含量。确定柚皮苷脂质体缓释凝胶最佳制备方法为以乳化-低温固化法制备柚皮苷脂质体；柚皮苷脂质体缓释凝胶处方为0.3 g卡波姆940为凝胶基质、2 g 10%月桂氮卓酮无水乙醇溶液为促渗剂、1.0 g三乙醇胺为pH调整剂、0.4 g甘油为保湿剂、0.4 g 5%羟苯乙酯乙醇溶液为防腐剂、载药量为2.08%。柚皮苷脂质体缓释凝胶剂制备工艺简单，所制凝胶质地均匀细腻，稳定性良好。

关键词：柚皮苷；脂质体；缓释凝胶；正交试验设计

中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）05-1252-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.05.041

Optimization of the Preparation Process of Naringin Liposome Sustained-release Gel

WANG Hai-yan，CHEN Yue-hua，LI Juan，CHEN Qiong

（Xinyang Engineering Research Center for the Exploitation of Chinese Medicine Resources/Xinyang Key Laboratory of Detection and Analysis of Chinese Medicine/Xinyang College of Agriculture and Forestry， Xinyang 464000，Henan，China）

Abstract： The factors which affect the preparation of naringin liposome sustained-release gel and establish the optimal preparation process were studied. The preparation method of naringin liposome was investigated with encapsulation percentage as selection standard. Formability， spread performance， stability were used as comprehensive evaluation indicator to select the preparation process by orthogonal design， taking the dosage of carbopol 940， drug loading， 5% hydroxy ethyl benzene ethanol solution and triethanolamine as factors and the content of naringin in gel was determined by HPLC. The naringin liposomes were preparaed by the method of emulsion-low temperature curing. The prescription of naringin liposome sustained-release gel was as follows：substrat of carbopol 940 was 0.3 g， penetration enhancers of 10% azone ethanol solution was 2 g， pH regulator of triethanolamine was 1.0 g， moisturizer of glycerol was 0.4 g， preservatives of 5% hydroxy ethyl ethanol solution was 0.4 g， the drug loading was 2.08 g naringin per 1 g of the gel. The preparation process of naringin liposome sustained-release gel is simple， the product is texture，delicate and stable.

Key word：naringin；liposome；sustained-release gel；orthogonal design

柚皮苷又名柚苷、柑橘苷、異橙皮苷，全称为柚皮素-7-O-新橙皮糖苷，是一种双氢黄酮类化合物，主要存在于芸香科植物葡萄柚、橘、橙的果皮和果肉中，也是骨碎补、枳实、枳壳、化橘红等中药的主要有效成分之一[1]。现代药理研究表明，柚皮苷具有多种生物学活性和药理作用，包括抗炎[2]、抗过敏[3，4]等作用。脂质体是由磷脂双分子定向排列而成的直径几纳米至几微米的超细粒子，双分子层内外分别包封脂溶性和水溶性药物，能使药物具有靶向性，提高和延长疗效，缓和毒性，避免耐药性和改变给药途径等[5]。目前，有对柚皮苷脂质体制备工艺的报道[6]，也有柚皮苷制成外用乳膏的报道[7]，但鲜见将其制成缓释剂型的报道。为此，利用其抗炎、抗过敏活性，拟以柚皮苷脂质体为模型药物，将其开发成外用制剂柚皮苷脂质体缓释凝胶，对其剂型进行改革，可以填补国内柚皮苷凝胶剂型的空白。本试验以包封率为指标，采用正交试验设计对柚皮苷脂质体的制备方法进行研究，并对柚皮苷脂质体缓释凝胶的处方进行优化，为扩大柚皮苷临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

柚皮苷原料（上海源叶生物科技有限公司，经HPLC法测定质量分数在99.0%以上）；柚皮苷对照品（含量>99.0%，中国食品药品检定研究所，批号110722-200309）；卡波姆940（廊坊聚通化工有限公司，批号20120116）；甲醇为色谱纯，胆固醇、卵磷脂、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、冰醋酸、三乙醇胺、羟苯乙酯、甘油、月桂氮卓酮、三氯化铝等均为分析纯；纯化水自制。

1.2 仪器

Agilent1100型高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；S21-1型磁力搅拌器（上海予腾生物科技有限公司）；RE-3000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHB-3 型循环水多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）；ZSBB-712 型恒温水浴（上海智城分析仪器制造有限公司）；PB602-S 型电子天平[梅特勒·托利多仪器（上海）有限公司]；SCQ-8201E型超声清洗仪（上海声彦超声波仪器设备有限公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 柚皮苷脂质体的制备 精确称取柚皮苷粉末适量，以水溶解并定容至棕色容量瓶中，使其浓度为1.1 mg/mL，作为水相，置于阴暗处备用。选取脂质体制备方法（A）、磷脂浓度（B）、磷脂与胆固醇比例（质量比）（C）和脂药比（D）（质量比）为考察因素，按L9（34）正交表进行试验，因素和水平见表1。

1.3.2 脂质体制备方法 乳化-低温固化法按文献[8]制备；薄膜分散法按文献[9]制备；逆向蒸发法按文献[10]制备。

1.3.3 包封率测定 采用葡聚糖凝胶柱层析法测定所制脂质体包封率[11]。

1.3.4 验证试验 按照正交试验优选的制备工艺条件，平行制备3份柚皮苷脂质体，按“1.3.3”的方法测定包封率，进行验证试验。

1.3.5 柚皮苷脂质体缓释凝胶的制备 在单因素试验的基础上，选取影响柚皮苷脂质体缓释凝胶剂质量的卡波姆940用量、载药量、5%羟苯乙酯乙醇溶液用量和三乙醇胺用量为考察因素，按L9（34）正交表进行试验，采用综合评分法对正交试验数据进行分析，综合评分标准见表2，正交试验因素和水平见表3。

1.3.6 柚皮苷脂质体缓释凝胶的质量控制

1）性状：柚皮苷脂质体缓释凝胶为淡黄色半固体凝胶。

2）鉴别：取样品0.2 g，加甲醇10 mL，超声处理20 min，离心，取上清液作为供试溶液。另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-冰醋酸-水（8∶4∶0.2∶1）（体积比）为展开剂进行处理，取出晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，105 ℃加热1 min，置于紫外光灯（365 nm）下进行鉴别。

3）检查：检查是否符合凝胶剂的有关规定[12]。

4）含量测定：按照参考文献[13]的方法测定。取样品0.1 g，精确称定，置于锥形瓶中，加甲醇30 mL，加热回流3 h，放冷，滤过，滤液置于50 mL量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液装入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，测定柚皮苷的含量。

2 结果与分析

2.1 柚皮苷脂质体制备正交试验结果

由表4、表5结果分析可知，各因素对柚皮苷脂质体包封率影响的主次顺序为A、B、C、D，即脂质体制备方法和磷脂浓度为主要影响因素，且影响极显著，脂药比影响最小。确定的最佳工艺条件为A1B2C1D2，即以乳化-低温固化法制备脂质体、磷脂浓度为30 mg/mL、磷脂∶胆固醇为3∶1、脂药比为8∶1。

2.2 验证试验结果

按正交试验优选的制备工艺条件进行验证试验，测定包封率，结果分别为41.2%、40.9%、41.8%，平均包封率为41.3%，高于正交试验表中任一条件下的包封率。

2.3 柚皮苷脂质体缓释凝胶的制备

采用综合评分法对柚皮苷脂质体缓释凝胶制备正交试验数据进行分析，正交试验结果见表6、方差分析见表7。由表6、表7结果分析可知，柚皮苷脂质体凝胶中各因素影响的主次顺序为B、D、C、A，即載药量为主要影响因素且具有显著性，5%羟苯乙酯乙醇溶液影响最小。确定的最佳处方条件为A2B3C2D3，即载药量1.0 g（即每20 g凝胶含柚皮苷1 g）、卡波姆940 0.30 g、三乙醇胺1.0 g、5%羟苯乙酯乙醇溶液0.4 g，制备的凝胶成型性能好、易涂展、质量稳定。

2.4 柚皮苷脂质体缓释凝胶的质量控制

按优选的制备工艺条件，制备总量为20 g凝胶3批。称取基质卡波姆940 0.3 g置于小烧杯中，加入甘油0.4 g，搅拌均匀使其全部润湿，加入纯化水适量使完全溶胀，得空白凝胶，备用。另称取柚皮苷脂质体1.0 g，加入5%羟苯乙酯乙醇溶液0.4 g和10%月桂氮卓酮无水乙醇溶液2.0 g，混匀，加入到空白凝胶中，搅拌使其分布均匀，加入1.0 g三乙醇胺，搅拌均匀，即得到凝胶。按优选的工艺制备3批凝胶，放置30 d后，其外观均匀、细腻，易涂展，成型性良好，微生物限度检测均符合规定。按优选的工艺制备的3批凝胶柚皮苷含量分别为2.13%、2.03%和2.08%，平均含量2.08%。

3 小结与讨论

柚皮苷广泛存在于柚、橘、橙等的果皮和果肉中，也是骨碎补、枳实、枳壳、化橘红等中药的主要有效成分之一[1]，具有抗炎[2，3]、抗过敏[4，5]等作用，为其开发成外用制剂提供了药理学基础。

中药水性凝胶剂具有美观、易涂布、不油腻、易洗除等优点。影响凝胶剂成型的因素有载药量、基质、保湿剂以及pH调整剂等。本试验以凝胶的成型性、涂展性和稳定性3个指标的综合作用进行评价，利用正交试验设计系统考察了影响凝胶质量的工艺条件，制备出柚皮苷脂质体凝胶。柚皮苷脂质体凝胶具有制备简单，使用、携带方便等优点，且患者依从性高。

卡波姆，商品名为卡波普（Carbopol）[14]，具有易于涂展、黏附性好、易清洗、无油腻感、能吸收组织渗出液、对皮肤无刺激性等特点，常作为凝胶剂骨架材料被广泛用于缓控释经皮制剂的制备，其用量会直接影响凝胶黏度和药物的释放，一般选用质量分数0.5%～2.0%卡波姆[14]。处方中选用甘油作为保湿剂、10%月桂氮卓酮无水乙醇溶液作为促透剂。

本试验是在实验室条件下进行的柚皮苷脂质体凝胶剂制备，按优选工艺条件制备的凝胶外观、涂展性、稳定性等均符合规定，作为新剂型，还需对其刺激性、药物的透皮吸收、药物的体外抗菌作用进行相关考察。

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