多囊卵巢综合征内分泌异常与CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞平衡的关系*

胡艳红徐忠芳

多囊卵巢综合征内分泌异常与CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞平衡的关系*

胡艳红①徐忠芳①

目的：研究多囊卵巢综合症内分泌异常与CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞平衡的关系。方法：将在本院就诊的60例多囊卵巢综合征患者分为胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组，并选取30例健康女性为对照组，分别检测T细胞及其细胞内因子、性激素及胰岛素水平并做出比较。结果：三组患者CD8+CD28+T细胞与IFN-γ含量比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；三组患者CD8+CD28-T细胞及IL-4含量比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；三组患者的FSH水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）；三组患者LH、Insulin和HOMA-IR水平比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：多囊卵巢综合征患者的免疫平衡表现为对CD8+CD28-T细胞的过度抑制，因此该细胞数量的升高与内分泌紊乱及胰岛素抵抗密切相关。

多囊卵巢综合征； 胰岛素抵抗； CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞； 性激素

First-author’s address：The Maternity and Child Care Hospital of Pingxiang City，Pingxiang 337055，China

多囊卵巢综合征是一种生殖功能障碍与糖代谢异常并存的内分泌紊乱综合征。因排卵障碍而致不孕则是多囊卵巢综合征的主要临床表现，多囊卵巢综合征的确切病因不详，目前认为是卵巢产生过多雄激素，而雄激素的过量产生是由于体内多种内分泌系统功能异常协同作用的结果，其主要症状有：肥胖、月经失调、双侧卵巢增大、多毛、不孕等。也有研究表明部分患者是因为遗传因素导致的多囊卵巢，且多囊卵巢综合症发病呈年轻化倾向，而多囊患者的CD8+T细胞亚群数量明显升高。在本研究中，笔者基于胰岛素抵抗的多囊卵巢综合症动物模型与CD8+T细胞的相关性，具体研究CD8+CD28+与CD8+CD28-T细胞两个亚群与多囊卵巢综合症患者内分泌代谢的关系［1-2］。现汇报如下。

1　资料与方法

1.1一般资料 选取2014年10月-2015年10月在本院妇产科就诊的多囊卵巢综合征患者60例，入组诊断标准为：（1）排卵或者不排卵，表现在月经走势不正常；（2）超声检查卵巢有多囊性改变；（3）雄激素过高、多毛、痤疮，或激素水平高。根据胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）进行分组（HOMAIR=空腹血胰岛素×空腹血糖/22.5），分为胰岛素抵抗组（insulin resistance，IR）和胰岛素非抵抗组（non insulin resistance，Non-IR），两组患者各30例，另选取30例体检健康、体重指数正常、无其他内分泌疾病的女性为对照组。IR组年龄20～37岁，平均（32.12±8.23）岁；Non-IR组年龄19～35岁，平均（31.45±7.45）岁；对照组年龄20～38岁，平均（32.25±8.57）岁，三组观察对象一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2检测方法

1.2.1T细胞及其细胞内因子检测 三组观察对象均在月经周期或者黄体酮撤退后出血的第2～3天（闭经患者无时间限制）空腹状态下采取肘静脉血不少于2 mL，保存于2 ℃冰箱，并于24 h内进行染色检测。仪器采用Beckman cuulter cell多色式细胞检测仪，分别检测CD8+CD28+杀伤性T细胞和CD8+CD28-抑制性T细胞的百分含量。同时测量以上两种T细胞细胞内因子γ干扰素（interferon-γ，IFN-γ）及白细胞介素（interleukin-4，IL-4）的百分含量。

1.2.2性激素及胰岛素水平的检测 使用放射免疫法检测外周血清卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）及胰岛素（insulin）水平。

1.3统计学处理 采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析，计量资料以（）表示，比较采用t检验或方差分析，计数资料采用 χ2检测，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞及其细胞因子比较 三组CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞及其细胞因子呈阶梯型变化，其中，对照组的CD8+CD28+T细胞与IFN-γ含量最高，其次为Non-IR组及IR组，三组之间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；同时，Non-IR组及IR组CD8+CD28+T细胞与对照组比较明显降低（P＜0.05），且IR组低于Non-IR组（P＜0.05）；Non-IR组及IR组IFN-γ含量均低于对照组，且IR组低于Non-IR组（P＜0.05）；对照组CD8+CD28-T细胞及IL-4含量最低，IR组最高，三组之间比较差异均有统计学意义（P＜0.05），Non-IR组及IR组含量均高于对照组，IR组高于Non-IR组（P＜0.05），见表1。

表1　三组CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞及其细胞因子比较（）

表1　三组CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞及其细胞因子比较（）

组别　CD8+CD28+T细胞　CD8+CD28-T细胞　IFN-γ（ng/mL）　IL-4（ng/mL）对照组（n=30）　13.13±4.19　16.25±6.14　9.84±4.87　15.37±5.45 Non-IR组（n=30）　10.14±3.78　20.26±7.45　6.25±3.26　19.78±7.16 IR组（n=30）　7.96±1.69　23.91±9.89　4.10±2.76　 26.70±10.87

2.2性激素及胰岛素水平比较 三组FSH水平比较差异无统计学意义（P＞0.05），三组间LH、Insulin和HOMA-IR水平比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。Non-IR组及IR组LH水平与对照组比较均明显升高（P＜0.05），但Non-IR组与IR组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。Non-IR组患者的血清Insulin水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），IR组患者血清Insulin水平明显低于Non-IR组及对照组。IR组及Non-IR组HOMA-IR指数与对照组比较明显升高（P＜0.05），见表2。

表2　三组性激素水平比较和胰岛素水平比较（）

表2　三组性激素水平比较和胰岛素水平比较（）

组别　FSH（IU/L）LH（IU/L）Insulin（U/L）HOMA-IR对照组（n=30） 6.58±2.89　9.37±3.87　11.25±4.67 1.37±0.50 Non-IR组（n=30）7.07±3.17 16.17±5.69 10.15±3.96 2.86±0.67 IR组（n=30）　7.56±3.16 18.27±7.26　7.29±2.07　4.28±0.43

3　讨论

多囊卵巢综合征由Stern-Leventhal于1235年首次报告，其主要表现为因排卵障碍导致不孕，症状有月经紊乱、闭经、多毛、肥胖等，B超可见双侧卵巢呈多囊改变［3］。多囊卵巢综合征的治疗方案分为有生育要求和无生育要求两两种，对于无生育要求的患者可以单独使用孕激素和/或与雌激素联合使用治疗，以诱发正常的月经周期，降低子宫内膜不典型增生或内膜腺癌的风险。对于有生育要求的患者治疗方向主要为在妊娠试验阴性的基础上促排和治疗基础性疾病为主。其确切发病原因不详，有学者认为与患者体内多种内分泌系统功能异常造成的雄激素过高有关，也有研究表明多囊卵巢综合征与胰岛素抵抗有一定的关系，胰岛素作为体内唯一的降血糖的激素，胰岛素抵抗可直接导致血糖的代谢紊乱，与其相关的血脂代谢异常则成为心血管疾病的危险因素。近年来，有研究表明CD8+CD28-抑制性T细胞可能与多囊卵巢综合征有关。本文就多囊卵巢综合征内分泌异常与CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞平衡的关系展开研究［4-6］。

T细胞作为一个不均一的细胞群体，分类方法有多种。其中，CD8+T细胞是体内重要的T细胞亚群之一，根据CD8+T细胞表面是否表达CD28共刺激分子，可将CD8+T细胞分为CD8+CD28+杀伤性T细胞及CD8+CD28+抑制性T细胞，即CD8+CD28+/ CD8+CD28-T细胞是属于同一细胞族具有不同表型的两个细胞亚群，且CD8+CD28+抑制性T细胞可以在抗原的刺激下转化为CD8+CD28+杀伤性T细胞，从而形成一对平衡体，健康个体CD8+CD28+/ CD8+CD28-T细胞的百分率对外周血CD8-T细胞的升高具有相同功能，然而在一些感染性疾病和慢性疾病患者则并非如此［7］。很多疾病的免疫学机制都涉及CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞，在疾病的发生和发展过程中发挥着重要作用，这些疾病包括某些肿瘤、心血管疾病和部分妇科疾病，多囊卵巢综合征包括其中。德国的Sterner等用戊酸酯诱发多囊卵巢综合征形成大鼠模型，多囊卵巢综合症大鼠模型的CD8+T细胞含量较正常组降低，并发现经过电刺激干预后，CD8+T细胞数量可增加。

对于多囊卵巢综合症性激素代谢方面的研究较多，涉及的观察指标也多，本文中选取血清卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）作为性激素的代表进行研究。在本研究中，IR组患者与Non-IR组患者FSH含量比较差异无统计意义（P＞0.05），但LH含量比较差异有统计学意义（P＜0.05），宋青等［8-9］对多囊卵巢综合征的研究结果大体一致。研究表明LH与CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞存在相关性，这说明LH与IR的关系更为密切，对于多囊卵巢综合征来说LH的临床意义更大。在后续的胰岛素增敏治疗中可以通过重点观察LH的水平变化而检测评价疗效。

近年来很多学者从免疫学角度对IR进行探讨，如Elia等［10］在多囊卵巢综合征的BALB/c小鼠模型也发现CD8+T细胞亚群数量下降，并且这种下降状态在脱氢表雄酮的诱导下得以持续，而具有IR的患者服用二甲双胍在改善内分泌代谢紊乱的同时可以使CD8+T细胞亚群数量回升，因此可见，IR 与CD8+呈一定的相关性，从T细胞免疫学入手讨论IR对多囊卵巢综合征的影响有意义［11-15］。在研究中发现CD8+T细胞及其细胞内因子呈现特征性变化——CD8+CD28+T细胞及IFN-γ相对多囊卵巢综合征患者而言可能是一个保护性因素，当患者的CD8+CD28+杀伤T细胞越高，其IR程度越低；相反，CD8+CD28-抑制性T细胞含量越高，多囊卵巢综合征患者的征患者的免疫调节治疗提供一定的依据。IR程度亦越高。这说明CD8+CD28-抑制性T细胞及其细胞因子IL-4相对多囊卵巢综合征尤其是合并IR的患者一个致病性因素［16-20］。

在本研究中笔者发现，多囊卵巢综合征患者尤其是合并IR患者的免疫平衡向CD8+CD28-抑制性T细胞倾斜，该细胞数量及其胞内细胞因子IFN-γ升高，主要表现为抑制效应，这证明多囊卵巢综合征的合并IR的病理生理过程有CD8+CD28-抑制性T细胞的参与。

综上所述，本研究从免疫学角度在一定方面阐述了免疫失衡与性激素代谢紊乱的关系，启发CD8+CD28+T细胞可能是多囊卵巢综合征患者治疗的一个靶细胞，这可为多囊卵巢综合治疗提供相关依据。

［1］施晓波，张金风，符书馨.多囊卵巢综合征患者外周血T淋巴细胞亚群的测定及与甾体激素相关性的研究［J］.中国现代医学杂志，2008，18（16）：2363-2365.

［2］王增杰，周敏.多囊卵巢综合征的病因研究进展［J］.中国计划生育学杂志，2009，16（7）：440-442.

［3］李美芝.多囊卵巢综合症的诊断与治疗［J］.中华妇产科杂志，2002，15（7）：444-446.

［4］ Stener-Victorin E，Lindholm C.Immunity and beta-endorphin concentrations in hypothalamus and plasma in rats with steroid-induced polycystic ovaries：effect of low-frequency electroacupuncture［J］.Biology of Reproduction，2004，70（2）：329-333.

［5］林金芳，李昕，苏椿淋.多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗的诊断方法及治疗策略［J］.中国实用妇科与产科杂志，2007，7 （9）：663-667.

［6］林忠.多囊卵巢综合征与细胞因子的相关性研究［J］.中国妇产科临床杂志，2006，7（5）：391-393.

［7］韩琳，裴毅.肿瘤患者CD+T细胞中CD28表达的研究进展［J］.现代生物医学进展，2007，7（9）：1402-1404.

［8］宋青，苟文丽.吡格列酮对胰岛素抵抗型多囊卵巢综合征患者脂肪细胞因子的影响［J］.西安交通大学学报（医学版），2010，31（2）：227-230.

［9］王丽，吕淑兰，曹缵孙.青春期与育龄期多囊卵巢综合征患者的临床对照研究［J］.西安交通大学学报（医学版），2010，45（11）：745-748.

［10］ Elia E M，Belgorosky D，Faut M，et al.The effects of metformin on uterine tissue of hyperandrogenized BALB/c mice［J］.Molecular Human Reproduction，2009，15（15）：421-432.

［11］余碧雅.C反应蛋白浓度与多囊卵巢综合征胰岛素抵抗相关性分析［J］.当代医学，2011，17（24）：123-124.

［12］裘宇容，杨春莉，陈炼波，等.原发性原发性肝癌患者CD8+CD28-和CD8+CD28+细胞亚群的分析［J］.第一军医大学学报，2002，13（1）：45-46.

［13］陈必，郭赛群，杨佩娴.原发性垂体促性腺功能低下闭经患者CD8+CD28+与CD8+CD28-T细胞平衡及其与性激素的关系［J］.现代医院，2014，14（7）：25-29.

［14］江洪，陈梦坤，何必勤.多囊卵巢综合征患者C反应蛋白与胰岛素抵抗的相关性研究［J］.海峡医学，2015，27（6）：147-149.

［15］李旻，邱红玉，孙永玉.多囊卵巢综合征的免疫学因素研究进展［J］.国外医学妇产科学分册，2003，30（1）：29-32.

［16］ Brimnes J，Allez M， Dotan I，et al.Defects in CD8+regulatory T cells in the lamina propria of patients with inflammatory bowel disease［J］.Journal of Immunology，2005，174（9）：5814-5822.

［17］张翠莲，张少娣，李杭生，等.多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗与肥胖的研究和分析［J］.中华实用诊断与治疗杂志，2012，30（9）：807-809

［18］ Ovalle F，Azziz R.Insulin resistance，polycystic ovary syndrome，and type 2 diabetes mellitus［J］.Fertility & Sterility，2002，77（6）：1095-1105.

［19］宋洋，刘永.多囊卵巢综合征进展［J］.海南医学，2008，18 （5）：137-139.

［20］李俭，罗宇迪.减重训练及口服二甲双胍对肥胖型多囊卵巢综合征的疗效［J］.中国医药指南，2013，25（11）：558-559.

Polycystic Ovary Syndrome Endocrine Abnormalities and CD8+CD28+/CD8+CD28-T Cells Balanced Relations/

HU Yan-hong，XU Zhong-fang.//Medical Innovation of China，2016，13（26）：032-035

Objective：To study the polycystic ovary syndrome endocrine abnormalities and CD8+CD28+/ CD8+CD28-T cells in balanced relationship.Method：The 60 patients in our hospital with polycystic ovary syndrome patients were divided into groups of insulin resistance and non-insulin resistant group，and 30 cases of healthy women as a control group，T cells and cytokines，hormone and insulin level were detected and compared. Result：The differences of CD8+CD28+T cells and IFN-γ content in three groups were statistically significant （P＜0.05），CD8+CD28-T cells and IL-4 content differences between the three groups were statistically significant （P＜0.05）.The difference of FSH level between the three groups was not statistically significant（P＞0.05）. The difference of LH，Insulin and HOMA-IR levels in three groups were statistically significant（P＜0.05）. Conclusion：The immune balance performance in patients with polycystic ovary syndrome for the CD8+CD28-T cells suppress excessive，so the increase in the number of cells is closely related to endocrine disorders and insulin resistance.

Polycystic ovary syndrome； Insulin resistance； CD8+CD28+/CD8+CD28-T cells； Sex hormones

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.26.009

2016-01-22） （本文编辑：蔡元元）

江西省萍乡市科技局社会发展科技计划项目（20150051）

①江西省萍乡市妇幼保健院 江西 萍乡 337055

胡艳红