芹菜山楂汁对非酒精性脂肪肝模型小鼠血压、血脂、脂肪肝形成的影响

2016-10-06郎雪楠陈雪婷董婉维张梅英中国医科大学实验动物部沈阳110001

实验动物与比较医学 2016年2期

郎雪楠, 陈雪婷, 董婉维, 张梅英（中国医科大学实验动物部, 沈阳110001）

郎雪楠, 陈雪婷, 董婉维, 张梅英
（中国医科大学实验动物部, 沈阳110001）

目的探讨芹菜山楂混合提取液对非酒精性脂肪肝模型小鼠血压、血脂以及脂肪肝形成的影响。方法30只3周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、高脂组和高脂饲料合并芹菜山楂汁灌胃组。饲养8周后进行血压、血脂、肝组织病理学检测。结果高脂组小鼠血压、血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）较对照组有显著的升高（P＜0.05），部分小鼠出现肝脂肪变性；灌胃组小鼠血压、血脂各项指标较对照组有显著升高, 但低于高脂组（P＜0.05）, 且没有明显肝脂肪变性。结论芹菜山楂汁具有降血脂、降血压和延缓脂肪肝形成的作用。［关键词］芹菜山楂汁；高脂饮食；血压；血脂；脂肪肝

随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，高血压、高血脂、脂肪肝的发病率不断升高，高脂饮食是引起上述几种疾病的常见诱因之一。芹菜Apium graveolens）属伞形花科蔬菜，性凉，含有丰富的黄酮类化合物，具有降压安神、降血脂、保护心血管、增强免疫等功效［1］。山楂（Crataegus pinnatifida Bunge）为蔷薇科植物山楂的成熟果实，其性微温, 味酸, 归脾、胃、肝经, 研究表明山楂有扩张血管和降压，增强心肌调节血脂及胆固醇含量的功能［2］。梁华等［3］、袁圆等［4］已证实两种植物单独使用均有降血压、降血脂作用。本实验试将芹菜性凉, 山楂性微温的饮食特点相结合，将二者汁液混合提取后进行灌胃，观察其对非酒精性脂肪肝模型小鼠血压、血脂、和脂肪肝形成的影响。

1　材料与方法

1.1动物分组与饲养

3周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠30只, 体质量13±1.5 g, 购自北京维通利华实验动物有限公司［SCXK（京）2012-0001］。每笼5只, 饲养在中国医科大学实验动物部屏障系统内, 室温23±3 ℃, 相对湿度40%～70%, 明暗各12h［SYXK（辽）2013-0007］。

1.2饲料

SPF大、小鼠生长繁殖饲料，购自北京科澳协力饲料有限公司。高脂饲料成分为10%猪大油，2%胆固醇，2%蛋黄，10%蔗糖，0.5%食盐，5%花生，70.5%大、小鼠生长繁殖饲料，购自北京科澳协力饲料有限公司。

1.3主要仪器

电子称（JA10003）、离心机（TGL-16）、鼠尾无创血压测定仪（BP-2010 Series）、全自动分析仪（TBA-120FR）、Olympus生物显微镜、组织匀浆器（IKAT10B）、切片机（美康HM315）、小鼠灌胃器（ZS0172）、榨汁机（JYZ-D57）。

1.4主要试剂

总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司。

1.5山楂芹菜水提物制备

市售芹菜、山楂各250 g，清洗，山楂去核，混合后加入300 mL蒸馏水，用组织匀浆器破碎后榨汁机榨汁500 mL，过滤掉残渣得到250 mL汁液，用0.22 μm的滤膜过滤后在超净台内分装，冷藏备用。

1.6实验方法

将30只动物按照随机数字表法分为3组，对照组10只给予正常饲料，高脂组10只给予高脂饲料，灌胃组10只给予高脂饲料且每日早晨灌胃山楂芹菜汁（0.2 mL/10 g）［5］，所有动物饲养8周后进行血压、血脂、肝脏病理学检查。

1.6.1血压检测运用鼠尾无创血压测定仪，采用周期性阻断小鼠尾部血流的方法，进行小鼠无创血压测量。

1.6.2血脂检测小鼠禁食12 h，眼眶取血每只约0.3～0.6 mL于干燥1.5 mL离心管内，室温静置30 min后离心（3 000 r/min, 10 min）［6］，分离血清。应用全自动生化分析仪检测小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平。

1.6.3病理学检查饲养8周后处死取部分肝脏组织，分别浸泡于质量分数4%多聚甲醛溶液中固定,液体石蜡包埋组织，切片机切片贴在载玻片上，HE染色，光镜下观察，按文献方法判断［7］。

1.7统计方法

2　结果

2.1小鼠血压

由表1可见高脂组血压明显高于对照组（P＜0.05）,灌胃组血压高于对照组但低于高脂组（P＜0.05）。

2.2小鼠血脂

由表2可见高脂组小鼠血脂各项指标较对照组相比有显著的升高（P＜0.05），灌胃组小鼠血清血脂水平高于对照组但低于高脂组（P＜0.05）。

表1　小鼠血压测定结果　　　　mmHg

表2　小鼠血脂测定结果　　　　mmol/L

2.3肝脏组织病理学结果

大体解剖可见对照组小鼠肝色暗红、被膜光滑、边缘锐利、质韧；高脂组小鼠肝脏体积明显增大, 包膜紧张, 肝外观呈红黄色, 边缘变钝, 切面略带油腻感；灌胃组小鼠肝脏体积稍增大, 包膜稍紧张,边缘钝圆。光镜下可见对照组小鼠肝脏未见异常,肝小叶结构清晰, 肝细胞索排列整齐, 肝窦正常, 肝细胞无明显病变（图1A、a）；高脂组小鼠肝细胞胞质中出现脂肪变性, 肝细胞索紊乱, 肝小叶内有炎症细胞浸润, 小叶界限不清（图1B、b）；灌胃组小鼠没有肝细胞脂肪变性，肝细胞微见肿胀（图1C、c）。

3　讨论

高血压、高血脂等慢性病均属于非传染性流行病, 严重危害人类健康。然而这些疾病的发生多与环境和不良饮食习惯相关，在我国特别是经济发达地区以高脂饮食为主的饮食结构已经逐步取代了低脂高纤维饮食［8］, 高血压、高血脂的发病率也在日益升高且逐渐出现低龄化趋势。鉴于高血压、高血脂是引发心脑血管病变的危险因素之一, 且高血脂是引发脂肪肝导致肝细胞纤维化乃至肝硬化的危险因素之一, 为了降低此类疾病的发生率, 世界各国高度重视对普通食品中添加功能性添加物的研发。

目前，临床上已经有很多治疗高血压和高血脂的药物，从药物对机体的影响上来看，多数降压降脂药都会有一定的副作用，如引起心悸、心率变缓等，对肾功能不全者也有一定的危害，不宜长期使用。且部分药物在降压的同时还会出现升高血脂的作用，部分降胆固醇药物对肝脏又有一定的危害。世界卫生组织指出医药在健康中只起8%的作用，而类似高血压这样与生活方式密切相关疾病，科学合理的膳食结构会起到47%的防治作用，因此研发具有降压降脂功效的具有药食两用的中药保健食品已成为一个重要的研究方向。芹菜和山楂这两种食材比较常见，且二者同时服用，山楂性温可缓解芹菜的寒凉之性，同时山楂味酸入肝经，可助肝调畅气机，协调脾升胃降，维持体内物质代谢平衡。因此，本实验以防治兼收为目的尝试将芹菜和山楂两种食材的降压、降脂功能相结合，设立三个实验组，分别饲以动物普通饲料、高脂饲料、高脂饲料合并芹菜山楂汁灌胃，8周后血压、血脂测定结果表明灌胃芹菜山楂汁的小鼠血压、血脂水平显著低于单纯饲喂高脂饲料的小鼠并高于饲喂普通饲料的小鼠，由此可见芹菜山楂汁有降血压、降血脂的作用，这一结果与以往的报道相似［1,3,4］。病理切片HE染色结果显示配合芹菜山楂汁灌胃的高脂饮食小鼠肝细胞脂肪变性减少，肝细胞微见肿胀，肝组织脂肪变性程度低于高脂饮食组动物，结果表明对于长期高脂饮食的动物芹菜山楂汁有延缓肝脂肪变性速度的功能。在日常生活中此配方可以作为高血压高血脂病人的保健食品适当饮用，但能否长期大量饮用还需要做进一步探索。