VEGF-C、VEGFR-3在NSCLC中的表达与淋巴转移

丁旭青　韩玉培　杨鲲鹏

1) 河南南阳市第二人民医院胸外科　南阳　473012　2) 郑州大学第二附属医院胸外科　郑州　450014



·论著·

VEGF-C、VEGFR-3在NSCLC中的表达与淋巴转移

丁旭青1)2)韩玉培1)杨鲲鹏2)

1) 河南南阳市第二人民医院胸外科南阳4730122) 郑州大学第二附属医院胸外科郑州450014

目的探讨VEGF-C及VEGFR-3与NSCLC淋巴转移间的关系，为了解患者预后提供依据。方法采用免疫组化法检测65例NSCLC中VEGF-C及VEGFR-3的表达，结合临床病理特征进行分析。结果NSCLC中VEGF-C和VEGFR-3的阳性率明显高于正常肺组织(P<0.05)。二者在Ⅲ期NSCLC中的表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期，且随病理分级的增高而显著增加(P<0.05)，在有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0.05)。结论VEGF-C及VEGFR-3在NSCLC中高表达，与其临床分期、病理分级、病理类型和淋巴结转移均密切相关。

VEGF-C；VEGFR-3；NSCLC；免疫组化；淋巴转移

淋巴转移是多种人体恶性肿瘤的重要预后因素，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)家族及其受体是淋巴转移的重要调节通路之一。VEGF-C可通过自分泌途径激活其受体VEGFR-3，诱导淋巴管内皮细胞扩增而形成新生淋巴管，进而促进肿瘤的淋巴转移[1]。本研究旨在探讨VEGF-C及其受体VEGFR-3在非小细胞肺癌组织(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达和淋巴转移间的关系。

1　资料与方法

1.1一般资料选取南阳市第二人民医院胸外科2010-06—2015-12间收治的NSCLC患者，随机抽取术后病理组织标本65例作为实验组，取肿瘤周围正常肺组织(显微镜下证实)16例为对照组。所有病例术前均未做任何治疗。实验组中男48例，女17例；鳞癌40例，腺癌25例。高分化8例，中分化23例，低分化28例，未分化6例。TNMⅠ期10例、Ⅱ期21例、III期34例(Ⅰ/Ⅱ期为临床早期组，III期为临床晚期组)。有淋巴结转移组41例，无转移组24例。中心型37例，周围型28例。所有病例均经过HE染色，光镜下由两位经验丰富的病理科医生进行病理确诊，并选择肿瘤细胞坏死少及炎症反应轻的部位进行免疫组化染色分析。患者均知情同意，并获得南阳市第二人民医院医学伦理委员会的同意。

1.2方法采用免疫组化S-P法，以 PBS代替一抗作阴性对照，所用兔抗人VEGF-C多克隆抗体、兔抗人VEGFR-3多克隆抗体、即用型SP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3结果判断VEGF-C及VEGFR-3染色结果判定：VEGF-C定位于癌细胞胞浆，VEGFR-3定位于癌细胞胞浆及癌巢周围间质内皮细胞，均呈棕黄或棕褐色颗粒状。取染色均匀区域400倍视野下，以着色细胞占视野细胞总数的多少分级。0级：0。1级：<25%。2级：26%～50%。3级：> 50%。0级为阴性，1级以上为阳性[2]。微淋巴管密度(Microlymphatic vessel density，LVD)测定：在低倍镜下寻找VEGFR-3阳性脉管密集区，百倍视野下计数10个热区中VEGFR-3阳性脉管数，取均值为其LVD。肿瘤区内单个或成丛的内皮细胞，不管成堆与否均视为脉管计数，凡伴有肌层的脉管不予计数[3]。

1.4统计学处理全部数据应用SPSS14.0版软件包，根据数据类型分别进行χ2检验、独立样本t检验和Spearman相关分析进行统计学分析，α=0.05。

2　结果

2.1VEGF-C的表达及其与NSCLC临床病理特征的关系棕黄色VEGF-C阳性颗粒均匀分布于癌细胞胞浆内(图-1)。65例NSCLC组织VEGF-C阳性率为72.3% (47/65)，明显高于对照组12.5%(2/16)，2组差异显著 (P<0.05)。结合临床病理特征分析发现：VEGF-C阳性表达率临床早期组为54.84%，显著低于临床晚期组的84.24%。有淋巴结转移组为87.7%，明显高于无淋巴结转移组的45.83%，(P<0.05)。而VEGF-C表达与患者性别、年龄、临床类型、病理类型和分化程度之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。

图-1　VEGF-C阳性表达 (SP×400)

2.2VEGFR-3的表达及微淋巴管密度的测定VEGFR-3主要表达于淋巴管内皮上，而癌组织内部表达较少，阳性产物呈棕褐色颗粒。65例NSCLC中，VEGFR-3阳性表达35例(35/65，53.85%)，而对照组仅1例(1/16，6.3%)，2者差异显著 (P<0.05)。VEGFR-3染色阳性淋巴管散在分布于癌组织间质中，以肿瘤组织周边与正常组织交界处的浸润区域及增生活跃区域为主，常可见癌栓形成(图-2)。VEGFR-3标记的LVD为(29.32±7.14)，明显高于对照组(10.63±5.80) (P<0.001)。

图-2　VEGFR-3阳性淋巴管 (SP×100)

2.3LVD与淋巴转移的关系在65例NSCLC中VEGFR-3标记的LVD与淋巴结转移、TNM分期、病理类型、分化程度均有显著相关。其中淋巴结转移组为(32.74±5.90)，明显高于无淋巴结转移组(23.46±4.98)(P<0.05)。临床晚期组为(31.99±6.65)，明显高于临床早期组(26.39±6.58)(P<0.05)。鳞癌组为(31.26±9.67)，明显高于腺癌组(26.20±6.39)(P<0.05)。低-未分化组为(31.23±5.93)，明显高于高-中分化组(27.22±7.84)(P<0.05)。相反与患者的年龄、性别和临床分型无相关性。

3　讨论

在VEGF家族成员中，VEGF-C是新近发现的特异性促淋巴管生成因子，与其受体VEGFR-3结合后，可通过MEK/ERK和PI3-激酶-Akt途径引起淋巴内皮细胞增生。其蛋白水解后的成熟形式还可结合并激活VEGFR-2，作用于血管、淋巴管内皮细胞刺激血管、淋巴管新生[4]。

人类多种肿瘤组织均表达VEGF-C，且水平与肿瘤淋巴管生成及淋巴转移呈正相关。VEGF-C 可增加淋巴管的渗透性和肿瘤间质压力，有利于肿瘤细胞进入淋巴管和静脉[5]。胃癌组织VEGF-C阳性表达与TNM分期、淋巴管浸润及淋巴结转移有关，VEGFR-3阳性表达与TNM分期及淋巴结转移有关，其LVD计数与VEGF-C的表达呈正相关[6]。刘新兰[7]等采用组织微阵列技术研究了胃癌组织中VEGF-C和VEGFR-3的表达和微淋巴管密度，发现胃癌组织中VEGF-C和VEGFR-3均呈高表达，与淋巴管生成有关并参与了胃癌的发生、浸润和转移。胃癌细胞非摄入性高表达的 VEGF-C和 VEGF-D 与淋巴结转移密切相关, 可作为评估胃癌患者预后的重要参考指标[8]。Wang[9]等分别用免疫组化和RT-PCR技术检测了VEGF-C和VEGFR-3在正常喉组织、原发喉癌及其淋巴结中的表达，结果发现他们的表达与喉癌淋巴结转移密切相关。Naruse T[10]等对口腔舌鳞癌的研究显示VEGF-C/VEGFR-3轴可通过淋巴管的再生而与淋巴结转移相关，确定VEGF-C/VEGFR-3表达状态有助于预测哪些病人会出现局部复发，同时可以为舌癌淋巴结转移的治疗提供新的靶点。刘树库[1]等发现VEGF-C和VEGFR-3 m-RNA的表达与非小细胞肺癌的淋巴结转移有关。在本实验中，VEGF-C和VEGFR-3均呈现高表达，且与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移和肿瘤浸润呈正相关。赵杨[11]等发现大肠癌组织VEGF-C、VEGFR-3表达与LVD值存在显著正相关，可促进淋巴结转移。Kadota[12]等的实验发现淋巴管生成尤其是微淋巴管和微血管的生成是非小细胞肺癌独立的不良预后因素。Zhao[13]等发现乳腺癌组织中的VEGF-C在淋巴结转移前即诱导了前哨淋巴结的淋巴管生成。

本研究发现，NSCLC组织LVD 为(29.32±7.14)，显著高于对照组(10.63±5.80)。相关分析显示：LVD与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移和肿瘤浸润正相关，而与其分化程度负相关。同时，LVD与VEGF-C和VEGFR-3呈现正相关关系。65例NSCLC中，VEGF-C和VEGFR-3高表达的组织淋巴管密度明显增高，说明VEGF-C和VEGFR-3能促进NSCLC淋巴管形成。这可能是VEGF-C通过自分泌作用于淋巴管内皮上的VEGFR-3，促使微淋巴管内皮细胞的增生和微淋巴管的延伸、增多，致使肿瘤细胞进入淋巴管的机会增多，从而使淋巴结转移的可能性增大。

总之，VEGF-C及VEGFR-3在NSCLC中高表达，与其临床分期、病理分级、病理类型和淋巴结转移均密切相关。VEGF-C和VEGFR-3与NSCLC淋巴管生成及淋巴结转移密切相关，VEGF-C及LVD可作为判断NSCLC淋巴转移及判断预后的重要指标给临床提供帮助。

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(收稿2016-03-22)

Expression of VEGF-C and VEGFR-3 in Non-Small Cell Lung Cancer and Its Relationship with Lymphatic metastasis

DingXuqing，HanYupei,YangKunpeng.

1)ThoracicDepartment,theSecondHospitalofNanyangCity,Henan, 473012,China； 2)ThoracicDepartment,theSecondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou, 453014,China)

ObjectiveTo study relationship between VEGF-C, VEGFR-3 expression and lymphatic metastasis in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) to know the prognosis of patients. MethodsImmunohistochemical staining was used to detect the expression of VEGF-C and VEGFR-3 in 65 cases of NSCLC. The significance of VEGF-C and VEGFR-3 expression was analyzed with their clinicopathological parameters. ResultsThe postive rates of VEGF-C and VEGFR-3 expression were higher in NSCLC than those in nomal lung tissue (P<0.05). The expression rates of VEGF-C and VEGFR-3 were higher in clinical stage Ⅰ, Ⅱ than those in stage Ⅲ, and which were increased with the grading (P<0.05). And the expressions were higher in patients with lymph node involvement than those without metastasis (P<0.05). ConclusionIn NSCLC, the abnormal expressions of VEGF-C and VEGFR-3 had obvious relationship to clinical stage, pathological grade, lymph node involvement.

VEGF-C; VEGFR-3; NSCLC; Immunohistochemical; Lymphatic Metastasis

R446.6

A

1077-8991(2016)06-0001-03