不同种家兔用于生物制品热原检查的比较研究

曾　艳，乔月，孙　阳，崔　越，杨红育

（长春生物制品研究所有限责任公司，吉林 长春 130062）

不同种家兔用于生物制品热原检查的比较研究

曾艳，乔月，孙阳，崔越，杨红育⋆

（长春生物制品研究所有限责任公司，吉林 长春 130062）

目的：选择符合生物制品热原检查要求的家兔。方法：按照《中国药典》三部（2015年版）中规定的热原检查法进行：取灰兔和白兔，用同一剂量（3mL/kg）的抗狂犬病血清和破伤风抗毒素及氯化钠注射液（10mL/kg），分别注入家兔体内，每隔30min测量家兔体温1次，连续测量6次，以6次体温最高1次减去正常体温即为该家兔升高温度，以升高温度或升高温度的总和判定结果。结果：灰兔和白兔注射抗狂犬病血清，体温检测结果两者之间相同，无明显差别。但3批试验中，均有1批判为不合格，2批判为复试。灰兔和白兔注射破伤风抗毒素及氯化钠注射液，两者检测结果也相同，无明显差别，且全部试验均判为合格。结论：灰兔和白兔在生物制品热原检查中均可使用。

热原检查；生物制品；家兔

家兔热原检查法是目前世界许多国家药典规定的热原检查的法定方法。《中国药典》规定的热原检查法是将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定的时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品所含热原的限度是否符合规定的一种方法。

影响家兔热原检查法检查结果的因素除家兔饲养环境、试验环境及试验控制外，家兔的来源、品种和质量对热原检查结果也有很大影响。为了选择符合生物制品热原检查要求的家兔，本文选取我公司饲养的普通级青紫兰家兔（简称灰兔，以下同），和普通级日本大耳白家兔（简称白兔，以下同）。按中国药典规定的热原检查法，对我公司生产的抗狂犬病血清，破伤风抗毒素及氯化钠注射液进行了热原检查的比较研究，结果报道如下：

1　材料与方法

1.1试验用家兔

灰兔和白兔均由我公司动物室提供，生产许可证编号：SCXK（吉）2008-0009使用许可证编号：SYXK（吉）2008～0009。健康合格，无孕雌兔，体重1.7～2.5kg，用同一饲料饲养。在检查供试品前7日预测体温，进行挑选，挑选条件与检查供试品时相同，仅不注射供试品，每隔30min测量体温1次，连测8次，选8次体温均在38.0～39.8℃，且最高与最低温差不超过0.5℃者用于本试验热原检测。

1.2供试样品

供试样品均由我公司生产：抗狂犬病血清（半成品）批号：20070809、20070810、20071119，破伤风抗毒素批号：20100818-1、20100816-1、S201201-1，氯化钠注射液批号：1111150203、1010170209、1105050101。

1.3试验器具

供试验的所有器具均经过250℃至少30min或180℃至少2h干烤、灭菌、除热原。

1.4正常体温检测

试验家兔禁食2h以上，开始测定正常体温，共测2次，每次间隔30min，以两侧体温平均值作为该兔的正常体温或称基础体温。

1.5热原检查试验

正常体温检测后15min内，每种供试品各取家兔3只，用同一剂量注入家兔体内，每隔30min测量体温1次，连测6次，以6次体温最高1次减去正常体温即为家兔体温升高温度。以升高温度或升高温度总和测定结果。

1.6结果判定

按《中国药典》进行：3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和不超过1.4℃判为合格。3只家兔中，有1只体温升高达0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔升温总和超过1.4℃判为复试。3只兔中，有2只体温升高0.6℃或0.6℃以上，或3只兔升温总和为1.8℃或超过1.8℃判为不合格。

2　结果

2.1灰兔白兔注射抗狂犬病血清检测结果

灰兔和白兔各取3只，并用同一批抗狂犬病血清，相同剂量3mg/kg，分别注入家兔体内，按同样方法连续对三批抗狂犬病血清进行检测，检测结果见表1。

表1　三批抗狂犬病血清检测结果

从表1可见，灰兔和白兔用三批抗狂犬病血清注射后，体温检测结果相同，无明显差别。在3批试验中，均有1批判为不合格，2批判为复试，均未达到判定合格的标准。

2.2灰兔白兔注射破伤风抗毒素检测结果

灰兔白兔按上述方法，分别注射三批破伤风抗毒素（3mL/kg），体温检测结果如表2。

表2　三批破伤风抗毒素的检测结果

表2结果表明，灰兔和白兔用破伤风抗毒素注射后，体温检测结果两者相同，无明显差别，且全部试验均达到了合格标准。

2.3灰兔白兔注射氧化钠注射夜检测结果

灰兔白兔分别注射三批氯化钠注射液（10mL/kg），体温检测结果如表3。表3结果表明，灰兔和白兔用氯化钠注射后，体温检测结果两者也相同，无明显差别，且全部试验均达到了合格标准。

表3　三批氯化钠注射液检测结果

3　讨论

用我公司饲养的灰兔和白兔，对我公司生产的抗狂犬病血清（半成品）进行了热原检测，检测结果两种家兔相同，无明显差别，但在3批检测中均有1批试验判为不合格，2批判为复试，均未达到《中国药典》规定的合格标准，其原因可能是本试验采用的抗狂犬病血清是半成品，成份复杂或与家兔个体差异有关。

家兔热原检查法是世界许多国家检查热原的法定方法，也是我国生物制品热原检查的常规手段。家兔是生物制品检查热原和效价测定等常用的动物，但家兔来源、品种、质量直接影响检查和测定的结果。

本文采用我公司饲养的灰兔和白兔，对我所生产的抗狂犬病血清，破伤风抗毒素及氯化钠注射液三种生物制品进行了热原的检测，检测结果表明，使用白兔灰兔检测结果相同，均无明显差别，提示这两种家兔在生物制品热原检测中均可使用。

［1］董培智，等.现行版中、美、英、欧、日五部药典中热原检查法比较［J］.中国药品标准，2010，02：135-138.

［2］Chinese pharmacopoeia commission（chpc），Chinese pharmacopoeia （volume III）［S］.Beijing；Chinese Medical Science and Technology press，2005：Appendix 77-78.

［3］国家药典委员会编，中华人民共和国药典2015年版三部通则1142热原检查法：153-154北京，中国医药科技出版社.

［4］徐长金.影响家兔法检查热原的诸因素［J］.中国医院药学杂志，1985，08：29-30+48.

［5］朱社敏，等.热原用兔敏感性检查方法的探讨［J］.中国现代应用药学，2010，10：931-936.

［6］Charles river laboratories in viro pyrogen test instruction sheet. ［ER］.Endosafe tiems 2002，June，9（2）.

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.09.012

曾艳（1963～），医学生物学工程师，主要从事生物制品热原检定工作