茉莉花窨制前后总黄酮含量的测定*

2016-10-16代容春林荣华

福建轻纺 2016年8期

关键词：芦丁黄酮类黄酮

代容春，林荣华

（福建师范大学生命科学学院，福建福州 350108）

茉莉花窨制前后总黄酮含量的测定*

代容春，林荣华

（福建师范大学生命科学学院，福建福州 350108）

以正交试验法优化后的超声波提取工艺提取总黄酮，聚酰胺吸附提纯，芦丁为标准品，用分光光度法于510nm处测定了茉莉花窨制前后的总黄酮含量。结果表明：芦丁浓度在10.0～50.0mg .L-1内线性关系良好，回归方程为y=0.0101x+0.0047，相关系数R2=0.9991，平均回收率为100.43%（RSD=4.397%）。窨制前的茉莉花总黄酮含量为2.806%，窨制后的茉莉花总黄酮含量为2.656%；差异显著性分析可知，2个样品总黄酮含量差异不显著。研究结果可为利用茉莉花渣生产黄酮类药用成分提供科学根据。

茉莉花；窨制；总黄酮；含量测定；正交试验

茉莉(Jasminum sambac(L.)Ait)为木犀科多年生常绿灌木，多分布于热带、亚热带和温带地区，我国以江苏、浙江、福建、台湾、广东、四川、云南等地分布最为广泛[1]。茉莉的根、叶、花均有药用价值。根有麻醉、止痛之功效，可以用于治疗失眠、头痛、龋齿、跌打损伤；叶用于治疗外感发热、腹胀腹泻；花可用于治疗腹胀腹泻、结膜炎、皮炎、疮毒等[2-4]。关于茉莉的药用成分多数研究者认为主要为黄酮类与多糖类化合物，韦英亮等的初步研究也表明，从茉莉花渣中所提取的黄酮化合物对某些人类肿瘤细胞在体外试验时表现出一定的细胞毒性 [5-6]。

茉莉花是我国具有相当经济价值的重要花卉，大量栽培主要用于采摘茉莉花以窨制茉莉花茶或加工成价值昂贵的天然香精。目前，我国茉莉花茶年产量稳定在11～12万t之间，由此产生了大量的茉莉花渣[7]。茉莉花渣是茉莉花苞经过花茶窨制后的废弃物，是茉莉花茶加工过程中主要的下脚料，在此过程中有20%～25%的芳香油物质被茶叶吸收，其它化学成分的变化尚未见详细报道。本研究采用超声波提取法提取总黄酮，比色法测定茉莉花窨制前后总黄酮含量的变化，为合理利用茉莉花渣，实现废物循环利用和农业的可持续发展打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料

芦丁：C27H30O16·3H2O，相对分子质量为664.57，上海试剂二厂生产。聚酰胺粉：80～100目，以70%乙醇预处理。

窨制前的茉莉花（样品I）和窨制后的茉莉花（样品II），由福州春伦茶业有限公司提供。样品处理方法为自然晾干，80℃恒温干燥2 h后粉碎过筛。

1.2 仪器

UV-1100型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）、RE-52CS型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、数控超声波清洗器KQ3200-DV（昆山市超声仪器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 超声波提取工艺的优化

以窨制前的茉莉花为材料，在单因素试验的基础上，选用正交表L9（34）对超声波提取工艺的4个主要因素（温度、时间、乙醇浓度、料液比）进行正交实验，各因素的水平表见表1。

表1 正交试验因素水平表

1.3.2 总黄酮的提取及纯化

称取过60目筛的样品干燥粉末10 g，按表1正交试验结果获得的最佳超声波提取工艺提取总黄酮，过滤后滤渣重复提取1次。合并滤液，减压浓缩至适量，以石油醚反复萃取脱脂，弃去醚层。滤液进一步浓缩至浸膏状，用70%乙醇溶解并定容至100ml。

准确吸取提取液5ml，加200mg聚酰胺粉搅匀，转移到装有400mg聚酰胺粉的砂芯层析柱中，用乙醇梯度洗脱，洗脱顺序为35%乙醇（20ml）→55%乙醇（20ml）→75%乙醇（20ml）→95%乙醇（20ml）→无水乙醇（20ml）。收集各级洗脱液，合并浓缩，用70%乙醇定容至100ml，备测。

1.3.3 最大吸收波长的选择

以NaNO2、Al(NO3)3、NaOH为显色剂，分别作样品I、样品II提取液以及芦丁标准品的吸收曲线，三者均在510nm处有一强吸收，因此选择510nm为测定波长。

1.3.4 芦丁浓度与吸光度的关系确定

精密称取芦丁标样10mg（80℃干燥至恒重），用70%乙醇溶解，然后转移至100ml容量瓶中，70%乙醇定容，摇匀，即得0.1mg .mL-1的芦丁标液。分别取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml芦丁标液于6个10ml容量瓶中，各加70%乙醇使成5ml，加入5%NaNO2溶液0.3ml摇匀，放置6min后，加10%Al(NO3)3溶液0.3ml，摇匀放置6min后加入1 mol .L-1NaOH溶液4ml，再加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15min后于510nm波长处测定OD值，以芦丁空白为参比，绘制标准曲线。

1.3.5 总黄酮含量的测定

分别吸取样品I和样品II提取液1.0ml于10ml容量瓶中，按标准芦丁—吸光度测定法，以样液空白参比，于510nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算各样液总黄酮含量，最后换算成各样品的总黄酮含量百分率，即得率（以芦丁计）。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的制作

以OD值为纵坐标，芦丁标准品含量（mg.L-1）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y=0.0101x+0.0047,相关系数R2=0.9991，表明芦丁浓度在10.0～50.0mg.L-1具有良好的线性关系，见表2。

表2 芦丁标准曲线

表3 正交实验结果表

表4 茉莉花窨制前后总黄酮含量测定结果（按芦丁计算）

表5 加标回收试验结果

2.2 超声波提取工艺的优化

以总黄酮得率为指标，L9（34）正交试验结果见表3。由正交试验结果可以看出，6号样品总黄酮的得率最高，为2.850%。极差分析可知，各因素对总黄酮提取得率影响的大小顺序为：A>B>D>C。试验较优条件为A2B3C1D2，即茉莉花总黄酮超声波提取的最佳工艺为温度55℃、时间90min、乙醇浓度70%、料液比1:15。

2.3 总黄酮含量的测定

2个样品总黄酮含量测定结果见表4。窨制前的茉莉花总黄酮含量为2.806%；窨制后的茉莉花总黄酮含量为2.656%。经LSD检验进行差异显著性分析可知，2个样品总黄酮含量差异不显著（P=0.05）。

2.4 显色稳定性试验

各样品提取液及芦丁标准品显色反应较稳定。在45min内每隔15min测定其吸光度，吸光度值均未发生改变。

2.5 加标回收试验

称取以上样品6份，分别添加质量浓度为0.1mg.mL-1的芦丁标样3.9ml，按前述操作进行提取、层析、测定。以加标测得量减去原样含量，除以加标量，计算回收率，其结果见表5。平均回收率为100.43%，标准差为4.416%，相对标准差为4.397%。

3 讨论

早期茉莉花渣无有效的利用途径，除了少量用做猪饲料外，有的被排放江河，有的长期堆放后腐败，造成资源的极大浪费和环境的污染[8]。研究以正交试验法优化后的超声波提取工艺提取总黄酮，利用聚酰胺吸附提纯与常用的硝酸铝显色法相结合，测定茉莉花窨制前后的总黄酮含量。结果表明，窨制前的茉莉花总黄酮含量为2.806%，窨制后的茉莉花总黄酮含量为2.656%，二者差异不显著。黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[9-14]。鉴于窨制后的茉莉花渣资源丰富，黄酮含量较高，药用价值大，作者认为可以大力开发利用其黄酮类药用成分，为利用茉莉花渣生产黄酮类药用成分提供科学依据。

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10.3969/j.issn.1007-550X.2016.08.001