HPLC法同时测定复方康肤搽剂中两组分含量

何德云，钟元高，廖海燕，申冬妮，韩欢欢，张　涛，李　佳

HPLC法同时测定复方康肤搽剂中两组分含量

何德云，钟元高，廖海燕，申冬妮，韩欢欢，张涛，李佳

目的建立HPLC法测定复方康肤搽剂中水杨酸和醋酸地塞米松的含量的方法。方法采用Agilent 1100高效液相色谱仪同时测定复方康肤搽剂中水杨酸和醋酸地塞米松的含量，色谱柱Agilent 5hC-C18(2)（4.6 mm×250 mm；5 μm）；流动相为：0.025 mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH至3.0）∶乙腈（60∶40），检测波长240 nm，柱温30℃，进样量10 μl。结果水杨酸在1.068～10.68 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为：Y=1887X+325.74（r=0.9997）；醋酸地塞米松在0.0202～0.2018 μg范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程为：Y=2055.4X+0.1304（r=1）；水杨酸和醋酸地塞米松样品平均回收率分别为100.91%（RSD=0.38%）和101.67%（RSD=0.94%）。结论该方法操作简单，定量准确，适合该制剂中两组分含量的同时测定。

HPLC；复方康肤搽剂；水杨酸；醋酸地塞米松；含量测定

1　仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪（Agilent1100，美国），优普系列超纯水器（UPT-Ⅰ，成都超纯科技有限公司），电子分析天平（BT25S，赛多利斯，德国）。

1.2试药醋酸地塞米松对照品（100122-200805，纯度99.6%，中国药品生物制品检定所），水杨酸对照品（100106-201104，纯度99.9%，中国食品药品检定研究院）；无水乙醇[20100201，重庆川东化工 （集团）有限公司化工试剂厂]，磷酸二氢钾（20130413，成都市科龙化工试剂厂），色谱乙腈（A998-4，Fisher Scientific），均为分析纯；超纯水（自制），复方康肤搽剂（批号：20131106、20131128、20131209，某医院自制）。

2　方法与结果

2.1溶液制备

2.1.1混合对照品溶液制备精密称取醋酸地塞米松对照品10.13 mg，置100 ml量瓶，加75%乙醇溶解、稀释至刻度，摇匀，作为A液（贮备液）；再精密称取水杨酸对照品10.69 mg置10 ml量瓶中，加75%乙醇溶解、稀释至刻度，摇匀，作为B液（贮备液）。精密量取A液1 ml、B液5 ml置10 ml量瓶中，加75%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

2.1.2供试品溶液制备精密量取复方康肤搽剂2 ml置200 ml量瓶中，加75%乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，即得。

2.1.3阴性对照溶液制备按照处方工艺制备除醋酸地塞米松和水杨酸的样品溶液100 ml，参照2.1.2项下方法制备成阴性对照溶液。

2.2色谱条件与专属试验

2.2.1色谱条件色谱柱：Agilent 5hC-C18(2) （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.025 mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH至3.0）∶乙腈（60∶40）；柱温30℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：240 nm；进样量：10 μl。

2.2.2专属性试验分别吸取混合对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl，照上述色谱条件进行分析，结果显示，阴性对照溶液在醋酸地塞米松和水杨酸出峰处未检出，色谱峰分离度>1.5，表明该方法专属性良好。由于处方中水杨酸量为醋酸地塞米松量的50倍，使水杨酸色谱峰高明显高于醋酸地塞米松，为了使色谱图清晰、明了，本研究附放大后图谱（图1）。

2.3方法学考察

2.3.1线性关系考察精密吸取“2.1.1”项下混合对照品溶液2、4、8、10、15、20 μl，照上述色谱条件分别注入液相仪，记录醋酸地塞米松和水杨酸的进样量（μg）与峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标进行线性回归，得醋酸地塞米松和水杨酸线性回归方程分别为Y=2055.4X+0.1304，r=1 （n=6）；Y=1887X+325.74，r=0.9997(n=6)，结果表明，醋酸地塞米松和水杨酸分别在 0.0202～0.2018 μg 和1.068～10.68 μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.2精密度试验取混合对照品溶液，照上述色谱条件依次连续进样6次，每次10 μl，记录两组分峰面积，以峰面积计算RSD。结果：醋酸地塞米松和水杨酸RSD分别为0.7%（n=6）和0.9%（n=6），表明该方法精密度好。

2.3.3重复性试验取批号为20131106复方康肤搽剂，按“2.1.2”条件制备供试品溶液6份，照上述色谱条件下进行分析，记录两组分峰面积，以峰面积计算RSD。结果：醋酸地塞米松和水杨酸RSD分别为0.8%（n=6）和1.1%（n=6），表明该方法重复性好。

2.3.4稳定性试验取批号为20131106样品稀释溶液，1 d内依次在第2、4、6、10、16、20、24h，按上述色谱条件进行分析，记录两组分峰面积，以峰面积计算RSD。结果：醋酸地塞米松和水杨酸RSD分别为1.4%（n=7）和1.5%（n=7），表明该样品在24h内稳定。

2.3.5加样回收试验精密量取批号为20131106复方康肤搽剂（含醋酸地塞米松1.02 mg/ml，水杨酸50.22 mg/ml）1 ml置200 ml量瓶中，再精密称取醋酸地塞米松和水杨酸对照品，按上述取样量80%、100%、120%投料，制备成3个不同梯度的供试品溶液各3份，照2.1.1项下色谱条件进行分析，计算回收率，得醋酸地塞米松和水杨酸的平均回收率分别为 101.67%和 100.91%，RSD分别为 0.94%和0.38%。

图1　专属性试验高效液相色谱图（放大后图谱）

2.4样品含量测定将 20131106、20131128、20131209三个批次样品按照“2.1.2”方法处理，每个批次平行取2份，每份样品溶液按照“2.2.1”项下色谱条件方法依次进样2次，记录醋酸地塞米松和水杨酸的峰面积及出峰时间；再精密称取醋酸地塞米松和水杨酸对照品各2份，照“2.1.1”项下方法制备混合对照品溶液，照上述色谱条件进样分析，记录两组分峰面积及出峰时间，以外标法计算样品的含量，结果见表1。

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3　讨论

复方康肤搽剂属于医院非标准制剂，主要成分为醋酸地塞米松和水杨酸，且水杨酸量为醋酸地塞米松的50倍，其含量测定标准为高效液相色谱法测定醋酸地塞米松的含量，并未对水杨酸含量做具体规定。而水杨酸在处方中占的比例相当大，为了保障患者用药安全，本研究建立了能同时测定醋酸地塞米松和水杨酸含量的方法，通过验证，该方法具有一定可行性。

本研究以流动相为空白，对醋酸地塞米松和水杨酸对照品分别在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果显示，醋酸地塞米松在240 nm有最大吸收，水杨酸在230 nm有最大吸收。由于处方中醋酸地塞米松含量为水杨酸含量的1/50，为了使醋酸地塞米松在检测中得到最大的响应，故本研究采用240 nm作为检测波长。

针对水杨酸和醋酸地塞米松的化学特性，以及二者的极性，笔者以0.025 mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH至3.0）∶乙腈（60∶40）为流动相进行分析，结果显示，水杨酸保留时间为4.9 min左右，醋酸地塞米松保留时间为21.8 min左右，二者分离度完全符合《中国药典》标准。

本研究结果表明，本文建立的方法，同时测定复方康肤搽剂中醋酸地塞米松和水杨酸的精密度、重复性、稳定性及加样回收率均符合 《中国药典》2010年版二部 附录ⅪⅩ规定，适合用于该制剂的质量控制和监督。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：1120-1122.

[2]高宋田.HPLC法测定醋酸地塞米松溶液的含量[J].海峡药学，2008，20（11）：33.

[3]李大平，刘志武.高效液相色谱法测定醋酸地塞米松搽剂Ⅱ号中醋酸地塞米松的含量[J].中南药学，2009，7（7）：557.

[4]林强.高效液相色谱法测定氯霉素地塞米松搽剂中二组分的含量[J].海峡药学，2006，18（4）：86-88.

[5]罗健，叶良君，李旭峰.紫外分光光度法测定醋酸地塞米松涂剂中醋酸地塞米松的含量[J].中国现代医学杂志，2003,13 （24）：117.

Simultaneous determination of two components content in compound Kangfu liniment byhPLC method

He Deyun,Zhong Yuangao,Liaohaiyan,Shen Dongni,Hanhuanhuan,Zhang Tao,Li JiaInstitute for Drug and Instrument Control of Chengdu Military Command,Chengdu,Sichuan,610017,China

ObjectiveTo establish a determination method of salicylic acid and dexamethasone acetate content in compound Kangfu liniment byhPLC.MethodsAgilent 1100hPLC was used to simultaneously determinate the content of salicylic acid and dexamethasone acetate in compound Kangfu liniment.The column was agilent 5hC-C18(2)(4.6 mm×250 mm;5 μm);mobile phase was 0.025 mol/L potassium dihydrogen phosphate(pH=3.0)∶acetonitrile(60∶40);the detection wavelength was 240 nm;the column temperature was 30℃;and the injection volume was 10 μl.ResultsSalicylic acidhad a good linear correlation with the peak area within the range of 1.068 μg to 10.68 μg,and the regression equation wasY=1887X+325.74(r=0.9997).Dexamethasone acetatehad a good linear correlation with the peak area within the range of 0.0202 μg to 0.2018 μg,and the regression equation wasY=2055.4X+0.1304(r=1).The average sample recovery rates of salicylic acid and dexamethasone acetate were 100.91%(RSD= 0.38%)and 101.67%(RSD=0.94%),respectively.ConclusionHPLC methodhas the advantages of easy operation and accurate quantitation,which is suitable for the simultaneous content determination of salicylic acid and dexamethasone acetate in compound Kangfu liniment.

HPLC;compound Kangfu liniment;salicylic acid;dexamethasone acetate;content determination

R 927.2

A

1004-0188（2016）01-0014-04

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.01.005

610017成都，成都军区药品仪器检验所

复方康肤搽剂为医院非标准制剂，主要由醋酸地塞米松和水杨酸组成，制备工艺简单，临床用于治疗银屑病、神经性皮炎及结节性痒症等。《中国人民解放军非标准制剂标准》主要是利用高效液相色谱法测定醋酸地塞米松含量，并未对水杨酸含量做具体要求。通过查阅相关文献，醋酸地塞米松和水杨酸含量测定方法主要有高效液相色谱法、紫外分光光度法[1-5]。笔者对复方康肤搽剂的质量标准进行了初步研究，采用HPLC法同时测定该制剂中醋酸地塞米松和水杨酸含量，为质量标准进一步修订提供参考。

（2015-01-07）