干粉培养基在禽多杀性巴氏杆菌病活疫苗培养中的应用

张芷宁

（辽宁省锦州市农业信息中心，辽宁 锦州 121000）

干粉培养基在禽多杀性巴氏杆菌病活疫苗培养中的应用

张芷宁

（辽宁省锦州市农业信息中心，辽宁 锦州 121000）

商品化干粉培养基在培养中应用越来越广泛，给细菌培养提供充分营养需求，简化培养基制备过程，并可使批间次差异减少。

1　菌种及原材料

1.1菌种禽多杀性巴氏杆菌G190E40弱毒株，效检用禽多杀性巴氏杆菌C48-1强毒株。

1.2培养基青岛海博公司，巴氏杆菌干粉培养基，批号：201512

1.3试验动物3～4月龄的健康易感鸡

2　菌种制备

2.1基础种子G190E40株冻干菌种用灭菌2～5mL pH7.4马丁汤进行溶解，接入血液马丁琼脂斜面1～2支，置37℃培养18～22h。培养完成后血液马丁琼脂斜面放2～8℃普通冰箱保纯，继代时间不超过14d，在培养基上传代连续不能超过5代。

2.2一级菌种制备及纯粹检验用火焰消毒过的铂金耳将菌落混匀后接种于pH7.4加血液马丁肉汤中，置37℃培养18～22h，经纯粹检验合格后作为一级种子，保存在2～8℃普通冰箱备用。

2.3二级种子制备及纯粹检验取检验合格一级种子瓶，采用无菌方法接种到pH7.4含0.5%裂解全血的马丁汤中，然后放37℃温室培养24h，在此期间振荡2～3次，经纯粹检验合格为二级种子，种子瓶放置2～8℃冰箱保存，限时48h用完。

3　菌液培养

3.1制苗用培养基将巴氏杆菌干粉培养基用注射用水溶解后调节pH值，导入发酵罐进行121℃，30min灭菌。

3.2发酵培养将检验合格的二级菌种接入到灭菌后冷却的培养内，发酵罐设置成培养状态，温度，转数，pH值设置成自动状态（温度：37℃、转数：100转、pH值：7.5）。

3.3半成品检验纯粹检验培养结束后，取样涂片镜检，应无杂菌，用马丁琼脂作纯粹检查，应纯粹生长。

4　配苗分装

培养菌液及灭菌后的明胶蔗糖保护剂按7：1进行混合，使其明胶含量为2%、蔗糖含量4%，配苗结束后，立即进行分装。

5　冻干

分装后迅速进行冷冻真空干燥，禽多杀性巴氏杆菌病活疫苗冻干曲线：

5.1预冻接段-45℃ 3h；

5.2升华阶段（一期干燥）-45℃～20℃ 13h（板层温度，温度均匀分布）；

5.3解析干燥（二期干燥）20℃～32℃ 6h（板层温度）。

6　菌数测定（见表1、表2　）

表1　使用巴氏杆菌干粉培养基培养批次菌数情况（每羽份含活菌数用应为2000万个）

表2　使用常规培养基培养批次菌数情况（每羽份含活菌数用应为2000万个）

7　安全检验（见表3、表4　）

用20%铝胶生理盐水稀释为1mL含100羽份，用3～4月龄的健康易感鸡4只，各肌肉注射1mL，观察10～14d，应全部健活。

表3　使用巴氏杆菌干粉培养基培养批次安检情况

表4　使用常规培养基培养批次安检情况

8　免疫原性（见表5、表6　）

用3～4月龄的健康易感鸡4只，各肌肉注射用20%铝胶生理盐水稀释的2000万个活菌，14d后，连同条件相同的对照鸡2只，各肌肉注射致死量的C48-1强毒菌液，观察10～14d，对照鸡全部死亡，免疫鸡至少保护3只为合格。

表5　使用巴氏杆菌干粉培养基培养批次效检情况

表6　使用常规培养基培养批次效检情况

9　结论

通过对比试验，不管是在活菌培养，还是在安检、效检方面，商品化干粉培养基对于禽多杀性巴氏杆菌活疫苗的培养均与常规培养基无明显差异，可以推广使用。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.09.011