“抢青”采摘对青翘中连翘酯苷A和连翘苷含量的影响

闫瑞，杨印军，刘红卫，李晓妮，郭宝林*

(1.山西医科大学 药学院，山西 太原 030001；2.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；3.成都天地网信息科技有限公司，四川 成都 610000)

“抢青”采摘对青翘中连翘酯苷A和连翘苷含量的影响

闫瑞1，2，杨印军2，刘红卫3，李晓妮1*，郭宝林2*

(1.山西医科大学 药学院，山西 太原 030001；2.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；3.成都天地网信息科技有限公司，四川 成都 610000)

目的：比较“抢青”采收(早于正常采收期的尚未成熟的果实)和正常采收早期采收的青翘中连翘酯苷A和连翘苷的含量差异。方法：采集了12个连翘主产地抢青采收和正常采收早期的青翘对应样品，采用高效液相色谱法测定其中连翘酯苷A和连翘苷的含量。结果：12组样品中，除个别组，抢青期的幼果中连翘酯苷A和连翘苷的含量高于正常采收早期，抢青采收期的连翘酯苷A和连翘苷的含量平均分别是正常采收早期的1.32倍和1.42倍。结论：抢青采收的连翘幼果中连翘酯苷A和连翘苷等成分含量高，高含量的功效意义值得关注。抢青采收对青翘产量影响巨大，应减少抢青采收对连翘野生资源的影响。

连翘；连翘酯苷A；连翘苷；高效液相色谱；含量测定；“抢青”期

连翘来源于木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，称“青翘”；果实熟透时采收，称“老翘”或“黄翘”[1]，成药生产使用以青翘为主。虽然连翘栽培技术成熟，为常见园艺物种，但药材资源几乎均来自于野生，野生资源集中分布于山西南部、河南西北部、陕西东南部[2]，全国年产量和需求量约7000～8000 t，正常年份一般能够满足需求。但是连翘是早春开花植物，盛花期为3月中旬至4月下旬，此时如遇倒春寒，对连翘的产量影响很大，严重时可减产70%～80%；另外春夏天旱也会导致减产，最差时可减产30%～50%；花期连雨也会减产，但是产区出现较少。如果花期平顺，春夏雨水充沛，又可增产30%～40%，因此连翘的产量受到天气变化的影响较大。当连翘上年欠收导致短缺而涨价后，次年产新时就会出现严重的“抢青”现象，即未到合理采摘期(8月上旬至9月上旬)，从6月中旬就开始大规模抢青采收。一般平常年份老百姓为了抢夺野生资源，也存在抢青问题，但规模不大。而且随着近些年需求的增加，自然资源产量和需求矛盾也逐渐显现，抢青导致减产，减产又激发抢青，使连翘采收进入了可怕的恶性循环。2015年是在2013、2014年连续倒春寒后的丰产年份，抢青的青翘量高达青翘总产量的30%以上，经对采收的样品测算，抢青的果实千粒重平均为成熟果实千粒重的26%，因此抢青导致了人为减产与资源浪费。本文作者之一刘红卫在2015年的连翘采收期对连翘产区进行了全面的调查，采集了主产区12个产地抢青期(6月10日—7月20日)和正常采收早期(7月21日—9月10日)的对应样品，共24份。因为连翘酯苷A和连翘苷是连翘的有效成分，一方面是连翘的高含量成分，另一方面连翘酯苷A具有抗病毒[3]、抗菌[4]和抗氧化[5]等作用；连翘苷具有降血脂、抗氧化[6]、抗病毒[7]、抗细胞损伤[8]等作用。这些功效与连翘具有清热解毒、消痈散结的药理作用有一定的关系。本文对24份连翘样品中的连翘酯苷A和连翘苷进行了含量检测，以探讨抢青采收对药材质量的影响。

1 材料与试剂

1.1 仪器

珀金埃尔默HPLC仪器(Flexar PDA LC Detector，Totalchrom色谱工作站)；KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；GZX-9070MBE数显鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；十万分之一电子天平(瑞士MettlerToledo公司)；万分之一天平(上海精密科学仪器有限公司)。

1.2 材料

连翘酯苷A对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-15010513，纯度为98.65%)，连翘苷(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-15031010，纯度为99.24%)。青翘样品信息见表1和图1。

1.3 试剂

甲醇(北京化工厂)；乙腈(Fisher)；娃哈哈纯净水；磷酸(西陇化工有限公司)；乙腈(Fisher)。

表1 各地青翘样品的采收期及千粒重

图1 不同采收时期的青翘样品图

2 方法

2.1 色谱条件

Agela C18(250 nm×4.6 nm，5 μm)；流动相：乙腈(A)和0.2%磷酸水(B)，梯度洗脱(0 min，19% A；4 min，20% A；8 min，26% A；10 min，35% A；15 min，45% A)；流速：1.0 L·min-1；柱温：室温；进样量：10 μL，连翘酯苷A检测波长：330 nm，连翘苷检测波长：277 nm。

2.2 对照品溶液的制备

取连翘酯苷A、连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度分别为1.200、0.262 mg·mL-1的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取烘干的连翘药材粉末(过五号筛)约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理30 min(功率250 W，频率40 kHz)，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 分别精密称取连翘酯苷A和连翘苷对照品1.200 mg和0.262 mg置1 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，为母液，再分别稀释成0.600、0.300、0.150、0.075、0.038 mg·mL-1和0.131、0.066、0.033、0.017 mg·mL-1，按照2.1色谱条件项下进行测定，进样体积：10 μL。以浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，连翘酯苷A回归方程为：Y=7×106X+119 493(r=0.999 3)；连翘苷回归方程为Y=4×106X-28 115(r=0.999 1)。结果表明连翘酯苷A和连翘苷质量浓度分别在1.200～0.038和0.262～0.017 mg·mL-1线性关系良好。

2.4.2 精密度试验 分别取连翘酯苷A和连翘苷对照品溶液，连续进样6次，每次10 μL。结果连翘酯苷A和连翘苷的峰面积的RSD分别为0.26%、0.13%，表示仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性试验 取同一供试品溶液(编号：8B)于0、2、6、8、12、24 h进样，记录其峰面积。结果连翘酯苷A、连翘苷质量分数的RSD分别为0.11%、0.31%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.4 重复性试验 取同一批号样品(编号：12B)，按供试品溶液的制备方法平行制备6份，进样测定，记录峰面积，结果连翘酯苷A和连翘苷质量分数的RSD分别为0.18%、1.13%，说明该方法重复性良好。

2.4.5加样回收率试验 精密称取12份样品(编号：3A)，分别加入连翘酯苷A和连翘苷对照品，按样品制备方法制得供试品溶液，平行制备6份溶液，进样测定，结果见表2。

2.5 样品测定

采用上述方法对连翘药材样品进行含量测定，结果见表3。其中对照品和样品的液相色谱图见图2。

表2 青翘中连翘酯苷A和连翘苷的加样回收率

表3 不同采摘时期青翘中连翘酯苷A和连翘苷的含量测定 (%)

注：A.对照品；B.供试品；1.连翘酯苷A；2.连翘苷。图2 对照品和青翘样品的HPLC图(277 nm)

3 讨论

本实验考察了70%和100%的甲醇超声提取连翘样品的主要成分，100%甲醇提取更完全。本实验也考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-醋酸水3种流动相体系，结果表明乙腈-醋酸水分离效果最好。乙腈-0.2%醋酸水时连翘酯苷A和连翘苷梯度洗脱分离度分别达到1.5，因此选择乙腈-0.2%醋酸水作为流动相。

总体来说，连翘酯苷A和连翘苷的含量表现为抢青期含量高于正常采收早期，也就是幼果含量高于近成熟果实。如今市场流通中将幼果掺入以提高指标成分的含量也是行业的常见手法。12份抢青采收期的连翘酯苷A和连翘苷的含量均值分别是12份正常采收早期的连翘酯苷A和连翘苷的含量均值的1.32倍和1.42倍，但是12份正常采收早期的连翘千粒重的均值是12份抢青采收期的连翘千粒重均值的3.8倍。抢青采收对青翘产量的影响巨大，应减少抢青采收对连翘野生资源的影响。在12组样品中只有2组样品(山西陵川和河南洛宁)抢青期连翘酯苷A的含量低于正常采收早期，3组样品(山西陵川、山西黎城和河南洛宁)抢青连翘苷的含量低于正常采收早期，文献曾报道连翘酯苷A的含量呈现先升高后降低的变化[9-10]，但本实验的抢青期早于文献报道的采收期，另一篇文献则各样品的采收时间顺序不甚清楚[11]，因此后期采收除了主要是含量降低外，是否也有含量升高的可能性有待进一步研究。

连翘作为常用的清热解毒中药，具有抗炎、抗病毒、抗菌和抗癌等活性[12-14]。木脂类的连翘苷和苯乙苷类的连翘酯苷是连翘的主要成分，也是有效成分之一，但是连翘成分和功效之间的关系尚不很明确[15]，况且老翘中连翘酯苷A和连翘苷的含量更低[11，16-18]，临床配方老翘的使用比例较高，抗炎活性研究表明老翘较青翘强一些[19]，因此尚不能认为抢青采收的幼果质量更好，有待进一步比较和评价。

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EffectofEarlierPeriodHarvestonContentofForsythosideAandPhillyrinofForsythiaeFructus

YAN Rui1，2，YANGYinjun2，LIUHongwei3，LIXiaoni1*，GUOBaolin2*

(1.CollegeofPharmacy，ShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001，China；2.InstituteofMateriaMedica，ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；3.ChengduTiandiwangMdtInfoTechLtd，Chengdu610000，China)

Objective：To compare the content of forsythoside A and phillyrin of Forsythiae Fructus collected in the earlier period harvest，called ‘Qiang Qing’，andthe earlier than normal period harvest.Methods：24 samples collected from 12 main distribution places ofForsythiasuspensawith conresponding ‘Qiang Qing’ harvest and the earlier than normal period harvest.Forsythoside A and phillyrin content were determined by HPLC.Results：The contents of forsythoside A and phillyrin of the fruits in‘Qiang Qing’period were higher than those with later period harvest in 12 groups of samples，except few groups.The average contents of these two chemicals were 1.32 times and 1.42 times higher，respectively.Conclusion：The significance of the high content of young fruit such as forsythoside A and phillyrin in “Qiang Qing” period should be concerned.‘Qiang Qing’ harvest reduced the yield greatly and should be avoid and cut down.

Forsythiae Fructus；forsythoside A；phillyrin；HPLC；content determination；the earlier period harvest

2015-12-14)

*

李晓妮，教授，硕士生导师，研究方向：中药复方物质基础及质量标准，Tel：(0351)4690114，E-mail：ninili1235@163.com；郭宝林，教授，博士生导师，研究方向：中药资源鉴定，E-mail：guobaolin010@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.008