熄风静宁颗粒对Tourette综合征模型大鼠行为活动及脑纹状体多巴胺递质的影响*

2016-10-18燕王新征康珈宁孙婷王俊宏

中国中医急症 2016年9期

关键词：静宁哌啶纹状体

李　燕王新征康珈宁孙　婷王俊宏△

（1.北京中医药大学东直门医院，北京100700；2.北京市朝阳区常营社区卫生服务中心，北京100024；3.河南省南阳市中医院，河南　南阳473000）

熄风静宁颗粒对Tourette综合征模型大鼠行为活动及脑纹状体多巴胺递质的影响*

李燕1王新征2康珈宁3孙婷1王俊宏1△

（1.北京中医药大学东直门医院，北京100700；2.北京市朝阳区常营社区卫生服务中心，北京100024；3.河南省南阳市中医院，河南南阳473000）

目的观察熄风静宁颗粒对Tourette综合征（TS）模型大鼠行为活动，及脑纹状体多巴胺（DA）、血清高香草酸（HVA）含量的影响。方法Wistar雄性大鼠42只随机分为正常组、模型组、氟哌啶醇组、熄风静宁颗粒低剂量组［1.2 g/（kg·d）］、熄风静宁颗粒中剂量组［2.4 g/（kg·d）］、熄风静宁颗粒高剂量组［4.8 g/（kg·d）］，每组7只，采用亚氨基二丙腈（IDPN）腹腔注射建立TS大鼠模型，造模后，正常组和模型组给予蒸馏水灌胃，其余4组分别予相应药物灌胃，连续给药6周后，观察比较各组大鼠的行为活动，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠纹状体内DA、血清HVA含量。结果熄风静宁颗粒中、高剂量组及氟哌啶醇组可以减轻TS模型大鼠抽动行为，与模型组比较均存在明显差异。模型组大鼠脑纹状DA含量明显低于正常组（P＜0.05）。熄风静宁颗粒中、高剂量组能增加大鼠脑纹状体DA含量，与模型组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；熄风静宁颗粒高剂量组大鼠血清HVA含量较低剂量组偏高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论熄风静宁颗粒可以降低中枢神经兴奋性，其治疗作用可能是通过调节突触后多巴胺受体敏感性或其他的药物作用靶位实现。

熄风静宁颗粒Tourette综合征多巴胺高香草酸

【A bstract】Objective：To observe effects of Xifeng Jingning Decoction on the behavior，content of striatum dopamine（DA），and homovanillic acid（HVA）in ratsmodel of Tourette syndrome.M ethods：Male Wistar rats（n =42）were random ly divided into the blank group，themodel group，the haloperidol group，low-dose［1.2 g/（kg· d）］of Xifeng Jingning Decoction group，middle-dose［（2.4 g/（kg·d）］of Xifeng Jingning Decoction group，and high-dose［（4.8 g/（kg·d）］of Xifeng Jingning Decoction group（each n=7）.The Tourette syndromemodel was established in rats by intraperitoneal injection of iminodipropionitrile（IDPN）.Aftermodeling，the blank group and themodel group were given normal saline solution intragastrically and other groups were given relevantmedicines for 6 weeks.The behaviorwas compared in all groups，and the content of striatum DA and HVA were detected by using enzymelinked immunosorbent assay（ELISA）.Results：Middle-dose group and high-dose group of Xifeng Jingning Decoction，and haloperidol group lessened the stereotyped behavior in ratsmodel of Tourette syndrome with a significance difference，compared with themodel group.The content of DA decreased inmodel group compared with that in blank group（P＜0.05）.Compared with themodel group，there were differences in the contentof striatum DA inmiddle-dose and high-dose of Xifeng Jingning Decoction groups（P＜0.05）.The content of HVA increased in high-dose of Xifeng Jingning Decoction group，compared with that in low-dose of Xifeng Jingning Decoction，with a significance difference（P＜0.05）.Conclution：Xifeng Jingning Decoction can reduce the excitability of central nerve.The therapeutic effect of Xifeng Jingning Decoction may be implemented regulating the sensitivity of postsynaptic dopamine receptors or other drug targets.

【Key words】Xifeng Jingning Decoction；Tourette syndrome；Dopamine；Homovanillic acid

Tourette综合征（TS）又称多发性抽动症，或抽动-秽语综合征，是一种复杂的神经精神障碍性疾病，以多种不自主运动性抽动为主要表现，可伴有发声抽动［1］。发作期急性症状严重者可影响患儿的学习及生活。TS病因及发病机制目前尚不十分清楚，而多巴胺系统功能异常被广泛认为本病发病的主要病理学基础［2］。熄风静宁颗粒是我国著名中医儿科专家刘弼臣教授的经验方，临床证实疗效显著，而且无明显副作用［3-4］。但其作用靶点尚不明确，为进一步探求熄风静宁颗粒治疗该病的作用机制，笔者进行了如下研究。

1　材料与方法

1.1实验动物Wistar大鼠42只，清洁级，雄性，4周龄，体质量80～100 g。购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可证号：SCXK（京）2007-0001。分笼喂养，自由摄食饮水，温度（22±2）℃，湿度50%～70%，通风。

1.2试药和仪器氟哌定喘片（2 mg/片，宁波大红鹰药业股份有限公司，批准文号：国药准字H33020585，生产批号131003）；熄风静宁颗粒（组成：辛夷花10 g，苍耳子3 g，元参10 g，板蓝根10 g，木瓜10 g，清半夏10 g，伸筋草20 g，钩藤15 g，菊花15 g，白芍15 g，全蝎3 g，珍珠母30 g，酸枣仁30 g，炙甘草10 g，由北京康仁堂药业有限公司制备）。亚氨基二丙腈（IDPN）购自美国Sigma公司；ELISA试剂盒，多巴胺（DA，批号20150309），高香草酸（HVA，批号20150309），均购自上海蓝基生物科技有限公司。全自动多功能酶标仪（MULTISKAN MK3，Thermo，USA）；电热恒温培养箱（DH4000A，天津泰斯特）；MINI shaker，MH-1（kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER）。

1.3分组与造模适应性喂养1周后，42只大鼠采用随机数字法分为正常组、模型组、氟哌啶醇组、熄风静宁颗粒低、中、高剂量组，每组7只。除正常组外，其余5组小鼠腹腔注射IDPN 150 mg/（kg·d），正常组腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液，每日1次，连续7 d。造模7 d后，观察模型鼠的行为活动。包括：嗅、咬、舔（不包含理毛）、迅速移位、挖洞、急速跳跃等。由熟练掌握大鼠刻板行为并能准确评分但不熟悉组别的实验人员每天观察动物行为并评分。评分≥1分可判定造模成功。评分标准参考Napier等报道［5］。

1.4干预措施造模7 d后，正常组与模型组灌胃蒸馏水10mL/（kg·d）。熄风静宁颗粒低、中、高剂量组灌胃熄风静宁颗粒1.2、2.4、4.8 g/（kg·d）（熄风静宁颗粒配成混悬液，低、中、高剂量各组质量浓度分别为1 mL含0.12 g、0.24 g、0.48 g中药颗粒），氟哌啶醇组灌胃氟哌啶醇0.5 mg/（kg·d）（氟哌定喘片配成混悬液，质量浓度为1mL含0.05mg药物），每日1次，各组均连续灌胃6周。

1.5标本采集与检测1）动物行为评分：各组给药后3周、6周均由实验人员对动物行为进行评分，评分标准参考Napier等报道［5］。2）血清HVA、纹状体DA的含量测定：血液标本采集在末次给药24 h后，腹主动脉取血5mL，2000 r/min离心10min，分离血清，-20℃保存待检测。纹状体标本采集在末次给药24 h后，断头取脑，冰上迅速剥离纹状体，电子天平称质量，于冰水中充分匀浆，低温离心机4℃，3000 r/min离心10min，吸取上清液，-20℃保存待检测。使用酶联免疫吸附法（ELISA法）分别测定血清HVA、纹状体DA的含量。严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.6统计学处理应用SPSS18.0软件包，计量资料以（表示。组间比较采用单因素方差分析，方差齐以LSD检验；方差不齐以Games-Howell检验。P＜0.05为差异有统计意义。

2　结　果

2.1各组TS模型大鼠行为活动评分比较见表1。给药3周后氟哌啶醇组大鼠刻板行为活动评分，与模型组比较存在明显差异（P＜0.05）；给药6周后大鼠行为活动评分，氟哌啶醇组、熄风静宁颗粒中剂量组与模型组比较存在差异（P＜0.05），熄风静宁颗粒高剂量组与模型组比较存在显著差异（P＜0.01）。

表1　各组TS模型大鼠行为活动评分比较（分，

与氟哌啶醇组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别n给药6周后模型组7 3.00±0.58氟哌啶醇组7 2.29±0.76△熄风静宁颗粒低剂量组7 2.43±0.54造模后　给药3周后3.29±0.76 3.14±0.69 3.57±0.54 2.86±0.89 3.43±0.54 3.29±0.49熄风静宁颗粒中剂量组7 2.29±0.49△3.86±0.38 3.43±0.54熄风静宁颗粒高剂量组7 3.71±0.49 3.57±0.54*2.14±0.38△△

2.2各组TS模型大鼠脑纹状体DA含量比较见表2。与正常组比较，模型组大鼠脑纹状DA含量低于正常组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；熄风静宁颗粒中、高剂量组大鼠脑纹状体DA含量与模型组比较，具有统计学差异（P＜0.05），氟哌啶醇组和熄风静宁颗粒各组比较无明显差异（P＞0.05）。

表2　各组TS模型大鼠脑纹状体DA、血清HVA含量比较（ng/mL，

与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05；与熄风静宁颗粒低剂量组比较，▲P＜0.05。

组别n 纹状体DA血清HVA正常组7 19.93±7.04 28.01±8.20模型组7 12.01±3.01*26.49±8.64氟哌啶醇组7熄风静宁颗粒低剂量组7 18.07±7.88 27.67±7.80 13.96±4.63 25.40±11.13熄风静宁颗粒中剂量组7 19.95±7.35△30.15±12.94熄风静宁颗粒高剂量组7 18.66±4.45△36.35±8.64▲

2.3各组TS模型大鼠血清HVA含量比较见表2。熄风静宁颗粒高剂量组大鼠血清HVA与低剂量组比较存在明显差异（P＜0.05）。

3　讨　论

TS发现至今已有200多年的历史，其病因及发病机制目前尚不十分清楚，但普遍认为其发病与遗传因素、中枢神经递质失衡、神经生化异常和精神因素等诸多方面有关［6］。但TS患者纹状体内多巴胺神经过度支配或突触后受体超敏感是目前公认的TS发病的神经生物化学因素［7］。HVA是中枢神经系统中DA的主要代谢产物，通常被作为判断脑内DA含量的主要指标［8-9］。IDPN是一种中枢神经毒素，抽动的造模机制主要是通过破坏了锥体外系的DA系统，产生持久的降低DA浓度的效应，使动物在生长发育过程中出现DA受体超敏现象，导致刻板行为出现［10］。

本实验应用IDPN成功地诱导出大鼠鼻嗅、仰头、摆头等类似TS症状行为。在对TS模型大鼠脑纹状体DA含量的影响测定中，实验结果显示模型组大鼠脑纹状体DA的含量较正常组下降，这与相关文献报道基本一致［10-12］，推测原因可能是模型组小鼠脑组织存在多巴胺受体超敏感，通过负反馈机制抑制突触前多巴胺释放，提示了IDPN诱导的大鼠抽动行为可能与突触间隙DA含量增加无关，而是由于多巴胺受体敏感性增强，导致多巴胺系统功能亢进造成。

本实验结果显示中药颗粒可以显著减轻TS模型的抽动症状，同时在对TS模型大鼠脑纹状体DA含量和血清HVA含量影响的实验中，结果显示熄风静宁颗粒中、高剂量能增加TS模型大鼠脑纹状体DA含量，及TS模型大鼠中药高剂量组较低剂量组血清HVA的含量有增多的趋势。这些结果结合IDPN致使多巴胺受体敏感性增强引起抽动的造模机制，提示熄风静宁颗粒药物干预作用可能是通过调节突触后多巴胺受体敏感性或其他的药物作用靶位实现的。导致中药颗粒能增加IDPN诱导的TS模型大鼠脑纹状体DA含量，和组间比较血清HVA的含量有增多趋势这一结果的原因，推测可能是由于突触后超敏的DA受体被阻断或药物的作用靶位被调节，启动反馈机制，使得触前神经元释放更多的DA，从而也增加相应的代谢产物。

TS根据其眨眼、挤眉、皱鼻、摇头等临床表现特点，现代医家常将本病归于“瘛癜”“慢惊风”“抽搐”肝风证“等范畴，治疗多从肝、风入手［13-15］。然而我国著名中医儿科专家刘弼臣教授独辟蹊径，从肺论治本病，成为TS中医药治疗的一面旗帜。从肺论治TS，在改善TS主要的病理因素风、痰、气方面具有重要的意义。熄风静宁颗粒即是从肺调肝治疗TS的代表方，临床中在改善抽动症状、控制病情发展、副作用少等方面有着显著的优势。本实验结果显示，在给药3周后，氟哌啶醇组TS模型大鼠行为活动的改善优于熄风静宁颗粒高剂量组，提示氟哌啶醇在改善TS症状时间上较熄风静宁颗粒起效时间早。但最终西药氟哌啶醇及熄风静宁颗粒均可改善IDPN所致TS模型大鼠的刻板运动及兴奋性活动，提示了熄风静宁颗粒具有氟哌啶醇类似的作用，能够降低模型大鼠中枢兴奋性，改善异常活跃的抽动行为，这一结果也佐证了熄风静宁颗粒临床疗效的显著性。氟哌啶醇常作为治疗TS的第一选择，但是长期应用后的副作用，甚至还出现抑郁症状，让治疗难以持久，而中药熄风静宁颗粒临床副作用少，疗效确切的优势，更体现了它的临床价值。

熄风静宁颗粒方中辛夷花、苍耳子宣肺通窍；玄参、板蓝根清热解毒利咽喉，祛邪护肺，防止外风引动内风；天麻、钩藤、白芍、全蝎平肝熄风；伸筋草，归肝脾肾诸经，有祛风、舒筋活血之功；木瓜，入肺、脾、肝诸经，理脾舒筋；甘草调和诸药。综观全方，调肺巧配平肝，相得益彰［16］，疗效显著。

综上所述，本研究显示熄风静宁颗粒可以改善中枢神经兴奋性，抑制TS模型大鼠的异常行为活动，其作用机制可能是通过调节突触后多巴胺受体敏感性或其他的药物作用靶位实现的，但这一结论在本实验中没有获得直接实验依据的支持，需要以后更进一步的研究证实。

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Ef fects of Xifeng Jingning Decoction on Behavior and Dopam ine Nuerotransm ltter of Stratium in Rat M odel of Tourette Syndrome

LIYan，WANG Xinzheng，KANG Jianing，et al.Dongzhimen Hospital Affiliated to Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100700，China.

R285.5

1004-745X（2016）09-1660-04