乌鸡白凤丸治疗原发性痛经的实验研究

郭起岳，吴清和，操红缨，茹　丽，刘　婵，吴　君，郭重仪，黄　萍*

(1.广州中医药大学科技产业园，广州　510445；2.广州中医药大学，广州　510006；3.山东中医药高等专科学校，烟台　264100；4.暨南大学，广州　510632)



乌鸡白凤丸治疗原发性痛经的实验研究

郭起岳1，吴清和2，操红缨2，茹丽1，刘婵1，吴君3，郭重仪4，黄萍2*

(1.广州中医药大学科技产业园，广州510445；2.广州中医药大学，广州510006；3.山东中医药高等专科学校，烟台264100；4.暨南大学，广州510632)

目的探讨乌鸡白凤丸治疗原发性痛经的作用机制。方法利用缩宫素所致SD雌性大鼠痛经模型，观察乌鸡白凤丸不同剂量对大鼠扭体潜伏期、30min内扭体发生率和扭体次数、子宫组织中PGF2α和PGE2含量的影响；采用常规方法制备大鼠离体子宫标本，通过BL-420E生物机能实验系统，以大鼠子宫平滑肌条的平均张力和收缩频率作为评价指标，观察不同剂量乌鸡白凤丸对大鼠子宫肌收缩活动及缩宫素所致子宫痉挛的作用。结果乌鸡白凤丸能明显延长痛经模型大鼠扭体潜伏期，降低30min内扭体发生率，减少扭体次数(P<0.01)；能明显降低痛经模型大鼠子宫组织中PGF2α的含量(P<0.01)，升高PGE2的含量(P<0.05)，降低PGF2α/PGE2比值(P<0.01)；可显著降低大鼠正常子宫和缩宫素引起的痉挛子宫平滑肌条的平均张力和收缩频率(P<0.01)。结论乌鸡白凤丸对原发性痛经造成的疼痛具有良好的改善作用，其作用机制可能与调节子宫组织内PGF2α和PGE2含量及抑制子宫收缩相关。

乌鸡白凤丸；原发性痛经；大鼠痛经模型；前列腺素；离体

原发性痛经又称功能性痛经，是指月经前后或月经期在生殖器官无器质性病变存在时发生的下腹疼痛、坠胀及其他不适感，临床主要表现为下腹部痉挛性疼痛。流行病学研究表明，原发性痛经是目前妇科最常见的疾病之一，根据疼痛强度、对工作能力的影响和对镇痛药的需求程度可将痛经分为轻度、中度和重度[1]。国内抽样调查表明，我国妇女痛经发生率为33.1%，其中原发性者占53.2%[2]，主要发生群体为青春期少女和未婚或未育的年轻妇女[3]。乌鸡白凤丸是传统妇科良药，全方配伍，药性平和，不寒不躁；具有补气养血、调经止带之功效；临床上用于气血两虚、身体虚弱、腰膝酸软、月经不调和崩漏带下等症。近年来，其治疗价值在临床上得到肯定，其作用机制被现代药理学研究所证实[4-6]，但用于治疗原发性痛经的报道却不多。本研究以原发性痛经的发病因素为着眼点，旨在通过观察乌鸡白凤丸对痛经模型大鼠的镇痛作用和前列腺素含量的影响，同时观察对大鼠离体子宫平滑肌收缩功能和缩宫素引起的大鼠离体子宫平滑肌收缩功能的作用，探讨乌鸡白凤丸治疗原发性痛经的作用机制，为临床用药提供药效学实验依据。

1　仪器与材料

1.1仪器RT-2100C酶标仪(深圳雷社生命科学股份有限公司)；BL-420E生物机能实验系统,HW-400S恒温平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)。

1.2试药乌鸡白凤丸(干膏粉)(广州陈李济药厂)，临床口服，1次3.5g，每日2次；阿司匹林(印尼拜耳公司)，批号为BTA6EA，0.1g/片;月月舒(冲剂)(河南省宛西制药股份有限公司)，每袋10g，临床剂量为每次1袋，每日2次；己烯雌酚注射液(广州白云山明兴制药有限公司)，1mL/支，1mL∶2mg；缩宫素(上海第一生化药业有限公司)，10u/支。大鼠前列腺素F2α酶联免疫检测试剂盒,大鼠前列腺素E2酶联免疫检测试剂盒(上海卓康生物科技有限公司)。

1.3动物SD大鼠，SPF级，体质量180～220g，雌性，由广东省实验动物中心提供，生产许可证号为SCXK(粤)2003-0002，动物饲料也由该中心提供。

2　方法

2.1对缩宫素致痛经模型大鼠的影响选取70只雌性SD大鼠，随机分为空白对照组、模型对照组、阿司匹林组、月月舒组和乌鸡白凤丸低、中、高剂量组，每组10只。从第1天开始，连续皮下注射己烯雌酚注射液10d(人工造成动物处于相同的动情期，以便提高子宫平滑肌对药物的敏感性)，每日1次，第1天每只大鼠 0.8mg，第2～9天每只大鼠0.4mg，第10天每只大鼠0.8mg。从第5天开始对大鼠按照20mL·kg-1的体质量灌胃给药，空白对照组与模型对照组分别给予等体积的蒸馏水，每日1次，连续7d。末次注射己烯雌酚24h、给药(蒸馏水)1h后，腹腔注射缩宫素2U/只，观察30min内大鼠的疼痛反应，以扭体反应(大鼠腹部收缩内凹，躯干与后肢伸展，臀部与一侧肢体内旋)为子宫强烈收缩(痛经)的指标，包括扭体发生率、潜伏期及次数。扭体发生率=发生扭体动物数/10×100%。观察30min后，处死大鼠，剥离大鼠子宫，用精密仪器称取0.5g，加1mL生理盐水，匀浆，离心，取上清液，采用大鼠前列腺素F2α酶联免疫检测试剂盒、大鼠前列腺素PGE2酶联免疫检测试剂盒检测PGF2α和PGE2含量[7-8]。

2.2对大鼠离体子宫肌收缩活动的影响取成年未孕正常雌性SD大鼠8只，实验前皮下注射己烯雌酚0.5mg·kg-1，连续3d，以促其处于动情前期或动情期，提高子宫对药物的敏感性。实验时，用颈椎脱臼法处死大鼠，迅速剪开腹腔，轻轻剥离子宫周围脂肪组织，穿线结扎阴道端，剪取长约2cm的子宫，立即置于盛有洛氏液的玻璃平皿中，小心清除残留的结缔组织和脂肪，阴道端固定于盛有洛氏液浴槽的L形通气管小钩上，另一端与肌力换能器相连。恒温水浴保持工作温度为37±0.5 ℃，并不断向工作液中通入氧气，记录肌条的等长收缩。待子宫舒缩稳定后，记录一段正常活动曲线作为对照。然后采取累积给药方式，向浴槽中加入乌鸡白凤丸药液，使其终质量浓度分别达到0.5，1.0和2.0mg·mL-1，记录每次给药后10min内子宫收缩曲线，观察大鼠子宫平滑肌条的平均张力(g)和收缩频率(次·10min-1)。药物剂量指浴槽中的终质量浓度。洛氏液实验前配制：氯化钠9g，氯化钾 0.42g，氯化钙0.21g，碳酸氢钠0.1～0.3g，葡萄糖1.0～2.5g，加蒸馏水至1 000mL[9-10]。2.3对缩宫素所致离体子宫痉挛的影响取成年未孕正常雌性SD大鼠8只，实验前皮下注射己烯雌酚0.5mg·kg-1，连续3d，以促其处于动情前期或动情期，提高子宫对药物的敏感性。实验时，用颈椎脱臼法处死大鼠，迅速剪开腹腔，轻轻剥离子宫周围脂肪组织，穿线结扎阴道端，剪取长约2cm的子宫，立即置于盛有洛氏液的玻璃平皿中，小心清除残留的结缔组织和脂肪，阴道端固定于盛有洛氏液浴槽的L形通气管小钩上，另一端与肌力换能器相连。恒温水浴保持工作温度为37±0.5 ℃，并不断向工作液中通入氧气，记录肌条的等长收缩。子宫舒缩稳定后，记录一段正常活动曲线，然后加入缩宫素0.1u(终浓度为0.005u·mL-1)，待曲线收缩平衡，记录10min内子宫收缩曲线后，采取累积给药，向浴槽中加入乌鸡白凤丸药液，使其终质量浓度分别达到0.5，1.0和2.0mg·mL-1，记录每次给药后10min内子宫收缩曲线，观察大鼠子宫平滑肌条的平均张力(g)和收缩频率(次·10min-1)。药物剂量指浴槽中的终质量浓度。洛氏液实验前配制：氯化钠 9g，氯化钾0.42g，氯化钙0.21g，碳酸氢钠0.1～0.3g，葡萄糖1.0～2.5g，加蒸馏水至1 000mL[9-10]。

2.4统计方法所有数据均采用统计软件SPSS13.0进行统计，多组间比较采用方差分析法。

3　结果

3.1对缩宫素致痛经模型大鼠的影响与正常对照组比较，模型对照组大鼠扭体发生率增加(P<0.01)，扭体潜伏期缩短(P<0.01)；30 min内扭体次数增多(P<0.01)；子宫组织PGF2α含量增加(P<0.01)，PGE2含量降低(P<0.05)，PGF2α/PGE2比值增高(P<0.01)。与模型对照组比较，乌鸡白凤丸中、高剂量和月月舒及阿司匹林对缩宫素所致大鼠的扭体潜伏期和30 min内扭体次数具有明显的抑制作用，可降低PGF2α/PGE2比值(P<0.01)；乌鸡白凤丸高剂量、月月舒及阿司匹林可降低大鼠子宫内膜中的PGF2α含量(P<0.05～0.01)，增加大鼠子宫内膜中PGE2含量(P<0.05)。见表1～2。

表1乌鸡白凤丸对缩宫素所致大鼠疼痛扭体反应的影响

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01；与空白对照组比较▲P<0.05，▲▲P<0.01。

表2乌鸡白凤丸对大鼠子宫组织PGF2α和PGE2的影响

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01;与空白对照组比较▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3.2对大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响乌鸡白凤丸中、高剂量可降低大鼠子宫平滑肌条的平均张力(P<0.05)；乌鸡白凤丸低、中、高剂量可降低大鼠子宫平滑肌条的收缩频率(P<0.05)。见表3。

3.3对缩宫素所致离体子宫痉挛的影响大鼠子宫平滑肌条在加入缩宫素后的平均张力和收缩频率升高(P<0.01)；乌鸡白凤丸中、高剂量可降低大鼠子宫平滑肌条在加入缩宫素后的平均张力(P<0.01)；乌鸡白凤丸低、中、高剂量可降低大鼠子宫平滑肌条在加入缩宫素后的收缩频率(P<0.01)。见表4。

表3乌鸡白凤丸对大鼠正常离体子宫的影响

注：*与给药前正常值比较P<0.05。

表4乌鸡白凤丸对缩宫素诱发大鼠离体子宫收缩的影响

注：**与给缩宫素前正常值比较P<0.01；▲▲与缩宫素组比较P<0.01。

4　讨论

现代医学认为，子宫内膜产生和释放的PGF2α过多，导致PGF2α/PGE2比值过度升高，高浓度的PGF2α作用于螺旋小动脉壁上的PGF2α受体，引起子宫平滑肌痉挛性收缩，表现为子宫平滑肌张力增高、收缩幅度增加等，导致子宫血流减少、子宫缺血及骨盆神经末梢对化学、物理刺激痛阈降低等。子宫异常收缩、缺血及缺氧，酸性代谢产物堆积于肌层而导致痛经[11-14]。由实验可知，乌鸡白凤丸能很好地抑制痛经模型大鼠的扭体发生率、扭体潜伏期和30min内扭体次数。拮抗缩宫素诱发大鼠子宫肌痉挛所致疼痛反应，降低大鼠子宫内膜中PGF2α的含量，升高子宫内膜中PGE2的含量，进而引起PGF2α/PGE2比值的升高；同时，乌鸡白凤丸还对正常大鼠离体子宫平滑肌具有明显的抑制作用，能明显对抗缩宫素所致的子宫平滑肌强烈收缩，使收缩频率显著减少，子宫平均张力显著减弱，能缓解子宫平滑肌的痉挛性收缩。由此可知，乌鸡白凤丸可抑制原发性痛经引起的子宫痉挛疼痛，这与其本身可抑制子宫异常收缩的作用有关，同时与其降低子宫内膜中PGF2α的含量和升高子宫内膜中PGE2的含量、升高PGF2α/PGE2比值的作用相关。

乌鸡白凤丸作为中医传统名贵中成药，近些年来，其治疗价值在妇科领域进一步得到肯定，在内科、骨科、传染科和男科诸多领域也得到广泛地证实和应用。本实验通过验证乌鸡白凤丸对实验性痛经的治疗作用，初步探讨其作用机制，从而为乌鸡白凤丸临床上用于治疗原发性痛经提供了一定的药效学依据。

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Study on the treatment on primary dysmenorrhea with Wujibaifeng Pills

GUO Qiyue1，WU Qinghe2，CAO Hongying2，RU Li1，LIU Chan1，WU Jun3，GUO Zhongyi4，HUANG Ping2*

(1.Sci-tech Industrial Park，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510445，China；2.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China；3.Shandong College of Traditional Chinese Medicine，Yantai 264100，China；4.Jinan University，Guangzhou 510632，China)

ObjectiveToexplorethetherapeuticmechanismofWujibaifengPills.MethodByusingthedysmenorrheamodelofSDfemaleratsinducedbyoxytocin，theeffectofdifferentdosesofWujibaifengPillsonlatencyperiodoftwistbodyofratswasobserved，theincidenceandnumberoftwistbodyin30minsweremeasured，andthecontentofPGF2αandPGE2ofuteruswasdetected；byroutinemethod,thespecimenofuteruswereprepared，accordingtotheevaluateaveragetensionandcontractilityfrequencyofuterinesmoothmuscle(bybiologicalandfunctionalexperimentalsystem-BL-420E)，thecontractilityandcramping(oxytocin-induced)ofuterusatdifferentdosesofWujibaifengPillswereexplored.ResultAfteradministeredWujibaifengPills，thelatencyperiodoftwistbodyofprimarydysmenorrhearatswasobviouslyextended，theincidenceandnumberoftwistbodyin30minswasmarkedlyreduced(P<0.01)；thecontentofPGF2αofprimarydysmenorrhealrats′uteruswaslargelydecreased(P<0.01)，PGE2increased(P<0.05)andtheratioofPGF2α/PGE2significantlydecreased(P<0.01).Theaveragetensionandcontractionfrequencyofnormalorcramping(oxytocin-induced)uterinesmoothmusclewereremarkablylowered(P<0.01).ConclusionWujibaifengPillscouldvisiblyimprovethepainofprimarydysmenorrhea，andthemechanismislikelyrelatedtoregulatingthecontentofPGF2αandPGE2ofuterusandinhibitingthecontractionofuterus.

WujibaifengPills；primarydysmenorrhea；dysmenorrheamodelofrats；prostaglandin(PG)；uterus

广东省部产学研专项资金企业创新平台(编号：2013B090800013)

郭起岳，男，硕士，主管中药师

黄萍，女，教授，博士生导师

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.013

R965

A

1004-2407(2016)05-0482-04

2015-12-20)