二氢杨梅素的抑菌性能研究及其与苯甲酸钠的比较

熊伟，李雄辉，王慧宾，袁菊如，王金昌

（江西省科学院应用化学研究所，江西南昌 330096）

二氢杨梅素的抑菌性能研究及其与苯甲酸钠的比较

熊伟，李雄辉，王慧宾，袁菊如，王金昌

（江西省科学院应用化学研究所，江西南昌 330096）

对二氢杨梅素的抑菌性能进行初步研究，结果表明：二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌6种菌均有一定的抑制作用，二氢杨梅素对各菌的最低抑菌浓度（M IC）分别为0.625、0.313、0.625、0.313、1.250m g/m L和0.313m g/m L，最低杀菌浓度（M BC）分别为2.5、2.5、2.5、2.5、10.0m g/m L和2.5m g/m L。同时，对二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌和杀菌效果进行对比，结果表明：二氢杨梅素对大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、白色念珠菌3种菌的抑菌和杀菌效果要明显高于苯甲酸钠，而对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌3种菌的抑菌和杀菌效果则与苯甲酸钠相当。

二氢杨梅素；抑菌；最小抑菌浓度；最小杀菌浓度

藤茶，学名显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata)，为葡萄科蛇葡萄属（Ampelopsis）的一种野生木质落叶藤本植物，主要分布于我国湖南、湖北、云南、贵州、广东、广西和福建等省区。藤茶具有抑菌、降血脂、降血压、抗氧化、降血糖、保肝护肝以及减轻乙醇中毒等功效[1-7]，研究表明，藤茶中发挥药理作用的主要化学成分为黄酮类化合物[8，9]，而二氢杨梅素则为藤茶中的主要黄酮类成分。本文系统研究了二氢杨梅素对常见6种致病菌的抑制作用，得出其最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC），并与传统抗菌药苯甲酸钠进行了抑菌效果对比，为新型食品天然防腐剂的进一步研究与开发提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

二氢杨梅素，实验室自提并纯化，经HPLC检测纯度为95%以上；苯甲酸钠，分析纯,中国医药（集团）上海化学试剂公司。

1.2 供试菌种

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、副伤寒沙门氏菌（Salmonella paratyphi）、绿脓杆菌（Pseu-domonas aeruginosa）、枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）和白色念珠菌（Candida albicans），以上菌种均由江西省科学院微生物研究所提供。

1.3 实验仪器

JM-10002天平（余姚市纪铭称重校验设备公司）；NC202-9电热型恒温干燥箱（江西电热设备厂）；恒温培养箱（常州中捷实验仪器制造有限公司）；手提式高压蒸汽灭菌锅（嘉兴中新医疗仪器有限公司）；超净工作台（苏州苏洁净化设备公司）。

1.4 培养基

本实验采用LB培养基，培养基的制备方法为：酵母提取物5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂20g，定容于1 000mL，采用氢氧化钠调结pH值为7.4～7.6，分装，121℃条件下灭菌20min，备用。

1.5 菌悬液的制备

将供试菌种移入相对应的试管斜面培养基，于37℃下培养18～24h，用接种环挑取少许菌体，放入装有无菌水的试管内，振动摇匀，制成菌悬液。采用比浊法计数，调整菌悬液浓度，使其含菌数约为107 个/mL，备用。

1.6 抑菌实验

1.6.1 滤纸片法测定抑菌作用

取直径为6mm的滤纸片放入配好的浓度为10%的二氢杨梅素溶液中浸泡6h，取出置于真空干燥箱中灭菌干燥。将各种供试菌悬液取0.2mL分别注入直径为120mm的无菌培养皿中培养，再倒入20.0mL LB培养基，混匀后冷却成含菌平板，然后用无菌镊子夹取含浸出液的滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴6片，每菌重复3次，细菌培养箱中37℃培养24h后，测定滤纸片周围抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。

1.6.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定

用LB培养基以二倍稀释法分别稀释二氢杨梅素，浓度分别为20.000、10.000、5.000、2.500、1.250、0.625、0.313mg/mL和0.156mg/mL，然后分别接种金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌的过夜培养液200μL，于细菌培养箱中37℃下培养24h，观察生长现象，取没有细菌生长的最低浓度为MIC。

1.6.3 最低杀菌浓度（MBC）的测定

将上述浓度大于MIC的各管培养液，用直径4mm的接种环，划线接种于LB培养基上，在37℃的生化培养箱中培养24h后，观察有无细菌生长，凡无细菌生长的药物最低浓度管，即为药物对该菌种的最低杀菌浓度MBC。

1.6.4 二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌效果对比

在上述实验的条件下，使用同样浓度的苯甲酸钠进行抑菌实验，得出其最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC），并与二氢杨梅素抑菌效果进行对比。

2 结果与分析

2.1 二氢杨梅素的抑菌效果

二氢杨梅素对各实验菌株的抑菌效果见表1。从表1可以看出，二氢杨梅素对各实验菌株均有一定的抑制作用，但对绿脓杆菌、大肠杆菌的抑制作用较强，其次是白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、副伤寒沙门氏菌，而对枯草芽胞杆菌的抑制作用较弱。

表1 二氢杨梅素的抑菌效果

2.2 最低抑菌浓度（MIC）

由表2可以看出，随着二氢杨梅素溶液浓度的增加，二氢杨梅素对各实验菌株的抑菌作用也逐渐增强。二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为：0.625、0.313、0.625、0.313、1.250mg/mL和0.313mg/mL，可见二氢杨梅素在较低浓度下有较明显的抑菌作用。

表2 二氢杨梅素的最低抑菌浓度（MIC）

2.3 最低杀菌浓度（MBC）

由表3可以看出，二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌、白色念珠菌最低杀菌浓度（MBC）分别为：2.5、2.5、2.5、2.5、10.0mg/mL和2.5mg/mL。可见，二氢杨梅素对枯草芽胞杆菌的杀菌效果较弱，对其他菌株的杀菌效果则较好。

2.4 二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌效果对比

从表4二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌效果对比可以看出，二氢杨梅素对大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、白色念珠菌3种菌的抑菌和杀菌效果要明显比苯甲酸钠强，而金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌3种菌的抑菌和杀菌效果则与苯甲酸钠相当。综合来看，二氢杨梅素较苯甲酸钠表现出更强的抑菌和杀菌效果。

表3 二氢杨梅素的最低杀菌浓度（MBC）

表4 二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌效果对比

3 结论

1）二氢杨梅素的抑菌实验可以看出，其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌均有一定的抑制效果。2）二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为：0.625、0.313、0.625、0.313、1.250mg/mL和0.313mg/mL；最低杀菌浓度（MBC）分别为：2.5、2.5、2.5、2.5、10.0mg/mL和2.5mg/mL。二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌和杀菌效果对比可以看出：二氢杨梅素对大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、白色念珠菌3种菌的抑菌和杀菌效果要明显比苯甲酸钠强，而金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌3种菌的抑菌和杀菌效果则与苯甲酸钠相当。综合来看，二氢杨梅素较苯甲酸钠表现出更强的抑菌和杀菌效果。3）二氢杨梅素作为一种天然提取物，基于它对常见病菌的抑制作用，可用于天然食品防腐剂和药用资源的开发，以保障药品的绿色和安全。

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Study on Antimicrobial Activity of Dihydromyricetin and Comparision with Sudium Benzoate

Xiong Wei, Li Xiong-hui, Wang Hui-bin, Yuan Ju-ru, Wang Jin-chang
(Institute of Applied Chemistry，Jiangxi Academy of Sciences，Jiangxi Nanchang 330096)

Antimicrobial activity of dihydromyricetin were investigated.The results indicated as follows: the dihydromyricetin exhibited variable inhibitory effects against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella paratyphi, Pseu-domonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Candida albicans.The minimal inhibitory concentration (MIC) of the dihydromyricetin to each strain was deretmined as 0.625, 0.313, 0.625, 0.313, 1.250, 0.313 mg/mL, The minimal bactericidal concentration (MBC) of the dihydromyricetin to each strain was deretmined as 2.5, 2.5, 2.5, 2.5, 10.0, 2.5 mg/mL.The inhibitory effects of dihydromyricetin were compared with sudium benzoate at the same time, the results indicated as follows: dihydromyricetin had stronger inhibitory effects than sudium benzoate against Escherichia coli, Salmonella paratyphi, Candida albicans and had the equivalent inhibitory effects against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus sabtilis.

Dihydromyricetin; antimicrobial; The minimal inhibitory concentration; The minimal bacteriocidal concentration

TQ91

A

2096-0387（2016）01-0012-03

国家自然科学基金项目（项目编号31260400）；江西省自然科学基金项目（项目编号20122BAB214003）；江西省科技支撑计划项目（项目编号20132BBG70045）。

熊伟（1982-），男，硕士研究生，副研究员，研究方向：天然产物提取分离与分子修饰。