全自动血凝仪定量检测D-二聚体两种试剂的比较研究

赵秀清　吴晓慧

全自动血凝仪定量检测D-二聚体两种试剂的比较研究

赵秀清①吴晓慧①

目的：探讨全自动血凝仪ACLTOP-700免疫比浊法快速定量检测D-二聚体（D-Dimer）两种试剂的比较，借以判断两种试剂的优劣。方法：选取532例住院患者，其中不稳定心绞痛患者388例，肺栓塞患者60例，冠状动脉硬化患者70例，腹主动脉瘤患者14例，其余为高血压和冠心病患者。抽取所有患者静脉血于ACL-TOP上分别使用D-二聚体测定试剂盒D-Dimer和D-DHS两种试剂检测D-Dimer含量。结果：D-Dimer检测结果均有不同程度的增高，其中假阳性病例88例，纤维蛋白降解产物（FDP）和D-Dimer同时检测单项D-Dimer升高者，且无任何临床症状，均由VIDAS仪器检测平台进行验证。D-Dimer试剂检测D-Dimer的结果为1594.15±2286.18，D-DHS试剂检测D-Dimer的结果为912.97±1814.06，两者有显著差异（t=3.654，P＜0.05）。两种试剂的一致性较差，其相比有差异（r=0.419，P＜0.05）。结论：全自动血凝仪ACLTOP免疫比浊法快速定量检测D-Dimer，D-Dimer和D-DHS两种试剂比较，D-DHS试剂排除假阳性的能力明显较强，且对黄疸、溶血和乳糜血的抗干扰能力较强。

D-二聚体试剂；抗干扰；实验诊断；血凝仪

［First-author’s address］ Department of Laboratory Medicine， Beijing Anzhen Hospital， Capital Medical University，Beijing 100029， China.

D二聚体（D-Dimer）是交联纤维蛋白在纤溶酶的作用下水解的降解产物，在深静脉血栓和肺栓塞的排查及风险评估、弥漫性血管内凝血的诊断以及溶栓治疗的监测等方面具有明确的临床价值［1-3］。由于不同检测试剂中的关键成分不同，而D-Dimer单克隆抗体是针对不同相对分子质量的纤维蛋白降解片段所制备，与血浆中待测D-Dimer抗原的结合位点不同，试剂抗干扰能力不同、检测敏感性不同，导致检测结果存在检测系统和试剂系统间的差异，相关性较差，不同检测方法间D-Dimer结果的可比性也较差［4-5］。

D-Dimer作为体内高凝状态和继发性纤溶亢进的分子标志物之一，是血栓溶解的直接证据。因此，临床上采用何种方法和试剂检测D-Dimer最敏感和最特异，是本研究的重点所在。为此，本研究评估D-DHS试剂与传统D-Dimer试剂的异同，旨在为临床应用提供参考依据。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2015年3-10月首都医科大学附属北京安贞医院532例住院患者，其中男性275例，女性257例；年龄29～91岁，平均年龄63岁。所有患者中包含不稳定心绞痛患者388例，肺动脉血栓栓塞患者60例，冠状动脉粥样硬化患者70例，腹主动脉瘤患者14例，其余为高血压、冠心病等患者。

1.2纳入与排除标准

（1）纳入标准：所有患者均有D-dimer不同程度的增高，高于正常参考范围上限2倍以上（0～243 μg/L），且标本均无黄疸、乳糜血和溶血。

（2）排除标准：D-Dimer结果稍高但有溶血、乳糜血及黄疸的标本除外，纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）、纤维蛋白降解产物（fibrin degradation product，FDP）结果高的除外。

1.3仪器与材料

采用ACL-TOP全自动血凝仪（美国贝克曼库尔特公司），VIDAS/VIDAS30全自动荧光分析仪（法国Biomerieux公司），SIGMA-318K型离心机（德国Sigma）。D-Dimer试剂和D-DHS试剂其配套质控品均来源于意大利HemosiL公司，后者是前者的新一代产品；一次性真空采血管（美国BD公司）。

1.4检测方法

（1）所有样本均在患者安静状态下，使用109mmol/ L柠檬酸钠1∶9抗凝的一次性真空采血管，由肘正中静脉穿刺抽血，轻轻颠倒混匀5～6次，以3000 r/min离心15 min，获得乏血小板血浆（platelet-poor plasma，PPP），上机检测，所有样本均在2 h内检测完毕。

（2）D-Dimer上机检测的方法是免疫比浊法，按照标准操作规程（standard operation procedures，SOP）操作，上机使用D-Dimer试剂和D-DHS试剂分别进行D-Dimer含量的检查。然后记录数据，每次检测前，确保当日的低水平和高水平的D-Dimer室内质控均在控。

1.5评价指标

评价两种试剂是否具有相关性，D-Dimer试剂为常用试剂，D-DHS试剂为抗干扰新试剂，评价D-DHS试剂是否具有更好的抗干扰能力和更高的检测灵敏度。

1.6统计学方法

采用SPSS for window 13.0软件分析实验数据。对实验数据采用正态性检验，正态分布的计量资料结果以均值±标准差（x-±s）表示，计量资料组间比较采用Wilcoxon检验，配对设计的两样本率比较采用配对t检验，以P＜0.005为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两种试剂测定结果

D-Dimer试剂和D-DHS试剂检测D-Dimer的参考值范围和cut off值均相同，比较两者检测所得结果的一致性。532份标本的D-Dimer试剂和D-DHS试剂测定结果分别为1594.15±2286.18和912.97±1814.06，两种试剂检测D-Dimer的结果比较，差异有统计学意义（t=3.654，P＜0.05），见表1。

表1　两种试剂测定D-Dimer结果比较

表1　两种试剂测定D-Dimer结果比较

检测试剂　　　D-Dimert值P值D-Dimer1594.15±2286.183.6540.0000 D-DHS912.97±1814.06

2.2两种试剂测定结果的符合性

两种试剂测定的正常结果和异常结果的符合率仅为73.49%（244/332），不符合率达到26.51%（88/332）。两种试剂测定结果的符合性依次为100%、75.9%和47.7%。D-Dimer含量越高，两种试剂的符合率就越低。

2.3试验结果的相关性

将D-DHS试剂盒与已经商业化的HemosIL D-Dimer试剂盒进行比较，在ACL TOP所有患者D-Dimer测定得到的相关系数（r）为0.936；临床患者均见有D-Dimer水平提高。两种试剂的一致性较差，其差异有统计学意义（r=0.419，P＜0.05），见表2。

表2　两种试剂相关性比较

3　讨论

全自动血凝仪的广泛使用为血栓和止血诊疗提供了许多指标，极大的提高了检验效率［6-9］。由于ACLTOP血凝仪的广泛应用，D-Dimer项目也在此仪器中广泛开展，其试剂也随着更新换代，由传统D-Dimer试剂换成了抗干扰能力更强的D-DHS试剂，而这两种试剂测量值之间的相关性、动态变化趋势的一致性、阴性排查能力及干扰能力等差异尚无报道，这将给临床医生带来困扰；以D-DHS试剂为标准，当D-Dimer的检测结果在＜243 μg/L正常范围内时，两种试剂的检测结果的符合率为100%，而D-Dimer的检测结果在243～2000 μg/L范围内时，检测结果的符合率为75.9%，而当D-Dimer的检测结果＞2000 μg/L时，检测结果的符合率为47.7%，经两种试剂检测，共有86个标本严重不符，通过VIDAS试验结果验证95%为D-Dimer试验假阳性；其中有84例标本中D-Dimer试剂阳性的标本D-DHS试剂也是阳性，只是阳性的程度不一样，D-DHS试剂阳性的结果较之D-Dimer试剂降低了很多，但有58.1%结果由异常降至正常范围内；其中有两例D-Dimer试剂D-Dimer结果为10589 μg/L和20452 μg/L，但D-DHS试剂结果降至35 μg/L和46 μg/L，表明之前的结果是假阳性。D-DHS试剂对血红蛋白、胆红素、三酰甘油、类风湿因子以及FDP的抗干扰浓度分别达到500 mg/dl、18 mg/dl、1327 mg/ dl、1400 IU/ml以及10 μg/ml时，结果均不受影响。

D-Dimer作为交联纤维蛋白的特异降解产物，其检测广泛用于排除深静脉血栓症和肺栓塞。动态观察患者体内的D-Dimer水平变化，对高凝状态和血栓性疾病的诊断及预后判断有一定实用价值［10］。“医疗机构临床实验室管理办法”要求检验同一项目的不同方法、不同检测系统或不同品牌检测仪器均应至少每半年进行一次结果比对，当结果比对不符合要求时必须予以改正。因此，比对不同检测系统或不同品牌检测仪器之间的检测结果，确保实验室内检测结果的一致具有极其重要的意义［11］。

本研究中的532份标本中，共有50个标本严重不符，其中48个标本D-Dimer试剂阳性，而使用D-DHS试剂结果是阴性的，经过VIDAS试验结果验证，D-DHS试剂是符合的，而在0～243 μg/L范围之间，符合率是100%，在243～2000 μg/L范围内，符合率达到了76%，在＞2000 μg/L（DDU）中，符和率达到了47.7%，表明D-Dimer的值越高，两种试剂的符合率越差。所以用抗干扰的D-DHS试剂排除了其他的干扰，最接近真实的D-Dimer结果，应是临床应用最好的试剂，线性范围也很广，最高值能达到69000 μg/L。

有研究表明，测定D-Dimer时，抗体对D-Dimer不同片段有不同的亲和力，抗原表达的时间依赖性、检测的形式、血浆中抗原呈现的基质效应以及非特异性干扰物等，不同的试剂有不同的干扰情况，不同的方法的检测性能不一样，因此不同的标准导致同一个患者的结果不一样，因此较为可行的方法是同一实验室内尽量采用一种D二-Dimer的测定方法［12］。由于不同仪器、试剂及校准品等组成的检测体系对检测结果的影响，对同一项目不同仪器的检测结果进行定期比对，判断其差异是否在临床可接受范围内是极其重要的［13-14］。试剂通过不断的进行更新，方可使检验结果更准确，达到更好的一致性。本研究使用免疫比浊法不仅快速准确，受干扰因素少，而且一个批次检测样本量比较大，更适合在样本量大的医院使用［15］。为此，该类仪器均应至少每半年进行1次结果比对，当结果比对为临床不可接受时，查明原因后必须予以纠正。

综上所述，凝血常规检查是有创检查前必须检测的项目，同时也是口服抗凝药物、肝素治疗及溶栓治疗等患者监测病情及疗效必不可少的检测项目。因此，保证不同检测仪器检测结果的一致性至关重要［16］。试剂的质量是保证检验质量的重要影响因素，对临床检验结果的准确性具有重要意义。

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A comparative study on the quantitative detection of two reagents of D-Dimer by automatic coagulation analyzer

ZHAO Xiu-qing， WU Xiao-hui

China Medical Equipment，2016，13（9）:49-52.

Objective: To investigate the detection ability of two reagents by automated coagulation analyzer ACL-TOP using immune turbidimetric method， and to determine the merits and demerits of them. Methods: Two reagents were compared in the study. We selected 532 cases of hospitalized patients in Anzhen Hospital， 388 cases of which were unstable angina， 60 cases were pulmonary thromboembolism， 70 cases were coronary atherosclerosis， 14 cases were abdominal aneurysm， and the rest were the patients with high blood pressure and coronary heart disease. The plasmas of all the patients were extracted，and D-dimer was detected on ACL-TOP by D-Dimer （referred to as reagent A） and D-DHS （referred to as reagent B）. Results: The results of D-dimer increased in different degrees， and there are 88 cases of false positive cases. The case whose FDP and individual D-dimer of D-dimer simultaneous detection was elevating and clinical symptoms were disappeared was detected by the VIDAS instrument platform verification. There were significant differences between A and B. The detection result of reagent A was ［1594.15±2286.18］， and reagent B was ［912.97±1814.06］. There were significant differences between them （t=3.654， P＜0.05）. In addition， the consistency of the two reagents was poor（r=0.419， P＜0.05）. Conclusion: Comparing two reagents to detect D-dimer quantitatively by automated coagulation analyzer ACL-TOP， D-DHS owns greater ability to exclude false-positive results， so does the ability of anti-interference with jaundice， hemolysis and chylemia.

D-Dimer reagent； Anti-interference； Laboratory diagnosis； Coagulation analyzer

1672-8270（2016）09-0049-04

R446.6

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.09.015

2016-05-05

①首都医科大学附属北京安贞医院检验科 北京 100029

赵秀清，女，（1963- ），本科学历，主管技师。首都医科大学附属北京安贞医院检验科，从事医学检验工作。