胃康宁对功能性消化不良大鼠胃排空及血浆胃肠激素水平的影响*

常玉娟　曹敏敏　刘燕君　李依洁　Aimin周　陈建德　魏茹涵　张　平　魏　玮　佟　丽

中国中医科学院望京医院(北京 100102)



胃康宁对功能性消化不良大鼠胃排空及血浆胃肠激素水平的影响*

常玉娟曹敏敏△刘燕君△李依洁Aimin周▲陈建德□魏茹涵▲张平△魏玮▲■佟丽△

中国中医科学院望京医院(北京 100102)

目的：本研究旨在通过观察胃康宁对功能性消化不良大鼠胃排空功能及血浆胃肠激素水平的影响，探讨其对功能性消化不良的作用机制。方法：将雄性10日龄Wistar幼鼠50只，随机分为正常组15只、模型组15只、中药胃康宁组10只和阳性药物组10只，采用0.1% IA灌胃诱导大鼠FD模型。观察胃康宁对功能性消化不良大鼠食量、体重、胃排空功能等指标的影响，采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆MTL、Ghrelin、obestatin和血清GAS含量变化。结果：与正常组相比，模型组大鼠摄食量、体重和胃排空率降低(P< 0.05)，血浆MTL、Ghrelin和血清GAS含量降低，血浆obestatin水平升高；与模型组比较，胃康宁组和多潘立酮组小鼠食量、体重和胃排空率增加，血浆MTL、Ghrelin及血清GAS含量升高，血浆obestatin水平降低。结论：胃康宁对功能性消化不良模型大鼠具有改善胃肠动力、降低胃肠感觉过敏的作用，其治疗机制可能与调节外周血MTL、Ghrelin、obestatin及GAS含量的变化有关。

主题词消化不良@胃康宁实验，动物

ABSTRACT

Objective: To study the effect of weikangning on gastric emptying and plasma gastrointestinal hormones in rats with functional dyspepsia (FD)，and investigate its possible mechanism to regulate the Gastrointestinal function. Methods: The rats were randomly divided into fourgroups: model control group(n=15), domperidone group(n=10)，Weikangning group(n=10)，and normal control group(n=15)；the change of intake of water and food， body weight，and gastric emptying rate were observed. The levels of plasma motilin ,Ghrelin, Obestatin and gastrin were measured by ELISA method. Results: Compared with the normal group, the food intake, body weight and gastric emptying rate were reduced (P<0.05), the levels of plasma MTL, Ghrelin and serum GAS were lower, the levels of obestatin was higher in model group; While, the food intake, body weight and gastric emptying rate were increased, plasma MTL, Ghrelin andserum GAS were higher, the level of plasma obestatin was lower in Weikangning group and domperidone group, compared with the model group. Conclusion: Weikangning can improve the gastric motility and reduce gastrointestinal hypersensitivity in FD rats, and its mechanism may be related to regulating the levels of plasma motilin ,Ghrelin, Obestatin and gastrin.

功能性消化不良(Functional dyspepsia ,FD)以持续性的或反复发作的上腹部疼痛、胀满、嗳气以及早饱等为主要临床表现，但没有任何器质性原因可解释一种消化系统的常见病[1]。调查显示，因FD而就诊者占国内消化门诊总量的20%～50%[2]。关于FD的病因和发病机制现代医学研究已经逐步深入和日趋广泛，但尚无明确定论，除了胃肠动力障碍、内脏敏感性异常、胃肠激素的改变等这些熟知的作用机制，脑-肠轴功能障碍、精神心理障碍、遗传易感性等因素也成为近年来研究热点，FD可能是多方面因素综合作用的结果，并且这些因素可相互影响[3]。其中胃动素(motilin，MOT)能促进胃排空、改善胃肠动力障碍，对胃肠运动有重要调节作用[4]。胃促生长素( Ghrelin ) 可通过作用于迷走神经而发挥调节功能，增加胃排空率，促进胃动力[5]。胃肠神经激素对消化器官的调节作用是FD发病机制中重要的一环。 目前，西医治疗FD一线用药多采用促胃肠动力药，如五羟色胺受体激动剂或多巴胺受体阻滞剂等[6]。虽有一定疗效，但不良反应明显，停药后症状易反复。近年来，中医药治疗FD 不但疗效突出，并且在用药的安全性，对患者身心症状的整体调节以及复发率的改善方面，中医药治疗功能性胃肠病都表现出了一定的优势。中医辛开苦降代表方胃康宁以调理脾胃升降，调节寒热为基本原则，临床取得了较好的效果，在改善患者消化道症状、中医证候等多方面均疗效显著。我们研究了胃康宁对FD大鼠胃排空功能及Ghrelin、GAS等相关胃肠激素水平的影响，探讨辛开苦降法对功能性消化不良的作用机理,为临床应用提供理论依据。

1材料1.1动物SPF级10日龄Wistar幼鼠50只，雄性，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2012-0001。动物饲养于北京中医药大学屏障级动物实验中心，动物饲养环境：室温为(20±2)℃，湿度为(50±10)%，正常更替光照，24h供应无菌饲料及饮用水。

1.2试剂和仪器Rat Gastrin ELISA Kit (货号：CSB-E12743r)；Rat motilin (MTL) ELISA Kit(货号：CSB-E08208r)；Rat Ghrelin (GHRL)ELISA Kit(货号：CSB-E09816r)；Rat Obestatin ELISA Kit(货号：CSB-E13642r)；试剂盒均购于CUSABIO华美公司。手提高压锅 (YX-280 ) 江阴滨江医疗设备厂；显微镜(BX43)OLYMPAS；组织自动包埋机(TB-718)泰维科技；石蜡切片机 (LEICA RM2135) LEICA 。

1.3药物胃康宁方：党参、白芍各15g，黄芩、柴胡、炙甘草各9g，姜半夏、厚朴、醋元胡各10g，砂仁 8g，郁金 18g等，所有药物由中国中医学科学院望京医院药剂科提供。依据体表面积公式计算出大鼠等效剂量为3.6g/kg/d，胃康宁中药溶液生药含量为1.2g/ml。多潘立酮片用灭菌蒸馏水配制成0.3mg/ml浓度溶液。以上药液均储存于4 ℃冰箱中，应用前水浴到常温(避免刺激实验动物胃肠道)。

2方法2.1动物模型制备和给药将雄性10日龄Wistar幼鼠50只，随机分为正常组15只和造模组35只。正常组幼鼠给予2%蔗糖溶液0.2ml灌胃，1次/d；造模组幼鼠予0.1% IA和2% 蔗糖混合液0.2ml灌胃，1次/d，持续造模6 d。待大鼠8周龄进行模型评定后，将造模成功的35只大鼠应用随机数字法分组，模型组15只，胃康宁组和阳性药物组各10只。胃康宁组和阳性药组分别予相应药液灌胃，模型组和正常组予以0.9%氯化钠溶液，灌胃体积均为1 ml/100g，1次/d，连续灌胃7d。

2.2观察项目大鼠胃组织病理情况观察大鼠8周龄时，分别取正常组、模型组大鼠各5只，异氟烷麻醉吸入式麻醉，取胃体中1/3段大小约0.8cm×0.8cm胃壁全层1块，4% 多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，行苏木精-伊红染色，镜检。其余大鼠给药结束后，多潘立酮组、胃康宁组同样行苏木精-伊红染色，镜检，操作同前。大鼠胃排空检测：随机抽取各组大鼠各5只，每只大鼠单笼饲养，禁食，不禁水，12h后每只大鼠分别给予15g特制无菌饲料，3h后称重剩余饲料，计算得出大鼠3h摄食量。然后禁食、水，3h后检测胃排空。大鼠麻醉后迅速摘取胃组织，经滤纸擦干后称重，得到胃全重值，剪开胃体，去除胃内容物，擦干称重，此为胃净重。3h摄食量=15g-3h后剩余食量；3h胃内食物残留量=胃全重-胃净重，3h胃排空率(%)=(1-3h胃内食物残留量/3h摄食量)×100%。大鼠GAS和MTL、Ghrelin、obestatin含量测定：大鼠灌胃结束后进行血清检测，心脏采血5～8ml，注入含10% EDTA的真空采血管中混匀，4℃下3000 r/min离心20 min取上清，移于EP管中，-20℃保存备用。分别按试剂盒说明书，ELISA 法测定大鼠血浆中GAS和MTL、Ghrelin、obestatin含量。

2.3统计学方法应用SPSS 19.0软件进行统计学处理，多组间计量资料比较采用单因素方差分析，所有数据均以均数±标准差表示。以P<0.05为差异有统计学意义。

3结果3.1FD大鼠胃黏膜的变化模型组大鼠胃黏膜腺体排列正常，偶见少量慢性炎症细胞浸润，其余未见明显异常；模型组、胃康宁组及多潘立酮组大鼠胃黏膜形态与空白组相比均没有明显异常改变。(图1)

A：正常组；B：中药组；C：阳性药物组；D：模型组

3.2胃康宁对FD大鼠摄食及胃排空功能的影响与正常组相比，模型组大鼠摄食量、体重和胃排空率降低(P<0.05)，与模型组比较，胃康宁组和多潘立酮组小鼠食量、体重和胃排空率增加(P<0.05)，但胃康宁组与阳性药组比较，差异无统计学意义。空白组、模型组、多潘立酮组及胃康宁组大鼠体重、3h摄食量、3h后胃内食物残留量及胃排空率见表1。

3.3胃康宁对FD大鼠血清GAS和MTL、Ghrelin、obestatin水平的影响与正常组相比，模型组大鼠血浆MTL、Ghrelin和血清GAS含量降低(P< 0.05)，血浆obestatin水平升高；与模型组比较，胃康宁组和多潘立酮组大鼠血浆MTL、Ghrelin及血清GAS含量升高(P< 0.05)，血浆obestatin水平降低，但胃康宁组与阳性药组比较，差异无统计学意义。空白组、模型组、多潘立酮组及胃康宁组大鼠血清GAS和MTL、Ghrelin、obestatin水平见表2。

表1　各组大鼠体重、摄食量、胃内食物残留量和胃排空率比较(n=5)

表2　各组大鼠血清MTL、GAS、Ghrelin及Obestatin含量比较(n=10)

4讨论FD的病因及发病机制复杂，目前认为其是多种因素综合作用的结果，不仅涉及胃肠动力、胃肠激素的改变，并且与脑-肠轴、精神心理甚至遗传因素等相关[3]。在诸多作用因素中，胃肠道动力和感觉异常是其基础[7]。胃肠激素分泌异常能够直接影响胃肠道功能，是其发病的核心环节之一[8]。

胃动素(MTL)能够通过内分泌及神经途径调节消化间期移行复合运动，参与MMCⅢ相收缩，促进胃排空[6]。目前多数研究表明，FD患者MTL分泌不足由此引起消化间期胃动力障碍[9]。而胃泌素(GAS)不但可以刺激胃酸、胃蛋白酶及胰液的分泌从而影响胃肠消化吸收功能；并且能够促进胃窦、胃体乃至幽门的收缩，增强胃肠道的运动，加速胃排空。研究发现，胃排空延缓的 FD 组血浆 GAS 含量明显低于正常人及胃排空正常FD 组，血清胃泌素水平降低可能是FD胃排空延迟的病理生理机制[10]。Ghrelin是由胃和下丘脑弓状核神经元释放的脑肠肽, 广泛分布于中枢和外周神经系统，Ghrelin 能够刺激食欲，增强胃肠动力，参与调节胃酸和腺体的分泌，调解催乳素、肾上腺素等机体多种激素的释放，维持体内激素平衡，同时通过中枢和外周机制保护胃黏膜[11-12]。FD患者血浆ghrelin 水平与主观症状的轻重程度具有一致性[13]，Ghrelin可中枢调节FD患者消化系统功能，具有促进胃排空功能和改善临床症状的作用[11]。Obestatin是与Ghrelin 同一基因编码的由23个氨基酸组成的酰胺化的一种脑肠肽，与胃肠运动和食物摄取有关。动物实验研究表明，Obestatin能够负向调节摄食，持续地抑制胃排空和小肠收缩，注射外源性的Obestatin后可以明显抑制大鼠的摄食量和体质量的增加，并且呈时间和剂量依赖性关系[14-15]。

本研究采用10日龄幼鼠给予IA灌胃6d造模法建立FD模型，在大鼠8周龄时模型组和正常组随机抽取5只大鼠对FD模型进行评定，以判断造模是否成功。大鼠胃组织病理结果显示，与正常组相比，模型组大鼠胃黏膜组织形态虽然未见异常；但模型组大鼠的摄食、体重，包括胃排空率明显低于正常组，提示造模成功。本研究显示，存在胃动力障碍的模型组大鼠，血清MTL、Ghrelin及GAS含量降低，而Obestatin含量有所升高；胃康宁方及阳性药多潘立酮能够加快FD大鼠的胃排空，并在一定程度上提高血清MTL、Ghrelin及GAS含量，降低血清Obestatin含量。本研究进一步证明，机体胃肠激素水平对消化器官的调节作用，MTL、Ghrelin及GAS的降低，Obestati的升高，影响着机体的功能和FD的发病，并且四种激素可互相作用。胃康宁方干预后，FD大鼠的血清MTL、Ghrelin及GAS水平不同程度地升高，Obestatin水平不同程度地降低，可推测胃康宁可增强胃肠动力，调节胃肠道的内脏感觉功能而对FD起到治疗作用。关于MTL和GAS对胃肠动力的影响争议较小，本研究结果与前期其他学者得出结果一致。虽然Obestatin和Ghrelin对于胃肠动力学方面的生理作用已经较为明确，但关于Obestatin和Ghrelin对于FD发病机制的影响目前尚存在一定争议，甚至对于FD模型中Obestatin水平的变化不同研究中结果并不一致。有研究显示，受体均属于促生长激素释放激素受体家族的Obestatin和Ghrelin，功能存在相关性[13]。本研究结果支持其观点。但胃肠道功能的调节远比实验设计复杂，大量激素、神经递质共同作用并且相互影响。机体胃肠激素水平受多种因素的调节，包括体重、饥饿、饮食、血糖及机体其他激素分泌等在内的多种因素，均可影响血清脑肠肽Ghrelin、Obestatin等的水平。就其调节胃肠动力方面来说，Obestatin是否具有抑制胃肠运动、拮抗Ghrelin的功能目前仍然存在着较大的争议。诸多问题有待于后续试验中进一步深入研究。

中医学将FD 归于“痞满”、“胃脘痛” 等范畴。外感六淫、内伤七情、饮食劳倦、精神紧张等因素导致脾胃升降失司, 气机阻滞中焦，因而出现上腹部疼痛不适、胀满等一系列症状。本病一般多本虚标实, 寒热错杂之证。治疗寒热错杂证,当以辛开苦降, 平调寒热为主。胃康宁方在调节脾胃脏腑功能的同时, 重视人体气机与情志的疏导，在此辛开苦降代表方半夏泻心汤基础上加入柴胡、郁金、枳壳、杏仁、焦三仙等制成，增强其疏肝理气，调畅气机，通府畅下之功。本研究表明，胃康宁方对FD模型大鼠具有改善食欲和体重，加快胃排空，降低胃肠感觉过敏的作用，并可影响大鼠胃肠激素水平，推测该方可能正是通过调节机体MTL、Ghrelin、GAS、Obestatin等的分泌，从而推动胃肠运动，调节胃肠敏感性，多方面共同作用改善FD的临床症状。胃肠道功能的调节机制庞大而复杂，受大量的激素、神经递质等多方面因素的影响，辛开苦降方胃康宁对FD的作用机制还需要更加深入的研究，以期为中医药治疗胃肠道动力相关性疾病提供了新的研究依据和思路。

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(收稿2016-01-22；修回2016-04-15)

Effect of Weikangning on gastric emptying and gastrointestinal hormone in rats with functional dyspepsia

Wangjing Hospital of Chinese Academy of Chinese Medical Sciences(Beijing 100102)

Chang YujuanCao MinminLiu Yanjunet al

Dyspepsia@WeikangningAnimal experimentation

*国家自然科学基金项目(81273746)

△北京师范大学生命科学学院(北京10087)

▲美国克利夫兰大学化学系

□美国约翰·霍普金斯大学医学院消化内科

R975

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.068