双氯芬酸钾乳胶剂的抗炎镇痛作用研究

赵南晰，王曼力

(北华大学药学院，吉林 吉林　132013)



双氯芬酸钾乳胶剂的抗炎镇痛作用研究

赵南晰，王曼力

(北华大学药学院，吉林 吉林132013)

目的考查自制的双氯芬酸钾乳胶剂的抗炎镇痛作用及有效性.方法采用小鼠二甲苯致耳肿胀实验、皮肤毛细血管通透性实验及小鼠扭体反应实验3 种模型比较自制的双氯芬酸钾乳胶剂和市售扶他林乳胶的抗炎作用和镇痛作用的区别.结果与空白组比较，双氯芬酸钾乳胶剂与扶他林均具有显著的抗炎镇痛作用.自制的双氯芬酸钾乳胶剂的耳肿胀抑制率和疼痛抑制率高于阳性药扶他林，但双氯芬酸钾乳胶剂的小鼠腹部皮肤毛细血管通透性抑制率低于阳性药扶他林.结论自制双氯芬酸钾乳胶剂与扶他林比较具有较强的全身抗炎镇痛作用.

双氯芬酸钾；乳胶剂；抗炎作用；镇痛作用

【引用格式】赵南晰，王曼力.双氯芬酸钾乳胶剂的抗炎镇痛作用研究[J].北华大学学报(自然科学版)，2016，17(5)：644-647.

非甾体抗炎镇痛药(non-steroidal anti-inflamm- atory drug，NSAID)是在世界上应用最为广泛的一种处方药，仅美国年销售额就可达20亿美元.但NSAID副反应发生率较高，美国的一项调查显示：在住院患者中有约有8%的患者死于与NSAID相关的胃肠道溃疡综合征.具有消化道溃疡出血病史的患者在应用NSAID时，消化道再次出血的发生率极高.另外还有很多研究[1-2]报道了NSAIDs的不良反应发生情况.由于NSAIDs胃肠道毒副反应极其常见，使它们在临床上的应用受到了一定限制.因此，NSAIDs经皮给药系统研究成为近年的研究热点.

经皮给药可提高患者的可接受性，能显著提高某些具有肝脏首过效应药物的生物利用度，降低胃肠道不良反应，能保持长效、药物释放速度恒定，能降低给药次数，利于自主用药，并能在发生不良反应时及时停止用药[3].双氯芬酸(diclofenac acid)为苯乙酸类衍生物，是一种常用的非甾体抗炎药，1988年在美国上市，主要用于治疗骨关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎以及其他由于创伤或手术引起的疼痛等.双氯芬酸可局部应用，这种药物肝首过效应大，口服后只有50%的药物能够进入体循环，且口服胃肠道副反应高达10%.同时双氯芬酸还具备可以制成经皮给药制剂的特点：生物利用度低，生物半衰期短和剂量小等.目前，市售的双氯芬酸局部外用制剂都是以双氯芬酸盐为主药，如双氯芬酸吡咯烷软膏、双氯芬酸钠凝胶、双氯芬酸二乙胺贴剂和乳胶剂(扶他林，Votalin)等.其中，扶他林乳胶剂的市场占有率最高.本研究中将以扶他林为阳性对照，考察自制的双氯芬酸钾乳胶剂的抗炎镇痛作用.

1　材料与方法

1.1试药

受试药：双氯芬酸钾乳胶，规格：10 mg/g(按双氯芬酸钠计)，自制；空白对照：空白乳胶，空白乳胶给药面积与受试药相同，自制 ；阳性对照药：扶他林(双氯芬酸二乙胺乳胶剂)，规格：10 mg/g(按双氯芬酸钠计，北京诺华制药有限公司).

1.2实验动物

昆明种小鼠，雄性，18～22 g，由长春生物制品研究有限责任公司实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(吉)2011-0007.在良好通风的环境下饲养，实验室温度为(20±2)℃，实验室相对湿度为(50±5)%.所有动物均能自由地摄取饲料和生活用水，颗粒饲料由长春生物制品研究有限责任公司实验动物中心提供.

1.3试剂

二甲苯(AR)(麦克林(中国)有限公司)；甲醛溶液(AR)(天津市永大化学试剂有限公司)；依文思蓝(国药集团化学试剂有限公司)；丙酮(AR)(沈阳市华东试剂厂)；冰乙酸(AR)(沈阳化学试剂厂).

1.4仪器

微量移液器(上海求精生化试剂仪器有限公司)；ESJ110-4B 电子分析天平(沈阳龙腾电子有限公司)；TDZ4-WS型低速自动平衡离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；7200型可见分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司).

1.5双氯芬酸钾乳胶剂对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

昆明种小鼠，雄性，体质量18～22 g，30只，随机分成3组，每组10只.在试验前12 h于小鼠腹部相同部位剃毛，脱毛面积约1.5 cm×1.5 cm.

受试组于小鼠腹部剃毛区给予双氯芬酸钾乳胶剂(自制)0.5 mL，然后用纱布覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定,给药面积为1.2 cm×0.6 cm.空白组给予空白乳胶0.5 mL，给药方法和给药面积与给药组相同.阳性对照组给予扶他林(双氯芬酸二乙胺乳胶剂)0.5 mL，给药方法和给药面积与给药组相同.末次给药1 h后，将二甲苯涂于小鼠右耳，20 min后处死小鼠，用打孔器打下耳片，称重，计算耳肿胀度(mg)及肿胀抑制率(%)[4]：

肿胀度(mg)= 右耳耳片重(mg)-左耳耳片重(mg)；

肿胀抑制率= [空白组平均耳片重(mg)-给药组平均耳片重(mg)]/空白组平均耳片重(mg)×100%.

1.6双氯芬酸钾乳胶剂对二甲苯致小鼠腹部皮肤毛细血管通透性的影响

动物分组及给药方式同1.5.末次给药1 h后，去除药物及其固定物，小鼠尾静脉注射依文思蓝溶液，剂量10 mL/kg，而后在小鼠腹部的给药处涂抹二甲苯，剂量20 μL/只.脱颈椎处死小鼠后剪下其腹部呈蓝色的皮肤，捣碎，用70%丙酮水溶液4 mL浸泡，浸泡两次，2 h/次，合并浸泡液，1 500 r/min离心10 min，取上清液，590 nm处测其光密度值[5-6].

抑制率=空白组吸光度-给药组吸光度/空白组吸光度×100%.

1.7双氯芬酸钾乳胶剂对醋酸致小鼠扭体反应的影响

动物分组及给药方式同1.5.给药1次/h，连续给药3次，末次给药1 h后除去药物，并用清水擦拭给药部位.而后小鼠腹腔注射乙酸溶液(临用前配制)，剂量0.1 mL/10 g，在安静的环境中，记录小鼠在腹腔注射后20 min内的扭体次数(writhing response frequency，WRF)，并计算疼痛抑制率[7-8](pain inhibition ratio，PIR)(%).

疼痛抑制率=(空白组扭体反应次数-给药组扭体反应次数)/空白组扭体反应次数×100%.

1.8统计学方法

2　结　　果

2.1双氯芬酸钾乳胶剂对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用

与空白组相比，双氯芬酸钾乳胶剂与扶他林均能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀，且双氯芬酸钾乳胶剂耳肿胀抑制率高于阳性药扶他林.见表1.

2.2双氯芬酸钾乳胶剂对二甲苯致小鼠腹部皮肤毛细血管通透性的抑制作用

与空白组相比，双氯芬酸钾乳胶剂与扶他林均能显著抑制二甲苯所致的小鼠腹部皮肤毛细血管通透性，且双氯芬酸钾乳胶剂的小鼠腹部皮肤毛细血管通透性抑制率(57.64%)低于阳性药扶他林(69.95%).见表2.

2.3双氯芬酸钾乳胶剂对醋酸致小鼠扭体反应的抑制作用

与空白乳胶组比较，自制的双氯芬酸钾乳胶剂和阳性对照组均可显著减少由醋酸引起的小鼠扭体次数，其疼痛抑制率分别为67.80%(P<0.001)和45.52%(P<0.05)，并且双氯芬酸乳胶剂组的疼痛抑制率高于阳性对照组(P<0.05).见表3.

表1　双氯芬酸钾乳胶剂对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

注：与空白乳胶剂组比较，*：P<0.05，**：P<0.01

表2　双氯芬酸钾乳胶剂对二甲苯致小鼠腹部皮肤毛细血管通透性的影响

注：与空白乳胶剂组比较，*：P<0.05，**：P<0.01

表3　双氯芬酸钾乳胶剂对醋酸致小鼠扭体反应的影响

注：与空白乳胶剂组比较，*：P<0.05，**：P<0.01

3　讨　　论

现今，NSAIDs的外用制剂已经广泛地应用于镇痛和抗炎.双氯芬酸是一种常用的NSAIDs，经常用于治疗各种急性的或长期的疼痛和炎症.在制剂中，双氯芬酸通常是以钠盐或钾盐的形式存在，双氯芬酸具有弱酸性，而且其血浆蛋白结合率高，分布容积低，更易于在深部的炎性区域浓集.据报道，双氯芬酸在关节处的浓度是其在血浆中的20倍以上.像其他的NSAIDs一样，双氯芬酸通过抑制环氧化酶的活性，进一步抑制前列腺素的生成.双氯芬酸口服制剂在临床上有近30 a的应用历史，而且其有效性和良好的耐受性已经得到充分证实.然而，某些患者口服双氯芬酸后会出现全身性副作用，尤其是需要长期大剂量服用这种药物时.为降低副作用的发生率，研究人员研制了双氯芬酸局部外用制剂，以达到向疼痛和炎性区域定向输送药物的目的，同时达到降低药物在全身系统中吸收的目的.

双氯酸钾凝胶经过皮肤局部外用给药，可方便患者使用、减少胃肠刺激，不经肝首过代谢，肝毒性小[9].双氯芬酸是一种常用的弱肝酸性非甾体抗炎药，易与碱成盐.双氯芬酸自身的脂溶性较高，成盐后可以在一定程度上改变其溶解性能，适度增加其水溶性.药物局部吸收的首要屏障是表皮,表皮是由角质层和真皮层组成，脂溶性药物易于通过角质层，而药物通过水性真皮层则必须具备一定的水溶性.在过去二十年中，人们致力于双氯芬酸盐的研制[10-15]，制备出双氯芬酸的钠盐、钾盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二乙胺盐、三乙胺盐、吡咯烷醇胺盐等.在这些盐中，有一些双氯芬酸盐与双氯芬酸相比，具有更低的熔点和较高的水中溶解度，因此更易于经皮吸收.目前上市的双氯芬酸外用产品多数为其盐.本研究中，自制的双氯芬酸钾乳胶剂的耳肿胀抑制率和疼痛抑制率高于阳性药扶他林，但双氯芬酸钾乳胶剂的小鼠腹部皮肤毛细血管通透性抑制率低于阳性药扶他林，造成这一现象的原因可能与双氯芬酸钾和双氯芬酸二乙胺的性质有关.双氯芬酸钾的水中溶解度高，而脂溶性低于双氯芬酸二乙胺，因此，两者相比，双氯芬酸钾经皮吸收进入血液循环的速度更快一些，从而能发挥更好的全身作用；与此相反，双氯芬酸二乙胺更易于在局部组织中滞留，从而局部抗炎作用更高.另外，在本研究中，虽然未对药物的药动学参数进行测定，但通过药效实验的结果我们可以推断，双氯芬酸钾乳胶能够及时、足量地将主药输送到靶部位以发挥其抗炎镇痛作用.

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【责任编辑：陈丽华】

On the Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Diclofenac Potassium Emulgel

Zhao Nanxi，Wang Manli

(School of Pharmacy，Beihua University，Jilin 132013，China)

Objective To study the anti-inflammatory and analgesic effects of self-made diclofenac potassium emulgel，and to evaluate the efficiency of the emulgel.Method The anti-inflammatory and analgesic effects were compared between the self-made diclofenac potassium emulgel and purchased Votalin emulgel based on three animal models，including ear swelling and capillary permeability of abdominal skin induced by xylene in mice，and writhing response induced by acetic acid in mice.Results Compared with the control group，both the self-made emulgel and purchased emulgel exhibited obvious anti-inflammatory and analgesic effects.The ear swelling inhibition ratio and pain inhibition ratio of the self-made emulgel were both higher than those of vltaren emulgel.While，the capillary permeability inhibition ratio of the self-made was lower than that of the positive control.Conclusion Compared with Votalin，the self-made diclofenac potassium emulgel has better anti-inflammatory and analgesic effects in the whole body.

Diclofenac potassium；emulgel；anti-inflammatory effect；analgesic effect

1009-4822(2016)05-0644-04

10.11713/j.issn.1009-4822.2016.05.019

2016-02-04

吉林省科技发展计划项目(20140520048JH，20130522054JH).

赵南晰(1985-)，女，博士，讲师，主要从事经皮给药系统研究，E-mail：nancy_z3023@126.com；通信作者：王曼力(1979-)，女，博士，讲师，主要从事经皮给药系统研究，E-mail：bhwangml@163.com.

R971.1；R969.4

A