广金钱草生物碱最大耐受试验

黄仨，李瑞好，朱烨妍，付裕，张韦深，刘琼

（中山大学新华学院，广东广州 510520）

广金钱草生物碱最大耐受试验

黄仨，李瑞好，朱烨妍，付裕，张韦深，刘琼*

（中山大学新华学院，广东广州 510520）

该实验用硫酸水溶液结合超声技术处理提取广金钱草生物碱，经一次性灌胃于昆明种小鼠，并观察其一周给药后反应，结果表明小鼠最大耐受量为55 g/kg，为以后药理研究提供用药剂量设置依据。

广金钱草；生物碱；最大耐受剂量

广金钱草始载于肖步丹所著的《岭南采药录》，又名广东金钱草、金钱草、铜钱草、落地金钱、假花生、马蹄草、银蹄草及马蹄香等，统一药用名称源于《岭南草药志》[1]。根据2010版中国药典，广金钱草[Desmodium styracifolium（Osb.）merr.]为 豆 科山蚂蝗属植物的干燥地上部分，性微寒，味甘、淡，归膀胱、肝、胆、肾经，能清热去湿、利水通淋、排石。主治泌尿系感染、泌尿系结石、肾炎水肿、胆囊炎、胆结石、黄疸型肝炎、小儿疳积及痈肿等。主产于广东、福建、广西、湖南等省区，越南、印度、缅甸亦有分布[2,3]，是两广地区大宗栽培的药材，是广东地产药材。广金钱草主要含有黄酮、生物碱、酚类、鞣质和多糖等成分，还含有挥发性成分、皂苷、有机酸等。近年来，关于广金钱草药用成分研究主要集中在对黄酮和水提液的药理作用方面。而广金钱草生物碱毒性实验研究暂未见报道。该实验以其一般毒副反应为观察指标，观察小鼠对广金钱草的最大耐受剂量。

1 材料与方法

1.1 实验动物

从广东省实验动物中心购置昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半共90只，分5组，每组10只。实验前12h禁食。

在创建国家森林城市期间，济宁坚持城乡统筹上下联动、四级联创一体推进，山水林田湖草系统治理，实施城区森林网络、环城森林、森林村镇、山区森林生态屏障、湿地生态环境、森林健康体系、林业产业体系、森林文化旅游体系、森林管护能力、科技支撑体系等10项重点建设任务，以及“水韵圣城森林济宁”大绿化行动。今年10月成功创建为国家森林城市，邹城市、曲阜市成功创建为县级国家森林城市，市级以上森林公园16处，其中国家级3处，初步形成区域化森林城市群。

表1 小鼠对广金钱草生物碱的毒副反应观察（n=10）

1.2 药物

（6）查看空气储罐进气阀门和出气阀门的开启、关闭是否有醒目指示，防止由于操作人员的误操作而导致空气储罐内部压力急剧上升从而引起爆炸。

1组（0.140g/g），给药后3d内全部死亡；2组（0.105g/g）给药后3h内全部死亡；3组（0.070g/g）给药后3h内全部死亡；4组（0.035g/g）给药后12h内无死亡，观察48h无死亡。

根据2010年版中华人民共和国药典一部收载，广金钱草成人口服剂量15～30g/d。预实验：取35g干燥粗提物，溶于10mL水中得溶液。以0.140g/ g（0.4mL/10g），0.105g/g（0.3mL/10g），0.070g/ g(0.2mL/10g)，0.035g/g(0.1mL/10g)，分别灌胃，不足0.8mL组用水补齐，每组10只小鼠。

1.3 给药量

广金钱草由市药材公司购入，经本校药学系鉴定。按照范树国等硫酸水溶液结合超声技术处理提取广金钱草生物碱[4]。取广金钱草粉末100 g，分别置于2 000mL烧杯中，用1%H2SO4溶液1 000mL浸泡48 h以上，超声处理30min。所得酸水液用石灰中和至pH值为7，放置后过滤，滤液用浓盐酸酸化至pH值1～2，并加入食盐，抽滤，所得滤液用酒精灯蒸干备用，测得生物碱含量为17.5g/100g生药。

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1.4 方法

对死亡小鼠进行解剖发现：胃壁完整，胃内容物和胃壁为深褐色，心肺鲜红，未见出血点、坏死灶；肝颜色暗红，无明显肿胀，肾、肠等脏器未见明显异常。2只小鼠死亡后解剖情况大致相同。初步判断动物的死亡与生物碱的毒性有关，有关生物碱的毒性成分有待进一步实验研究。该实验选取0.070～0.035g/g进行最大耐受量实验。

每组小鼠以0.85∶1.00剂量递增，按小鼠体重计算用药量，加水至0.5mL胃内灌注。给药后连续观察7d，观察小鼠是否出现耸毛、卧、耳壳苍白，或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、抽搐及大小便失禁等。

2 结果

第4组小鼠66%有轻度反应，第5组小鼠100%出现严重反应，但均于第3天后恢复正常（见表1）。故小鼠最大耐受量取第4组、第5组平均值0.055g/g （55g/kg）。

随着我国各个领域企业的不断发展，商业经济领域的发展规模也在不断扩大，在各式各样的企业中，财务管理所涉及的管理工作已经不再局限于企业各个阶段的数据分析以及整理反馈，传统的管理模式已经不能使企业发展得到满意的效果。就当今企业而言，企业运作的核心与资金链的把控都与财务管理息息相关，企业的财务部门可以为企业的发展提供资金方案，确保企业的正常运作，从而使企业的发展可以更加稳定，因此，企业的财务管理在决策和管理上是非常重要的，因此，在财务管理上要科学合理的进行管制。在经济快增长的新中国，财务管理在管理模式上要适当加以改进。

3 讨论

现代药理实验证明，广金钱草有增加犬血浆中胆囊收缩素含量使胆囊明显收缩的利胆[5，6]、利水利钠的利尿作用，经证实大于钾盐（灰分）的作用[7]。使肾中草酸钙晶体形成程度比成石组明显减轻，有抗尿路结石[8，9]。在心血管方面，研究证实广金钱草可增加冠脉血流量，降低冠脉阻力指数，降低心肌耗氧量；使脑、肾、股动脉血流量增加，肾血管阻力下降，血压下降。还能对抗垂体后叶素引起的冠脉血流量减少及血压升高，预防垂体后叶素引起的家兔急性心肌缺血和心律失常[2，3，10]。广金钱草醇提物对白色念珠菌有一定抑制作用[11]。广金钱草有提高小鼠学习记忆能力，抗缺氧能力，益智效果与其脑保护作用有关。广金钱草黄酮在体内和体外有抗血栓作用[1]。

已有实验得出广金钱草小鼠腹腔给药半数致死量（LD50）为（11.57±1.48）g（生药）/kg，灌胃（400g/kg）7d内无小鼠死亡。给小鼠腹腔注射广金钱草黄酮的LD50为（1 583±251）mg/kg[12]。该研究显示广金钱草生物碱的最大耐受量为0.055g/g（55g/kg）。进一步实验广金钱草生物碱的总还原能力、-OH及超氧阴离子清除率三方面作用，证实广金钱草生物碱有清除-OH及超氧阴离子作用，总还原能力与生物碱含量有关。而现在药理研究多集中在广金钱草黄酮、多糖等三分成，而对广金钱草生物碱有药理作用研究暂未见详细全面的报道，因此深入研究广金钱草生物碱药理作用，对全面认识了解广金钱药理作用及机制有重要意义，值得深入探讨。

[1]金淑琴.金钱草、广金钱草、连钱草的考证及临床应用[J].首都医药,2001,8(11):54.

[2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999:454.

[3]《广东中药志》编辑委员会.广东中药志(第1卷)[M].广州:广东科学技术出版社,1991:17.

[4]范树国,王恩忠,邱璐,等.广金钱草中生物碱的提取方法[J].江苏农业科学,2011，39(1):301-303.

[5]李方淑,孙斌,赵攀,等.健康人体对广金钱草总黄酮胶囊单次给药的耐受试验研究[J].2014,14(12):1074-1077.

[6]刘敬军,郑长青,周卓,等.广金钱草、木香对犬胆囊运动及血浆CCK含量影响的实验研究[J].四川中医,2008,26(4):31.

[7]刘学,崔健,陈新.广金钱草现代研究进展[J].长春中医药大学学报,2006,22(4):84.

[8]李惠芝,庄利民.广金钱草抑制一水草酸钙结晶生长有效部分的研究[J].沈阳药学院学报,1992,9(3):194.

[9]王涌泉,朱宝军,安瑞华,等.金钱草注射液抑制鼠草酸钙结石形成作用的研究[J].中华泌尿外科杂志,1999,20(11):689.

[10]梅全喜.现代中药药理与临床应用手册[M].北京：中国中医药出版社,2008:593.

[11]顾丽贞,张白舜,南继红.四川大金钱草与广金钱草抗炎作用的研究[J].中药通报,1988,13(7):40.

[12]范文昌,全喜,海标.金钱草的药理作用和临床应用研究进展[J].中国药房，2010,21(31):2961-2963.

Desmodium Styracifolium Alkaloids Maximum Tolerance Test

Huang Sa , Li Rui-hao, Zhu Ye-yan, Fu Yu , Zhang Wei-shen , Liu Qiong*
(Xinhua College of Sun Yat-sen Univesity, Guangdong Guangzhou 510520)

The experiment with aqueous sulfuric acid treatment combined with ultrasonic technology to extract Desmodium styraci foLium alkaloids, the one-time intragastric to Kunming mice and observed a week after the administration of its response, the result showed that the maximum tolerated dose in mice was 55 g/kg, which provided the basis for the dose setting of pharmacological studies.

Desmodium styracifolium; Alkaloids; Maximum tolerated dose

R284

A

2096-0387（2016）01-0049-03

项目：2015广东省大学生创新创业训练项目（项目编号22）；2014中山大学新华学院重点课程“实验生理科学”；2013中山大学新华学院机能实验学实验教学示范中心（项目编号2013S001）。

黄仨（1995-），男，广东广州人，本科在读，研究方向：药学。

刘琼（1969-），女，广东广州人，硕士，实验师，研究方向：从事基础医学实验教学和实验室管理方面的研究及药理学研究。