畲药搁公扭根的质量标准研究

王伟影，毛菊华

(丽水市食品药品检验所，浙江 丽水 323000)

畲药搁公扭根的质量标准研究

王伟影，毛菊华*

(丽水市食品药品检验所，浙江 丽水 323000)

目的：完善畲药“搁公扭根”的质量标准。方法：运用显微鉴别法、高效液相色谱法分别对搁公扭根的粉末显微特征、指标性成分(没食子酸)进行测定；参照《中华人民共和国药典》2010版附录相关方法对搁公扭根水分、总灰分和醇溶性浸出物进行测定。结果：搁公扭根粉末显微特征明显；没食子酸的线性范围为3.881～38.81 μg·mL-1(r=0.999 7)，平均加样回收率为99.47%(n=6)，RSD=1.22%。14批搁公扭根样品的测定结果表明，没食子酸的含量为0.28%～1.46%，水分、总灰分和醇溶性浸出物分别为5.0%～10.2%、1.4%～3.6%和14.4%～41.8%。结论：研究所得方法简便、准确，可用于搁公扭根的质量控制。

畲药；搁公扭根；质量标准；没食子酸；高效液相色谱法

畲药搁公扭根为蔷薇科植物掌叶覆盆子RubuschingiiHu的干燥根及根茎[1]，主要分布于浙江、江苏、安徽、江西和福建等华东地区，多生长于低海拔至中海拔的林缘、山坡、灌丛、路边和沟边等土壤较湿润地段。畲医常以掌叶覆盆子根入药，名为“搁公扭根”，认为其可祛风止痛、明目退翳、和胃止呕，主要用于结核性瘘管，结核病所致的脊柱压迫症等，在畲医中应用较为广泛[1-2]。《浙江省中药炮制规范》2005年版以畲药名“搁公扭根”收载该品种，但无具体检验项目[3]。笔者从鉴别(粉末显微特征)、检查(水分、总灰分)、含量测定(高效液相色谱)方面系统地研究搁公扭根的质控方法，以期收入新版《浙江省炮制规范》，有效评价搁公扭根的质量。

1 仪器与材料

1.1 仪器

OLYMPUS系统显微镜(奥林巴斯公司)；Memmert UNE400自然对流烘箱(德国Memmert有限公司)；程控箱式电炉SXL-1008(上海精宏实验设备有限公司)；Agilent 1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；二极管阵列检测器(美国安捷伦公司)；Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(美国安捷伦公司)；XS105DU电子天平(瑞士梅特勒公司)；水浴锅(上海梅香仪器公司)。

1.2 试药

没食子酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110831-200803，含量：90.1%)；乙腈和磷酸为色谱纯(Merck)，水为娃哈哈纯净水。

搁公扭根药材：自行采集4批样品，经本所李水福主任中药师鉴定为蔷薇科植物掌叶覆盆子RubuschingiiHu的根及根茎，干燥，分别粉碎，过二号筛，备用。样品信息见表1。

表1 搁公扭根药材样品信息

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

2.1.1 方法 取适量药材粉末过五号筛后按粉末制片法制作粉末片，在显微镜下观察和照相。

2.1.2 结果 本品粉末黄白色至浅棕色。淀粉粒甚多，单粒类球形、三角状卵形或不规则形，直径 3～18 μm，脐点点状、裂缝状或人字状；复粒2～8分粒组成。石细胞单个或成群散在，类方形、类圆形或长椭圆形。具缘纹孔导管散在。纤维较多，有的含黑色分泌物。木栓细胞长方形，壁呈连珠状增厚。见图1。

注：1.淀粉粒；2.木栓细胞；3.缘纹孔导管；4.石细胞；5.纤维。图1 搁公扭根药材显微鉴别图

2.2 检查

2.2.1 水分的测定 取各批次搁公扭根2～4 g，平行2份，各精密称定，照《中华人民共和国药典》(《中国药典》)2010年版一部附录ⅨH 水分测定第一法进行测定。结果见表2。

2.2.2 总灰分的测定 取各批次搁公扭根2 g，平行2份，各精密称定，照《中国药典》2010年版一部附录ⅨK 总灰分测定法进行测定。结果见表2。

2.3 浸出物的测定

取各批次搁公扭根2～4 g，平行2份，各精密称定，以50%乙醇为溶剂，照《中国药典》2010年版一部附录ⅨA醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定。结果见表2。

表2 搁公扭根药材水分、总灰分、浸出物检查结果

2.4 含量测定(高效液相色谱法)

2.4.1 色谱条件和系统适用性试验 色谱柱为Agilent SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(美国安捷伦公司)；甲醇-0.4%磷酸(5∶95)为流动相，流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：273 nm；自动进样，进样量均为5 μL，理论板数按没食子酸计不低于3000。对照品溶液和供试品溶液的色谱图见图2。在该色谱条件下，没食子酸与其他成分无干扰，理论塔板数均在5000以上，具有良好的分离效果。

注：A.没食子酸对照品；B.供试品。图2 搁公扭根药材及对照品HPLC图

2.4.2 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成38.81 μg·mL-1(折算后)的溶液，作为储备液。

2.4.3 供试品溶液的制备 取样品粉末约0.3 g，精密称定，精密加入4.2%盐酸溶液50 mL，称定重量，加热回流提取3 h，取出放冷，以4.2%盐酸溶液补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液即为供试品溶液。

2.4.4 线性关系考察 精密吸取上述储备液适量，分别制成没食子酸质量浓度为3.881、7.762、15.52、23.29、31.05、38.81 μg·mL-1的对照品溶液，各精密吸取5 μL，按2.4.1项下色谱条件进行测定，以峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归，回归方程为Y=17.5478X-4.934 4(r=0.999 7)，表明没食子酸在3.881～38.81 μg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.5 精密度试验 取对照品溶液，按2.4.1项下色谱条件连续进样5次，计算没食子酸峰面积的RSD=1.04%(n=5)，结果显示精密度良好。

2.4.6 重复性试验 取同一批搁公扭根(编号：GGNG-1)，共6份，照2.4.3项下方法制备供试品溶液，按2.4.1项下色谱条件测定，计算没食子酸的质量分数为0.68%，RSD=1.40%(n=6)。

2.4.7 稳定性试验 取2.4.6项下供试品溶液，分别在0、4、8、12、24 h时进样测定，结果没食子酸峰面积的RSD=0.37%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.8 加样回收率试验 取已知含量的搁公扭根(编号：GGNG-1)6份，各约0.15 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入没食子酸对照品溶液(1.015 6 mg·mL-1)1.0 mL，再分别精密加入甲醇49.0 mL，按2.4.3项下方法制备供试品溶液，按2.4.1项下色谱条件测定，计算搁公扭根的含量，计算回收率，结果见表3。

表3 搁公扭根中没食子酸加样回收率试验(n=6)

注：没食子酸对照品加入量均为1.015 6 mg。

2.4.9 样品含量测定 取不同编号的搁公扭根，平行2份，按2.4.3项下方法制备供试品溶液，按2.4.1项下色谱条件测定，按干燥品计算没食子酸的含量，结果见表4。

表4 搁公扭根中没食子酸的含量测定(n=2)

3 讨论

3.1 浸出物的测定

搁公扭根中含黄酮苷、萜类及有机酸类物质，极性相对较大，笔者考察了甲醇(纯甲醇，70%甲醇、50%甲醇水溶液)、乙醇(95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇水溶液)等溶剂系统，结果显示以50%乙醇为溶剂，热浸法提取所得浸出物含量最高。

3.2 含量测定

经研究发现华东覆盆子根中含有大量的没食子酸，现代药理研究表明，没食子酸具有抗炎、抗氧化、抑菌、诱导细胞凋亡等功能[4]。笔者以没食子酸含量为指标，在参考有关资料[5-7]基础上考察了超声和加热回流两种提取方法，发现回流提取得到的没食子酸含量较高，故笔者采用加热回流提取法。在加热回流的基础上，考察了50%甲醇、70%乙醇和3%盐酸等水溶液对没食子酸的提取能力，结果显示3%盐酸水溶液提取的没食子酸含量最高。在选取盐酸水溶液为提取溶剂的基础上，考察盐酸水溶液的质量分数(4.2%、6.4%、8.5%)、用量(25、50、80 mL)、以及提取时间(1、2、3 h)对测定结果的影响，根据结果选择以4.2%盐酸水溶液50 mL、加热回流3 h为样品提取方法。

3.3 限度标准制定建议

实验收集不同产地不同采收时间的搁公扭根共14批，样品有一定的代表性，水分、总灰分、浸出物、含量测定的结果分别为5.0%～10.2%、1.4%～3.6%、14.4%～41.8%和0.28%～1.46%。根据测定结果，结合《中国药典》中已有的同类药材的标准、《中国药典》附录药材和饮片检定通则及国家药品标准(中药)研究制定技术要求，建议规定搁公扭根的水分不得多于12.0%；总灰分不得多于4.0%；以干燥品计算醇溶性浸出物不得少于15.0%；以干燥品计算没食子酸不得少于0.40%。

[1] 雷后兴，李水福.中国畲族医药学[M].北京：中国中医药出版社，2007：307-308.

[2] 朱美晓，鄢连和，吴婷，等.浙江地方标准收载的畲族特有品种研究现状[J].中国药业，2013，22(9)：4-6.

[3] 浙江省食品药品监督管理局.浙江省中药炮制规范[S].北京：科学技术出版社，2005：353.

[4] 高雅，李骅，王四旺，等.没食子酸的药理作用及其药物代谢动力学研究进展[J].西北药学杂志，2014，29(4)：435-438.

[5] 蓝海，李龙星，肖培云.紫地榆中没食子酸的提取工艺研究[J].中成药，2009，31(9)：1456-1457.

[6] 邱亮，于华忠，刘建兰，等.茶条槭叶没食子酸的提取工艺优化及其稳定性研究[J].湖南农业科学，2012(9)：85-88.

[7] 乐佳美，熊筱娟，毕宝宝，等.RP-HPLC测定不同产地白蔹药材中没食子酸的含量[J].安徽农业科学，2015，43(4)：108-110.

StudyonQualityStandardofTraditionalSheMedicine"Gegongniugen"

WANGWeiying，MAOJuhua*

(LishuiInstituteforFoodandDrugControl，Lishui323000，China)

Objective：To improve the quality standard of traditional she medicine—Ge gongniugen.Methods：The microscopical characteristics were identified by microscopical method，and index ingredient (Gallic acid) were determined by HPLC.The water content，total ash and ethanol-soluble extractives were determined according to the method in appendix of "pharmacopoeia of people’s republic of china".Results：Characteristics of microscopical identification of Ge gongniugen were obviously.A good linearity of psoralen was at 3.881～38.81 μg·mL-1(r=0.999 7)，and the average recovery rate was 99.47% (n=6)，RSD=1.22%.The content of gallic acid in 14 batches of Ge gongniugen was in the range of 0.28%-1.46%.The results of water content，total ash and ethanol-soluble extractives were in the range of 5.0%-10.2%，1.4%-3.6% and 14.4%-41.8%，respectively.Conclusion：This method is simple，accurate，applicable for the quality control of Ge gongniugen.

Traditional She medicine；Ge gongniugen；quality standard；gallic acid；HPLC

2015-06-29)

丽水市科技局项目(2012CXTD09-05)；丽水市科技局项目(2012CXTD11-03)；丽水市科技局项目(2014JYZB04)

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毛菊华，主管中药师，硕士，研究方向：中药与天然药物活性成分质量评价与研究；E-mail：maomaotou198712@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.011